прадукт

Набор для канкурэнтнага імунаферментнага аналізу для колькаснага аналізу метабаліту фуразолідона (AOZ)

Кароткае апісанне:

Гэты набор ІФА прызначаны для выяўлення АОЗ на аснове прынцыпу ўскосна-канкурэнтнага імунаферментнага аналізу.Лункі мікратытратара пакрытыя антыгенам, звязаным з захопам BSA.AOZ ва ўзоры канкуруе з антыгенам, пакрытым на мікратытрацыйнай пласціне, за дададзеныя антыцелы.Пасля дадання ферментнага кан'югата выкарыстоўваецца храмагенны субстрат і сігнал вымяраецца спектрафатометрам.Паглынанне зваротна прапарцыйна канцэнтрацыі AOZ ва ўзоры.


Дэталь прадукту

Тэгі прадукту

Набор для канкурэнтнага імунаферментнага аналізу

Колькасны аналізФуразолидон метабаліт(AOZ)

 

  1. 1.Фон

Нитрофураны - гэта сінтэтычныя антыбіётыкі шырокага спектру дзеяння, якія часта выкарыстоўваюцца ў жывёлагадоўлі з-за выдатных антыбактэрыйных і фармакокинетических уласцівасцяў.Яны таксама выкарыстоўваліся ў якасці стымулятараў росту ў свінагадоўлі, птушкагадоўлі і воднай вытворчасці.У доўгатэрміновых даследаваннях на лабараторных жывёлах паказана, што зыходныя прэпараты і іх метабаліты валодаюць канцэрагеннымі і мутагеннымі характарыстыкамі.Гэта прывяло да забароны нітрафуранаў для лячэння жывёл, якія выкарыстоўваюцца для вытворчасці прадуктаў харчавання.Нитрофурановые прэпараты фуралтадон, нитрофурантоин і нитрофуразон былі забароненыя да выкарыстання ў жывёлагадоўлі ў ЕС у 1993 годзе, а выкарыстанне фуразолидона было забаронена ў 1995 годзе.

Аналіз рэшткаў нитрофурановых прэпаратаў павінен грунтавацца на выяўленні звязаных з тканінай метабалітаў зыходных прэпаратаў нитрофуранового тыпу.Паколькі зыходныя прэпараты вельмі хутка метаболізіруются і метабаліты нітрафурану, звязаныя з тканінамі, захоўваюцца на працягу доўгага часу, гэтыя метабаліты выкарыстоўваюцца ў якасці мішэні пры выяўленні злоўжывання нітрафуранамі, якія ўключаюць метабаліт фуразолідона (AOZ), метабаліт фуралтадона (AMOZ). ), метабаліт нитрофурантоина (AHD) і метабаліт нитрофуразона (SEM).

Рэшткі AOZ часцей за ўсё вызначаюць метадам ВХ-МС або ВХ-МС/МС.Імунаферментныя аналізы ў параўнанні з храматаграфічнымі метадамі паказваюць значныя перавагі па адчувальнасці, мяжы выяўлення, тэхнічнай аснашчанасці і патрабаванням часу.(Кошт часу: 45 хвілін)

  1. 2.Прынцып тэсту

Гэты набор ІФА прызначаны для выяўлення АОЗ на аснове прынцыпу ўскосна-канкурэнтнага імунаферментнага аналізу.Лункі мікратытратара пакрытыя антыгенам, звязаным з захопам BSA.AOZ ва ўзоры канкуруе з антыгенам, пакрытым на мікратытрацыйнай пласціне, за дададзеныя антыцелы.Пасля дадання ферментнага кан'югата выкарыстоўваецца храмагенны субстрат і сігнал вымяраецца спектрафатометрам.Паглынанне зваротна прапарцыйна канцэнтрацыі AOZ ва ўзоры.

  1. 3.Прыкладанні

Гэты набор можа быць выкарыстаны для колькаснага і якаснага аналізу рэшткаў AOZ утканіны жывёлы(мышцы, печань і інш.), мёд.

  1. 4.Крыжаваныя рэакцыі

Метабаліт фуразолидона (AOZ)……………………..100%

Метабаліт фуралтадона (AMOZ)……………………<0,1%

Метабаліт нітрафурантаіну (AHD)……………………<0,1%

Метабаліт нітрафуразону (SEM)…………………...<0,1%

Фуразолідон……………………………………….…..…16,3%

Фуралтадон…………………………………………….…<1%

Нітрафурантаін……………………………………….…….…<1%

Нітрафуразон…………………………………………..…<1%

  1. 5.Неабходныя матэрыялы

5.1Абсталяванне

----Спектрафатометр мікратытрацыйнай пласціны (450 нм/630 нм)

---- Ротарны выпарнік або прыборы для сушкі азотам

---- Гамагенізатар / страўнікаўка

----Шэйкер

----Віхравы міксер

---- Цэнтрыфуга

----Аналітычныя вагі (індуктыўнасць: 0,01 г)

---- Градуяваная піпетка: 10 мл

----Гумавая піпетка

---- Мерная колба: 100 мл

---- Шкляная колба: 10 мл

----Полістырольная цэнтрыфужная прабірка: 2 мл, 50 мл

---- Мікрапіпеткі: 20 мкл-200 мкл, 100 мкл-1000 мкл,

250 мкл-мультипипетка

5.2Рэагенты

----Этылацэтат (AR)

---- н-гексан (ці н-гептан) (AR)

----Трыгідрат гідрафасфату калія

(K2HPO4.3H2O) (AR)

---- Канцэнтраваная саляная кіслата (HCl, AR)

-----Метанол

---- Гідраксід натрыю (NaOH, AR)

---- Дэіянізаваная вада

  1. 6.Камплектуючыя

l Планшэт для мікратытрацыі, пакрыты антыгенам, 96 лунак

l Стандартныя растворы (6 бутэлек, 1 мл/бутэлька)

0ppb,0,025ppb,0,075ppb,0,225ppb,0,675ppb,2,025ppb

l Стандартны кантроль: (1 мл/бутэлька)....….100 частак на мільярд

l Канцэнтраваны ферментны кан'югат 1 мл.......чырвоны каўпачок

l Разбаўляльнікі ферментнага кан'югата 10 мл………..зялёны каўпачок

l Субстрат A 7 мл…………………………..…..белы каўпачок

l Субстрат B 7 мл………………………….…..чырвоны каўпачок

l Стоп-раствор 7 мл……………………………жоўты каўпачок

л 20 × канцэнтраваны раствор для мыцця 40 мл

…………………………………….……празрысты каўпак

l 2×канцэнтраваны экстракцыйны раствор 60 мл….сіні каўпачок

л 2-нітрабензальдэгід 15,1 мг………………белы каўпачок

  1. 7.Падрыхтоўка рэагентаў

Рашэнне 1: вытворны рэагент:

Дадайце 10 мл метанолу ў бутэльку з 2-нітрабензальдэгідам і растварыце.(у канцэнтрацыі 10мМ).

Рашэнне 2: 0,1МК2HPO4рашэнне:

Вага 22,8 г K2HPO4.3H2O да 1 л дэіянізаванай вады для растварэння.

Рашэнне 3: 1M раствор HCl

Растворыце 8,3 мл канцэнтраванай салянай кіслаты дэіянізаванай вадой да 100 мл.

Рашэнне 4:1М раствор NaOH

Растворыце 4 г NaOH у 100 мл дэіянізаванай вады.

Рашэнне 5: экстракцыйны раствор:

Развядзіце 2× канцэнтраваны экстракцыйны раствор дэіянізаванай вадой у аб'ёмных суадносінах 1:1.Гэты раствор можа захоўвацца на працягу 1 месяца пры тэмпературы 4 ℃, які будзе выкарыстоўвацца для здабывання проб.

Рашэнне 6: прамыўны раствор:

Развядзіце 20× канцэнтраваны раствор для прамывання дэіянізаванай вадой у аб'ёмным суадносінах 1:19, які будзе выкарыстоўвацца для прамывання пласцін.Гэты разведзены раствор можна захоўваць на працягу 1 месяца пры тэмпературы 4 ℃.

  1. 8.Падрыхтоўка ўзораў

8.1Заўвага і меры засцярогі перад пачаткам працы:

a) Калі ласка, выкарыстоўвайце аднаразовыя наканечнікі ў эксперыменце і змяняйце наканечнікі пры паглынанні розных рэагентаў.

б) Пераканайцеся, што ўсе эксперыментальныя інструменты чыстыя.

c) вытворны рэагент можна захоўваць пры тэмпературы 2-8 ℃ на працягу трох месяцаў;

d) Раствор HCl можна захоўваць пры пакаёвай тэмпературы на працягу 3 месяцаў;

д) Раствор NaOH можна захоўваць 3 месяцы пры пакаёвай тэмпературы;

f) Захоўвайце неапрацаваныя ўзоры ў замарозцы (-20 ℃);

g) Апрацаваныя ўзоры могуць захоўвацца на працягу 24 гадзін пры 2-8 ℃ у цемры.

8.2 Узоры тканін і печані жывёл:

----Гамагенізуйце ўзоры з дапамогай гомогенизатора;

---- Узважце 1,0±0,05 г гамагенізаванага ўзору тканіны ў цэнтрыфужную прабірку з полістыролу аб'ёмам 50 мл.Дадайце 4 мл дэіянізаванай вады, 0,5 мл 1 М раствора HCl і 100 мкл вытворнага рэагента (гл. раствор 1).Падтрасіце яго на працягу 2 хвілін.

---- Інкубуйце пры 37 ℃ на працягу ночы (каля 16 гадзін);

---- Дадаць 5мл 0,1МК2HPO4 (рашэнне2), 0,4 мл 1 М NaOH (рашэнне4) і 5 мл этилацетата.Моцна трэсці на працягу 30 секунд;

---- Цэнтрыфуга пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃) на працягу 10 хвілін, не менш за 3000 г;

---- Вазьміце 2,5 мл супернатанта арганічнай фазы ў чыстую шкляную прабірку аб'ёмам 10 мл, высушыце пры дапамозе азоту пры тэмпературы 50-60 ℃ або на ротарным выпарніку;

---- Растворыце сухія рэшткі ў 1 мл н-гексана (або н-гептана), змяшайце на вортэксі на працягу 30 секунд, дадайце 1 мл раствора для экстракцыі (рашэнне5), змяшайце 1 хвіліну, цалкам змяшайце.

---- Цэнтрыфуга пры пакаёвай тэмпературы (20-25oВ) за 5 хвілін не менш за 3000 г;

---- Выдаліць супернатант арганічнай фазы;вазьміце 50 мкл воднай фазы субстрата для аналізу.

 

8.4 Мёд

----узважыць 1,0±0,05 г гамагенізаванага ўзору мёду ў цэнтрыфужную прабірку з полістыролу аб'ёмам 50 мл;

---- Дадайце 4 мл дэіянізаванай вады, 0,5 мл 1 М HCl (рашэнне3) і 100 мкл вытворнага рэагента (рашэнне1);цалкам падтрасіце на працягу 2 хвілін;

----Інкубуйце пры 37 ℃ на працягу ночы (каля 16 гадзін);

----Дадаць 5мл 0,1МК2HPO4 (рашэнне2), 0,4 мл 1 М NaOH (рашэнне4) і 5 мл этылацэтату, моцна падтрасіце на працягу 30 секунд;

---- Цэнтрыфуга пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃) на працягу 10 хвілін, не менш за 3000 г;

---- Вазьміце 2,5 мл супернатанта арганічнай фазы ў чыстую шкляную прабірку аб'ёмам 10 мл, высушыце пры дапамозе азоту пры 50-60 ℃ або на ротарным выпарніку;

----Растворыце сухія рэшткі ў 1 мл н-гексана (або н-гептана), змяшайце на вортэксі на працягу 30 секунд, дадайце 1 мл раствора для экстракцыі (рашэнне5), змяшайце 1 хвіліну, цалкам змяшайце.

---- Цэнтрыфуга пры пакаёвай тэмпературы (20-25oВ) за 10 хвілін не менш за 3000 г;

---- Выдаліць супернатант арганічнай фазы;вазьміце 50 мкл воднай фазы субстрата для аналізу.

  1. 9.Працэс аналізу

9.1Звярніце ўвагу перад аналізам

9.1.1 Пераканайцеся, што ўсе рэагенты і мікралункі маюць пакаёвую тэмпературу (20-25 ℃).

9.1.2 Вярніце ўсе астатнія рэагенты да 2-8 ℃ адразу пасля выкарыстання.

9.1.3 Правільнае прамыванне мікралунак з'яўляецца важным этапам у працэсе аналізу;гэта жыццёва важны фактар ​​для ўзнаўлення аналізу ELISA.

9.1.4 Пазбягайце святла і накрывайце мікралункі падчас інкубацыі.

9.2 Этапы аналізу

9.2.1 Дастаньце ўсе рэагенты пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃) больш чым на 30 хвілін, перад выкарыстаннем гамагенізуйце.

9.2.2 Дастаньце неабходныя мікралункі і неадкладна вярніце астатнія ў пакет на маланкі пры тэмпературы 2-8 ℃.

9.2.3 Канцэнтраваны раствор для прамывання і канцэнтраваны экстракцыйны раствор перад выкарыстаннем неабходна нагрэць да пакаёвай тэмпературы.

9.2.4нумар:Пранумаруйце кожную пазіцыю мікралункі і ўсе стандарты і ўзоры павінны быць праведзены ў двух экземплярах.Запішыце пазіцыі стандартаў і ўзораў.

9.2.5Развядзенне канцэнтраванага раствора антыцелаў: разбавіць канцэнтраваны раствор фермента разбаўляльнікам кан'югату фермента ў аб'ёмным суадносінах 1:10 (1-кратны канцэнтраваны раствор фермента: разбаўляльнік кан'югата фермента ў 10 разоў).

9.2.6Дадайце стандартны раствор / узор і раствор кан'югата фермента: дадаць 50 мкл стандартнага раствора або падрыхтаванага ўзору ў адпаведныя лункі, дадаць 50 мкл раствора кан'югата фермента.Акуратна змяшайце, падтрасаючы пласціну ўручную, і інкубуйце 30 хвілін пры 25 ℃ пад вечкам.

9.2.7памыцца: Акуратна зніміце вечка, выліце вадкасць з лунак і прамыйце лункі 250 мкл разведзенага раствора для прамывання (рашэнне6) з інтэрвалам 10с па 4-5 разоў.Убярыце рэшткі вады ўбіраючай паперай (астатнія бурбалкі паветра можна выдаліць нявыкарыстаным наканечнікам).

9.2.8Афарбоўка: Дадайце 50 мкл раствора субстрата A і 50 мкл раствора субстрата B у кожную лунку.Акуратна змяшайце, калыхаючы пласціну ўручную, і інкубуйце 15 хвілін пры 25 ℃ пад вечкам (гл. 12.8).

9.2.11Вымерайце: Дадайце 50 мкл стоп-раствора ў кожную лунку.Акуратна змяшайце, калыхаючы пласціну ўручную, і вымерайце паглынанне пры 450 нм (рэкамендуецца вымяраць з падвойнай даўжынёй хвалі 450/630 нм. Прачытайце вынік на працягу 5 хвілін пасля дадання стоп-раствора.)

10 Вынікі

10.1Працэнтнае паглынанне

Сярэднія значэнні значэнняў абсорбцыі, атрыманыя для стандартаў і ўзораў, дзеляць на значэнне абсорбцыі першага стандарту (нулявога стандарту) і памнажаюць на 100%.Такім чынам, нулявы стандарт робіцца роўным 100%, а значэнні абсорбцыі прыведзены ў працэнтах.

=

B ——стандарт паглынання (або ўзор)

B0 ——нулявы стандарт абсорбцыі

10.2Стандартная крывая

----Каб намаляваць стандартную крывую: адкладзеце значэнне паглынання стандартаў па восі ординат, паўлагарыфмічнае ад канцэнтрацыі стандартнага раствора AOZ (ppb) па восі х.

---- Канцэнтрацыя AOZ кожнага ўзору (ppb), якую можна прачытаць з калібравальнай крывой, памнажаецца на адпаведны каэфіцыент развядзення кожнага ўзору, і атрымліваецца фактычная канцэнтрацыя ўзору.

Звярніце ўвагу:

Для скарачэння ўсіх дадзеных распрацавана спецыяльнае праграмнае забеспячэнне, якое можа быць прадастаўлена па запыце.

Каэфіцыент развядзення………………………………………..……2

10.Адчувальнасць, дакладнасць і дакладнасць

Адчувальнасць: 0,025 частак на мільярд

Мяжа выяўлення:

Тканіна (мышцы, печань)…………………………0,1ppb

Мёд -------------------------------------------------- -0,1 частак на мільярд

Дакладнасць:

Тканіна жывёл (мышцы і печань)…………………100±20%

Мёд…………………………………..………….... 100±20%

Дакладнасць:CV набору ІФА складае менш за 10%.

11.Заўвага

12.1 Сярэднія значэнні значэнняў абсорбцыі, атрыманыя для стандартаў і ўзораў, будуць зніжаны, калі рэагенты і ўзоры не былі даведзены да пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃).

12.2 Не дазваляйце мікралункам высыхаць паміж этапамі, каб пазбегнуць няўдалай узнаўлення, і выконвайце наступны этап адразу пасля таго, як пастукаеце па трымальніку мікралунак.

12.3 Акуратна ўзбоўтайце кожны рэагент перад выкарыстаннем.

12.4 Трымайце скуру далей ад стоп-раствора, бо гэта 0,5MH2SO4рашэнне.

12.5 Не выкарыстоўвайце састарэлыя наборы.Не мяняйце рэагенты розных партый, інакш адчувальнасць знізіцца.

12.6 Умовы захоўвання: Захоўвайце наборы ELISA пры тэмпературы 2-8 ℃, не замарожвайце.Запячатайце пласціны з мікралункамі, пазбягайце прамых сонечных прамянёў падчас усіх інкубацый.Рэкамендуецца накрываць мікратытрацыйныя пласціны.

12.7 Ад раствора субстрата варта адмовіцца, калі ён афарбуецца.Рэагенты могуць пагаршацца, калі значэнне паглынання (450/630 нм) нулявога стандарту менш за 0,5 (A450 нм<0,5).

12.8 Рэакцыя афарбоўвання патрабуе 15 хвілін пасля дадання раствора субстрата;Вы можаце падоўжыць час інкубацыі да 20 хвілін або больш, калі колер занадта светлы для вызначэння. Ніколі не перавышайце 25 хвілін. Наадварот, скараціце час інкубацыі належным чынам.

12.9 Аптымальная тэмпература рэакцыі - 25 ℃.Больш высокая або больш нізкая тэмпература прывядзе да змены значэнняў адчувальнасці і паглынання.

12.Умовы захоўвання і тэрмін захоўвання

Умовы захоўвання: 2-8 ℃.

Тэрмін захоўвання: 12 месяцаў.

 

 


  • Папярэдняя:
  • далей:

  • Напішыце тут сваё паведамленне і адпраўце яго нам

    Спадарожныя тавары