produkto

Konkurenciva Enzima Imuno-Analizo por Kvanta Analizo de Furazolidona metabolito (AOZ)

Mallonga priskribo:

Ĉi tiu ELISA ilaro estas desegnita por detekti AOZ surbaze de la principo de nerekta-konkurenciva enzima imunanalizo.La mikrotiterputoj estas kovritaj per kapta BSA-ligita antigeno.AOZ en specimeno konkuras kun la antigeno kovrita sur la mikrotiterplato por la antikorpo aldonita.Post la aldono de enzimkonjugato, kromogena substrato estas uzata kaj la signalo estas mezurata per spektrofotometro.La sorbado estas inverse proporcia al la AOZ-koncentriĝo en la provaĵo.


Produkta Detalo

Produktaj Etikedoj

Konkurenciva Enzima Imunotesta Ilaro por

Kvanta Analizo deFurazolidona metabolito(AOZ)

 

  1. 1.Fono

Nitrofuran'oj estas sintezaj larĝspektraj antibiotikoj, kiuj estas ofte utiligitaj en besta produktado por ĝiaj bonegaj kontraŭbakteriaj kaj farmakokinetaj trajtoj.Ili ankaŭ estis utiligitaj kiel kreskoreklamantoj en porko, kokaĵo kaj akva produktado.En longperspektivaj studoj kun laboratoriobestoj indikis ke la gepatraj medikamentoj kaj iliaj metabolitoj montris karcinogenajn kaj mutagenajn trajtojn.Tio kaŭzis malpermeson de nitrofuran'oj por la traktado de bestoj uzitaj por manĝproduktado.La nitrofuranmedikamentoj furaltadono, nitrofurantoin kaj nitrofurazone estis malpermesitaj de uzo en manĝbesta produktado en la EU en 1993, kaj la uzo de furazolidono estis malpermesita en 1995.

La analizo de restaĵoj de nitrofuranaj drogoj devas esti bazita sur la detekto de la histo-ligitaj metabolitoj de la nitrofuranaj gepatraj medikamentoj.Ĉar la gepatraj drogoj estas tre rapide metaboligitaj, kaj la histo-ligitaj nitrofuran-metabolitoj konservos por longa tempo, ĉi tiuj metabolitoj estas uzataj kiel la celo en la detekto de la misuzo de nitrofuranoj, kiuj inkluzivas Furazolidone-metaboliton (AOZ), Furaltadone-metaboliton (AMOZ). ), Nitrofurantoin-metabolito (AHD) kaj Nitrofurazona metabolito (SEM).

AOZ-restaĵoj estas determinitaj plej ofte per LC-MS aŭ LC-MS/MS.Enzimaj imunanalizoj, kompare kun kromatografiaj metodoj, montras konsiderindajn avantaĝojn koncerne sentemon, detektlimon, teknikan ekipaĵon kaj tempopostulon.(Tempokosto: 45 min)

  1. 2.Testa Principo

Ĉi tiu ELISA ilaro estas desegnita por detekti AOZ surbaze de la principo de nerekta-konkurenciva enzima imunanalizo.La mikrotiterputoj estas kovritaj per kapta BSA-ligita antigeno.AOZ en specimeno konkuras kun la antigeno kovrita sur la mikrotiterplato por la antikorpo aldonita.Post la aldono de enzimkonjugato, kromogena substrato estas uzata kaj la signalo estas mezurata per spektrofotometro.La sorbado estas inverse proporcia al la AOZ-koncentriĝo en la provaĵo.

  1. 3.Aplikoj

Ĉi tiu ilaro povas esti uzata en kvanta kaj kvalita analizo de AOZ-restaĵo enanimaj histoj(muskolo, hepato ktp), mielo.

  1. 4.Krucreagoj

Furazolidona metabolito (AOZ)………………………………..100%

Furaltadona metabolito (AMOZ)…………………………<0.1%

Nitrofurantoina metabolito (AHD)…………………………<0.1%

Nitrofurazona metabolito (SEM)………...…<0.1%

Furazolidono…………………………………………………………..…16.3%

Furaltadono…………………………………………………….…<1%

Nitrofurantoino………………………………………….…….…<1%

Nitrofurazono……………………………………………………..…<1%

  1. 5.Materialoj Bezonataj

5.1Ekipaĵoj

----Mikrotiterplata spektrofotometro (450nm/630nm)

----Rotacianta vaporigilo aŭ nitrogenaj sekigaj instrumentoj

----Homogenizilo /stomakilo

----Skuujo

----Vortex-miksilo

----Centrifugilo

----Analitika pesilo (indukto: 0.01g)

----Diplomita pipeto: 10ml

----Kaŭĉuka pipeta bulbo

----Volumfrako: 100ml

----Vitra flakono: 10ml

----Tubo de centrifugilo de polistireno: 2ml, 50ml

----Mikropipetoj: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2Reakciiloj

----Etilacetato (AR)

----n-heksano (aŭ n-heptano) (AR)

----Dipotassia hidrogena fosfato trihidrato

(K2HPO4.3H2O) (AR)

----Koncentrita klorida acido (HCl, AR)

-----Metanolo

----Natria hidroksido (NaOH, AR)

----Dejonigita akvo

  1. 6.Ilaro Komponantoj

l Microtiter plato kovrita per antigeno, 96 putoj

l Normaj solvoj (6 boteloj, 1 ml/botelo)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Pikiga norma kontrolo: (1 ml/botelo).......100ppb

l Koncentrita enzimkonjugacio 1ml.....ruĝa ĉapo

l Enzimaj konjugaciaĵoj 10ml………..verda ĉapo

l Substrato A 7ml………..............…....…..…..blanka ĉapo

l Substrato B 7ml………..............……….…..ruĝa ĉapo

l Haltiga solvo 7ml…………………………… flava ĉapo

l 20×koncentrita lava solvo 40ml

……………………………………………….……travidebla ĉapo

l 2×koncentrita eltira solvo 60ml….blua ĉapo

l 2-Nitrobenzaldehido 15.1mg……blanka ĉapo

  1. 7.Preparado de Reakciiloj

Solvo 1: deriva reakciilo:

Aldonu 10 ml da metanolo al la botelo havanta 2-Nitrobenzaldehidon kaj solvu.(ĉe la koncentriĝo de 10mM).

Solvo 2: 0.1MK2HPO4solvo:

Pezu 22,8 g K2HPO4.3H2O al 1L da dejonigita akvo por solvi.

Solvo 3: 1M HCl-solvo

Solvu 8,3 ml de koncentrita klorida acido kun dejonigita akvo ĝis 100 ml.

Solvo 4:1M NaOH solvaĵo

Solvu 4 g de NaOH kun 100 ml dejonigita akvo.

Solvo 5: eltira solvo:

Diluu 2 × koncentritan eltiran solvon kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:1.Ĉi tiu solvo povas esti konservita dum 1 monato je 4℃, kiu estos uzata por ĉerpi specimenojn.

Solvo 6: lava solvo:

Diluu la 20×koncentrigitan lavsolvon kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:19, kiu estos uzata por lavi la telerojn.Ĉi tiu diluita solvo povas esti konservita dum 1 monato je 4℃.

  1. 8.Specimenaj Preparoj

8.1Avizo kaj antaŭzorgoj antaŭ operacio:

a) Bonvolu uzi unufojajn konsiletojn en la eksperimento, kaj ŝanĝi la konsiletojn dum sorbado de malsama reakciilo.

b) Certiĝu, ke ĉiuj eksperimentaj instrumentoj estas puraj.

c) la derivita reakciilo povas esti konservita je 2-8℃ dum tri monatoj;

d) La HCl-solvo povas esti konservita ĉe ĉambra temperaturo dum 3 monatoj;

e) La NaOH-solvo povas esti konservita dum 3 monatoj ĉe ĉambra temperaturo;

f) Konservu netraktitajn specimenojn en frosto (-20 ℃);

g) Trakitaj specimenoj povas esti konservitaj dum 24h je 2-8℃ en mallumo.

8.2 Bestaj histoj kaj hepataj specimenoj:

----Homogeneigi la specimenojn per homogenigilo;

---- Pezu 1.0±0.05g de la homogenigita histo-provaĵo en 50ml polistirenan centrifugilon.Aldonu 4ml dejonigitan akvon, 0.5ml 1M HCl-solvon kaj 100ul-an derivitan reakciilon (vidu solvon 1).Skuu ĝin dum 2 minutoj.

---- Kovu je 37℃ dum la nokto (ĉirkaŭ 16h);

---- Aldonu 5ml 0.1MK2HPO4 (solvo2), 0.4ml 1M NaOH (solvo4) kaj 5ml etilacetato.Skuu forte dum 30-oj;

---- Centrifugu ĉe ĉambra temperaturo (20-25℃) dum 10min, almenaŭ 3000g;

---- Prenu 2,5 ml de la supernatanta organika fazo en puran vitran tubon de 10 ml, sekigi per 50-60℃ nitrogena gaso aŭ rotacianta vaporigilo;

---- Solvu la sekan restaĵon per 1ml n-heksano (aŭ n-heptano), vortigu dum 30s, aldonu 1ml eltiran solvon (solvo5), vortex 1min, miksi tute.

---- Centrifugu ĉe ĉambra temperaturo (20-25oC) dum 5 minutoj, almenaŭ 3000 g;

---- Forigu la supernatan organikan fazon;prenu 50μl de la substrata akvofazo por analizo.

 

8.4 Mielo

---- pezu 1.0±0.05g de la homogenigita mielprovaĵo en 50ml polistirenan centrifugilon;

----Aldonu 4ml dejonigitan akvon, 0.5ml 1M HCl (solvo3) kaj 100μl derivita reakciilo (solvo1);skui tute dum 2 minutoj;

----Kovu je 37℃ dum la nokto (ĉirkaŭ 16h);

----Aldonu 5ml 0.1MK2HPO4 (solvo2), 0.4ml 1M NaOH (solvo4) kaj 5ml etilacetato, tremu forte dum 30s;

---- Centrifugu ĉe ĉambra temperaturo (20-25℃) dum 10min, almenaŭ 3000g;

----Prenu 2.5ml de la supernatanta organika fazo en puran vitran tubon de 10ml, sekigi per 50-60℃ nitrogena gaso aŭ rotacianta vaporigilo;

---- Solvu la sekan restaĵon per 1ml n-heksano (aŭ n-heptano), vortigu dum 30s, aldonu 1ml eltiran solvon (solvo5), vortex 1min, miksi tute.

---- Centrifugu ĉe ĉambra temperaturo (20-25oC) dum 10 minutoj, almenaŭ 3000 g;

----Forigu la supernatan organikan fazon;prenu 50μl de la substrata akvofazo por analizo.

  1. 9.Procezo de analizo

9.1Rimarku antaŭ analizo

9.1.1 Certigu, ke ĉiuj reakciiloj kaj mikroputoj estas ĉiuj ĉe ĉambra temperaturo (20-25℃).

9.1.2 Remetu ĉiujn ceterajn reakcilojn al 2-8℃ tuj post uzo.

9.1.3 Lavi la mikroputojn ĝuste estas grava paŝo en la procezo de analizo;ĝi estas la esenca faktoro al la reproduktebleco de la ELISA-analizo.

9.1.4 Evitu la lumon kaj kovru la mikroputojn dum kovado.

9.2 Analizaj Paŝoj

9.2.1 Elprenu ĉiujn reakciulojn ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃) dum pli ol 30 minutoj, homogeniĝu antaŭ uzo.

9.2.2 Eligu la mikroputojn necesajn kaj redonu la reston en la zipŝlosan sakon je 2-8℃ tuj.

9.2.3 La koncentrita lavsolvo kaj koncentrita eltira solvo devas esti revarmigitaj por esti ĉe ĉambra temperaturo antaŭ uzo.

9.2.4Nombro:Numeritaj ĉiuj mikroputecaj pozicioj kaj ĉiuj normoj kaj specimenoj devas esti kuritaj duplikate.Registri la normojn kaj specimenajn poziciojn.

9.2.5Diluo de koncentrita antikorpa solvo: diluu la koncentritan enzimsolvon per enzimkonjugaciaĵo diluy en la volumenoproporcio de 1:10 (1-obla koncentrita enzimsolvo: 10-obla enzima konjugaciaĵo).

9.2.6Aldonu norman solvon / specimenon kaj enzimkonjugatan solvon: aldonu 50µl da norma solvo aŭ preta specimeno al respondaj putoj, aldonu 50µl da enzimkonjugaciaĵo.Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 30 minutoj je 25 ℃ kun kovrilo.

9.2.7Lavu: Forigu la kovrilon milde kaj verŝu la likvaĵon el la putoj kaj lavu la mikroputojn per 250µl diluita lavsolvo (solvo6) je intervalo de 10s por 4-5 fojojn.Sorbi la restan akvon per sorba papero (la cetera aerveziko povas esti forigita per neuzata pinto).

9.2.8Kolorigo: Aldonu 50µl-substratan solvaĵon A kaj 50ul-an substratan solvon B al ĉiu puto.Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 15 minutoj je 25℃ kun kovrilo (vidu 12.8).

9.2.11Mezuro: Aldonu 50µl la haltan solvon al ĉiu puto.Miksu milde skuante la teleron mane kaj mezuru la absorbadon je 450nm (Ĝi sugestis mezuri kun la duobla ondolongo de 450/630nm. Legu la rezulton ene de 5 minutoj post aldono de halta solvo. )

10 Rezulto

10.1Procenta absorbo

La averaĝaj valoroj de la sorbaj valoroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estas dividitaj per la absorbadvaloro de la unua normo (nul normo) kaj multobligitaj per 100%.La nula normo estas tiel egala al 100% kaj la absorbadvaloroj estas cititaj en procentoj.

=

B ——sorba normo (aŭ specimeno)

B0 ——sorba nula normo

10.2Norma Kurbo

----Por desegni norman kurbon: Prenu la absorban valoron de normoj kiel y-akson, duonlogaritman de la koncentriĝo de la AOZ-normsolvo (ppb) kiel x-akson.

----La AOZ-koncentriĝo de ĉiu specimeno (ppb), kiu legeblas de la kalibra kurbo, estas multobligita per la responda dilua faktoro de ĉiu specimeno sekvita, kaj la reala koncentriĝo de specimeno estas akirita.

Bonvolu rimarki:

Speciala programaro estis evoluigita por ĉiuj datumredukto, kiu povas esti provizita laŭpeto.

Dilua faktoro…………………………………………………2

10.Sentemo, precizeco kaj precizeco

Sentemeco: 0.025ppb

Detekta limo:

Histo (muskolo, hepato)………………………… 0.1ppb

Mielo------------------------------------------------- -0.1ppb

Precizeco:

Besta histo (muskolo kaj hepato)………………100±20%

Mielo………………………………………..………….. 100±20%

Precizeco:CV de la ELISA ilaro estas malpli ol 10%.

11.Rimarku

12.1 La averaĝaj valoroj de la sorbaj valoroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estos reduktitaj se la reakciiloj kaj specimenoj ne estis reguligitaj al ĉambra temperaturo (20-25 ℃).

12.2 Ne lasu mikroputojn sekiĝi inter paŝoj por eviti malsukcesan reprodukteblecon kaj funkciigu la sekvan paŝon tuj post frapado de la mikroputo-tenilo.

12.3 Skuu ĉiun reakciilon milde antaŭ uzo.

12.4 Tenu vian haŭton for de la halta solvo ĉar ĝi estas la 0.5MH2SO4solvo.

12.5 Ne uzu la ilojn malmodernajn.Ne interŝanĝu la reactivojn de malsamaj aroj, aŭ alie ĝi faligos la sentemon.

12.6 Kondiĉo de konservado: Tenu la ELISA-kompletojn je 2-8 ℃, ne frostigu.Sigelu ripozajn mikroputajn platojn, Evitu rektan sunlumon dum ĉiuj kovadoj.Oni rekomendas kovri la mikrotiterajn platojn.

12.7 Substrata solvo devus esti forlasita se ĝi iĝas koloroj.La reakciiloj povas esti difektitaj se la absorba valoro (450/630nm) de la nula normo estas malpli ol 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 La kolora reago bezonas 15 minutojn post la aldono de substrata solvaĵo;Vi povas plilongigi la inkubacion ĝis 20min aŭ pli se la koloro estas tro malpeza por esti determinita., neniam superu 25min. Male, mallongigu la inkubacion ĝuste.

12.9 La optimuma reakcia temperaturo estas 25℃.Pli alta aŭ pli malalta temperaturo kondukos al la ŝanĝoj de sentemo kaj absorbadvaloroj.

12.Kondiĉo de konservado kaj konservada periodo

Kondiĉo de konservado: 2-8 ℃.

Stokado: 12 monatoj.

 

 


  • Antaŭa:
  • Sekva:

  • Skribu vian mesaĝon ĉi tie kaj sendu ĝin al ni

    rilataj produktoj