produkt

Competitive Enzyme Immunoassay Kit foar kwantitative analyze fan Furazolidone metabolite (AOZ)

Koarte beskriuwing:

Dizze ELISA-kit is ûntworpen om AOZ te detektearjen basearre op it prinsipe fan yndirekt-kompetitive enzymimmunoassay.De mikrotiterputten binne bedekt mei fangen BSA-keppele antigeen.AOZ yn stekproef konkurrearret mei it antigeen bedekt op 'e mikrotiterplaat foar it tafoege antykodym.Nei it tafoegjen fan enzyme-konjugaat wurdt chromogene substraat brûkt en it sinjaal wurdt metten troch in spektrofotometer.De absorption is omkeard evenredich mei de AOZ-konsintraasje yn 'e stekproef.


Produkt Detail

Produkt Tags

Competitive Enzyme Immunoassay Kit foar

Kwantitative analyze fanFurazolidon metabolite(AOZ)

 

  1. 1.Eftergrûn

Nitrofuranen binne syntetyske breedspektrum antibiotika, dy't faak brûkt wurde yn dierproduksje foar har treflike antibakteriële en farmakokinetyske eigenskippen.Se waarden ek brûkt as groeipromotors yn pig, plomfee en akwatyske produksje.Yn lange-termyn stúdzjes mei lab bisten oanjûn dat de âlder medisinen en harren metabolites toande carcinogenic en mutagenic skaaimerken.Dit hat laat ta in ferbod op nitrofuranen foar de behanneling fan bisten dy't brûkt wurde foar itenproduksje.De nitrofuran-medisinen furaltadon, nitrofurantoin en nitrofurazon waarden yn 1993 ferbean fan gebrûk yn fiedingsdierproduksje yn 'e EU, en it brûken fan furazolidon waard yn 1995 ferbean.

De analyse fan residuen fan nitrofuran-medisinen moat basearre wurde op 'e deteksje fan' e weefsel-bûne metaboliten fan 'e nitrofuran-âldermedisynen.Om't de âlderlike medisinen tige rap metabolisearre wurde, en de weefsel-bûne nitrofuran-metaboliten foar in lange tiid sille behâlde, wurde dizze metabolites brûkt as it doel by it opspoaren fan it misbrûk fan nitrofuranen, wêrûnder Furazolidone-metabolite (AOZ), Furaltadon-metabolite (AMOZ) ), Nitrofurantoin metabolite (AHD) en Nitrofurazone metabolite (SEM).

AOZ-resten wurde meast bepaald troch LC-MS of LC-MS/MS.Enzymimmunoassays, yn ferliking mei chromatografyske metoaden, litte grutte foardielen sjen oangeande gefoelichheid, deteksjelimyt, technyske apparatuer en tiideasken.(Tiidkosten: 45min)

  1. 2.Testprinsipe

Dizze ELISA-kit is ûntworpen om AOZ te detektearjen basearre op it prinsipe fan yndirekt-kompetitive enzymimmunoassay.De mikrotiterputten binne bedekt mei fangen BSA-keppele antigeen.AOZ yn stekproef konkurrearret mei it antigeen bedekt op 'e mikrotiterplaat foar it tafoege antykodym.Nei it tafoegjen fan enzyme-konjugaat wurdt chromogene substraat brûkt en it sinjaal wurdt metten troch in spektrofotometer.De absorption is omkeard evenredich mei de AOZ-konsintraasje yn 'e stekproef.

  1. 3.Oanfraach

Dit kit kin brûkt wurde yn kwantitative en kwalitative analyze fan AOZ residu ynanima weefsels(spier, lever ensfh), huning.

  1. 4.Cross-reaksjes

Furazolidon metabolite (AOZ) …………………………..100%

Furaltadon metabolite (AMOZ)…………………<0.1%

Nitrofurantoin metabolite (AHD) …………………………<0.1%

Nitrofurazon metabolite (SEM)……………………………<0.1%

Furazolidone………………………………………………..…16,3%

Furaltadone……………………………………………….…<1%

Nitrofurantoin……………………………………………….…….…<1%

Nitrofurazone…………………………………………………..…<1%

  1. 5.Materialen nedich

5.1Equipments

---- Mikrotiterplaatspektrofotometer (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator of stikstof drogen ynstruminten

---- Homogenizer / stomacher

----Shaker

---- Vortex mixer

----Sentrifuge

---- Analytyske lykwicht (ynduktinsje: 0.01g)

---- Graduearre pipet: 10ml

---- Rubberen pipetbol

----Volumetryske fles: 100ml

----Glêzen flesse: 10ml

----Polystyrene centrifuge tube: 2ml, 50ml

----Mikropipetten: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2Reagents

---- Ethylacetat (AR)

----n-hexaan (of n-heptaan) (AR)

---- Dipotassium hydrogen phosphate trihydrate

(K2HPO4.3H2O) (AR)

---- Konsintrearre sâltsoer (HCl, AR)

----- Metanol

---- Natriumhydroxide (NaOH, AR)

---- Deionisearre wetter

  1. 6.Kit Components

l Mikrotiterplaat bedekt mei antigeen, 96 putten

l Standert oplossingen (6 flessen, 1 ml / flesse)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Spiking standert kontrôle: (1ml / flesse).......100 ppb

l Konsintrearre enzyme konjugaat 1ml ...... reade kap

l Enzym konjugaat diluents 10ml………..griene kap

l Substraat A 7ml…………………………………………………..witte kap

l Substraat B 7ml………………………………………………..read cap

l Stop oplossing 7ml………………………………………………………………………………………………………………………………………………

l 20 × konsintrearre wask oplossing 40ml

………………………………………….……transparante kap

l 2 × konsintrearre ekstraksje oplossing 60ml ... blauwe pet

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg……………… wite kap

  1. 7.Reagents Tarieding

Oplossing 1: derivative reagens:

Foegje 10 ml methanol ta oan 'e flesse mei 2-Nitrobenzaldehyde en oplosse.(by de konsintraasje fan 10mM).

Oplossing 2: 0.1MK2HPO4oplossing:

Gewicht 22,8 g K2HPO4.3H2O oant 1L deionisearre wetter om op te lossen.

Oplossing 3: 1M HCl oplossing

8.3ml konsintrearre sâltsoer oplosse mei deionisearre wetter oant 100ml.

Oplossing 4:1M NaOH oplossing

Los 4g NaOH mei 100ml deionisearre wetter.

Oplossing 5: ekstraksje oplossing:

Ferwiderje 2 × konsintrearre ekstraksjeoplossing mei deionisearre wetter yn 'e folumeferhâlding fan 1: 1.Dizze oplossing kin wurde bewarre foar 1 moanne by 4 ℃, dy't sil wurde brûkt foar ekstrahearre samples.

Oplossing 6:waskje oplossing:

Ferwiderje de 20 × konsintrearre waskoplossing mei deionisearre wetter yn 'e folume fan 1:19, dy't brûkt wurde om de platen te waskjen.Dizze verdunde oplossing kin bewarre wurde foar 1 moanne by 4 ℃.

  1. 8.Sample Preparations

8.1Notysje en foarsoarchsmaatregels foar operaasje:

a) Brûk asjebleaft ienmalige tips yn it eksperimint, en feroarje de tips by it absorbearjen fan ferskate reagens.

b) Soargje derfoar dat alle eksperimintele ynstruminten binne skjin.

c) it derivative reagens kin wurde bewarre by 2-8 ℃ foar trije moannen;

d) De HCl-oplossing kin wurde bewarre by keamertemperatuer foar 3 moannen;

e) De NaOH-oplossing kin wurde bewarre foar 3 moannen by keamertemperatuer;

f) Hâld ûnbehandele samples yn 'e frieze (-20 ℃);

g) Behannele samples kinne wurde bewarre foar 24h by 2-8 ℃ yn tsjuster.

8.2 Dierweefsel en levermonsters:

---- Homogenisearje de samples mei homogenisator;

---- Gewicht 1.0 ± 0.05g fan de homogenized weefsel sample yn 50ml polystyrene centrifuge buis.Add 4ml deionized wetter, 0.5ml 1M HCl oplossing en 100ul derivative reagens (sjoch oplossing 1).Shake it foar 2 min.

---- Incubate by 37 ℃ oernacht (sawat 16h);

---- Add 5ml 0.1MK2HPO4 (oplossing2), 0.4ml 1M NaOH (oplossing4) en 5 ml ethylacetat.Shake fûl foar 30s;

---- Centrifugerje by keamertemperatuer (20-25 ℃) foar 10min, op syn minst 3000g;

---- Nim 2.5ml fan 'e supernatant organyske faze yn in 10ml skjinne glêzen buis, droech mei 50-60 ℃ stikstofgas as rotary evaporator;

---- Los it droege oerbliuwsel op mei 1 ml n-hexaan (of n- heptaan), draai foar 30 sekonden, foegje 1 ml ekstraksjeoplossing ta (oplossing5), vortex 1 min, mingje folslein.

---- Centrifugerje by keamertemperatuer (20-25oC) foar 5min, op syn minst 3000g;

---- Fuortsmite de supernatant organyske faze;nim 50μl fan it substraat wetter faze foar assay.

 

8.4 Moai

---- weagje 1,0 ± 0,05 g fan 'e homogenisearre huningmonster yn in 50ml polystyrene-sintrifugebuis;

---- Foegje 4ml deionisearre wetter ta, 0.5ml 1M HCl (oplossing3) en 100μl derivative reagens (oplossing1);folslein skodzje foar 2 minuten;

---- Inkubearje by 37 ℃ oernacht (sawat 16h);

---- Foegje 5ml 0.1MK ta2HPO4 (oplossing2), 0.4ml 1M NaOH (oplossing4) en 5ml ethyl acetate, skodzje fûl foar 30s;

---- Sintrifugerje by keamertemperatuer (20-25 ℃) foar 10min, op syn minst 3000g;

---- Nim 2.5ml fan 'e supernatant organyske faze yn in 10ml skjinne glêzen buis, droech mei 50-60 ℃ stikstofgas of rotary evaporator;

---- Los it droege oerbliuwsel op mei 1 ml n-hexaan (of n- heptaan), draai foar 30 sekonden, foegje 1 ml ekstraksjeoplossing ta (oplossing5), vortex 1 min, mingje folslein.

----Sentrifuge by keamertemperatuer (20-25oC) foar 10min, op syn minst 3000g;

---- Ferwiderje de supernatant organyske faze;nim 50μl fan it substraat wetter faze foar assay.

  1. 9.Assay proses

9.1Notysje foardat assay

9.1.1 Soargje derfoar dat alle reagents en microwells binne allegear by keamertemperatuer (20-25 ℃).

9.1.2 Werom alle rest reagents nei 2-8 ℃ fuortendaliks nei gebrûk.

9.1.3 It korrekt waskjen fan de mikrowellen is in wichtige stap yn it proses fan assay;it is de fitale faktor foar de reprodusearberens fan 'e ELISA-analyse.

9.1.4 Foarkom it ljocht en bedekke de mikrowellen tidens ynkubaasje.

9.2 Assay Stappen

9.2.1 Nim alle reagents út by keamertemperatuer (20-25 ℃) foar mear as 30min, homogenisearje foar gebrûk.

9.2.2 Krij de nedige mikrowellen út en bring de rest fuortendaliks werom yn 'e zip-lock tas op 2-8 ℃.

9.2.3 De konsintrearre wask oplossing en konsintrearre ekstraksje oplossing moatte wurde rewarmed te wêzen op keamertemperatuer foar gebrûk.

9.2.4Nûmer:Nûmere elke mikrowellposysjes en alle noarmen en samples moatte yn duplikaat wurde útfierd.Record de noarmen en samples posysjes.

9.2.5Verdunning fan konsintrearre antibody oplossing: verdund de konsintrearre enzyme oplossing mei enzyme konjugaat diluents yn it folume ferhâlding fan 1:10 (1 fold konsintrearre enzyme oplossing: 10 fold enzyme konjugat diluents).

9.2.6Foegje standert oplossing / sample en enzyme-konjugatoplossing ta: foegje 50 µl standert oplossing of taret monster ta oan oerienkommende putten, foegje 50 µl enzyme-konjugatoplossing ta.Mingje sêft troch de plaat mei de hân te skodzjen en ynkubearje foar 30 minuten by 25 ℃ mei deksel.

9.2.7Waskje: Ferwiderje de dekking foarsichtich en giet de flüssigens út 'e putten en spielje de mikrowellen mei 250µl verdunde waskoplossing (oplossing6) mei ynterval fan 10s foar 4-5 kear.Absorbearje it oerbliuwende wetter mei absorberend papier (de rest luchtbel kin wurde eliminearre mei net brûkte tip).

9.2.8Coloration: Foegje 50µl substraatoplossing A en 50ul substraatoplossing B ta oan elke put.Mingje sêft troch de plaat mei de hân te skodzjen en ynkubearje foar 15 minuten by 25 ℃ mei deksel (sjoch 12.8).

9.2.11Mjitte: Foegje 50µl de stop-oplossing ta oan elke put.Mingje sêft troch de plaat mei de hân te skodzjen en mjit de absorption by 450nm (It suggerearre mjitte mei de dûbele golflingte fan 450/630nm. Lês it resultaat binnen 5min nei tafoeging fan stopoplossing.)

10 Results

10.1Persintaazje absorbance

De gemiddelde wearden fan 'e absorbânsjewearden krigen foar de noarmen en de samples wurde dield troch de absorbânsjewearde fan' e earste standert (nulstandert) en fermannichfâldige mei 100%.De nulstandert wurdt dus gelyk makke oan 100% en de absorbânsjewearden wurde oanhelle yn persintaazjes.

=

B - Absorbânsje standert (as sample)

B0 ——absorbance nul standert

10.2Standert Curve

---- Om in standertkromme te tekenjen: Nim de absorbânsjewearde fan noarmen as y-as, semi-logaritmysk fan 'e konsintraasje fan' e AOZ-standertoplossing (ppb) as x-as.

---- De AOZ-konsintraasje fan elke stekproef (ppb), dy't kin wurde lêzen út 'e kalibraasjekromme, wurdt fermannichfâldige mei de korrespondearjende verdunningsfaktor fan elk folge sample, en de eigentlike konsintraasje fan 'e stekproef wurdt krigen.

Let op:

Spesjale software is ûntwikkele foar alle gegevens reduksje, dat kin wurde levere op oanfraach.

Verdunningsfaktor………………………………………………… 2

10.Gefoelichheid, krektens en krektens

Gefoelichheid: 0.025 ppb

Deteksjelimyt:

Tissue (spier, lever)…………………………0.1ppb

Huning------------------------------------------------- -0.1ppb

Krektens:

Dierlike weefsel (spier en lever)…………………………100±20%

Honey……………………………………………………………… 100±20%

Krektens:CV fan 'e ELISA-kit is minder dan 10%.

11.Notysje

12.1 De gemiddelde wearden fan 'e absorbânsjewearden krigen foar de noarmen en de monsters sille wurde fermindere as de reagentia en samples net binne regele op keamertemperatuer (20-25 ℃).

12.2 Lit mikrowellen net droegje tusken stappen om mislearre reprodusearberens te foarkommen en operearje de folgjende stap direkt nei't de mikrowellhâlder tapast is.

12.3 Shake elk reagens sêft foar gebrûk.

12.4 Hâld jo hûd fuort fan 'e stopoplossing, want it is de 0.5MH2SO4oplossing.

12.5 Brûk de kits net ferâldere.Wissel de reagenzjes fan ferskate batches net út, oars sil it de gefoelichheid sakje.

12.6 Betingst foar opslach: Hâld de ELISA-kits op 2-8 ℃, net befrieze.Seal rest microwell platen, Avoid rjocht sinneljocht tidens alle incubations.It is oan te rieden om de mikrotiterplaten te dekken.

12.7 Substraatoplossing moat wurde ferlitten as it kleuren feroaret.De reagenzjes kinne ferswakke wurde as de absorbânsjewearde (450/630nm) fan 'e nulstandert minder is dan 0.5 (A450nm <0.5).

12.8 De kleurreaksje moat 15 minuten nei it tafoegjen fan substraatoplossing;Jo kinne de ynkubaasjetiid ferlingje oant 20min of mear as de kleur te ljocht is om te bepalen., nea mear as 25min. Yn tsjinstelling, ferkoartje de ynkubaasjetiid goed.

12.9 De optimale reaksjetemperatuer is 25 ℃.Hegere of legere temperatuer sil liede ta feroaringen fan gefoelichheid en absorbance wearden.

12.Opslach betingst en opslach perioade

Opslach betingst: 2-8 ℃.

Opslach perioade: 12 moannen.

 

 


  • Foarige:
  • Folgjende:

  • Skriuw jo berjocht hjir en stjoer it nei ús

    relatearre produkten