proizvod

Komplet kompetitivnog enzimskog imunološkog testa za kvantitativnu analizu metabolita furazolidona (AOZ)

Kratki opis:

Ovaj komplet ELISA dizajniran je za otkrivanje AOZ na temelju principa neizravno-kompetitivnog enzimskog imunološkog testa.Mikrotitarske jažice obložene su antigenom vezanim za hvatanje BSA.AOZ u uzorku natječe se s antigenom obloženim na mikrotitarskoj ploči za dodano protutijelo.Nakon dodatka enzimskog konjugata koristi se kromogeni supstrat i signal se mjeri spektrofotometrom.Apsorpcija je obrnuto proporcionalna koncentraciji AOZ u uzorku.


Pojedinosti o proizvodu

Oznake proizvoda

Komplet za kompetitivni enzimski imunološki test

Kvantitativna analizaMetabolit furazolidona(AOZ)

 

  1. 1.Pozadina

Nitrofurani su sintetski antibiotici širokog spektra, koji se često koriste u uzgoju životinja zbog svojih izvrsnih antibakterijskih i farmakokinetičkih svojstava.Također su korišteni kao stimulatori rasta u proizvodnji svinja, peradi i vodenoj proizvodnji.Dugoročne studije na laboratorijskim životinjama pokazale su da su izvorni lijekovi i njihovi metaboliti pokazali kancerogena i mutagena svojstva.To je dovelo do zabrane nitrofurana za liječenje životinja koje se koriste za proizvodnju hrane.Nitrofuranski lijekovi furaltadon, nitrofurantoin i nitrofurazon zabranjeni su za upotrebu u stočarskoj proizvodnji u EU 1993. godine, a uporaba furazolidona zabranjena je 1995. godine.

Analiza ostataka nitrofuranskih lijekova mora se temeljiti na detekciji tkivno vezanih metabolita matičnih nitrofuranskih lijekova.Budući da se matični lijekovi vrlo brzo metaboliziraju, a tkivno vezani metaboliti nitrofurana zadržavaju se dugo vremena, ti se metaboliti koriste kao meta u otkrivanju zlouporabe nitrofurana, koji uključuju metabolit furazolidona (AOZ), metabolit furaltadona (AMOZ). ), metabolit nitrofurantoina (AHD) i metabolit nitrofurazona (SEM).

AOZ-rezidue se najčešće određuju pomoću LC-MS ili LC-MS/MS.Enzimski imunološki testovi, u usporedbi s kromatografskim metodama, pokazuju značajne prednosti u pogledu osjetljivosti, granice detekcije, tehničke opremljenosti i vremenskog zahtjeva.(vrijeme: 45 min)

  1. 2.Test Princip

Ovaj komplet ELISA dizajniran je za otkrivanje AOZ na temelju principa neizravno-kompetitivnog enzimskog imunološkog testa.Mikrotitarske jažice obložene su antigenom vezanim za hvatanje BSA.AOZ u uzorku natječe se s antigenom obloženim na mikrotitarskoj ploči za dodano protutijelo.Nakon dodatka enzimskog konjugata koristi se kromogeni supstrat i signal se mjeri spektrofotometrom.Apsorpcija je obrnuto proporcionalna koncentraciji AOZ u uzorku.

  1. 3.Prijave

Ovaj pribor se može koristiti u kvantitativnoj i kvalitativnoj analizi ostataka AOZ uživotinjska tkiva(mišići, jetra itd.), med.

  1. 4.Križne reakcije

Metabolit furazolidona (AOZ)……………………..100%

Metabolit furaltadona (AMOZ)……………………<0,1%

Metabolit nitrofurantoina (AHD)……………………<0,1%

Metabolit nitrofurazona (SEM)…………………...<0,1%

Furazolidon……………………………………….…..…16,3%

Furaltadon…………………………………………….…<1%

Nitrofurantoin……………………………………….…….…<1%

Nitrofurazon……………………………………………..…<1%

  1. 5.Potrebni materijali

5.1Oprema

----Spektrofotometar mikrotitarske ploče (450nm/630nm)

---- Rotacijski isparivač ili instrumenti za sušenje dušikom

----Homogenizator /želudac

----Shaker

----Vorteks miješalica

----Centrifuga

----Analitička vaga (induktivnost: 0,01g)

----Graduirana pipeta: 10 ml

----Gumena kuglica pipete

----Odmjerna tikvica: 100 ml

----Staklena bočica: 10 ml

---- Polistirenska epruveta za centrifugu: 2 ml, 50 ml

----Mikropipete: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250 ul-multipipeta

5.2Reagensi

----Etil acetat (AR)

----n-heksan (ili n-heptan) (AR)

----Dikalijev hidrogenfosfat trihidrat

(K2HPO4.3H2O) (AR)

----Koncentrirana solna kiselina (HCl, AR)

-----Metanol

----Natrijev hidroksid (NaOH, AR)

----Deionizirana voda

  1. 6.Komponente kompleta

l Mikrotitarska ploča obložena antigenom, 96 jažica

l Standardne otopine (6 bočica, 1 ml/bočica)

0ppb,0,025ppb,0,075ppb,0,225ppb,0,675ppb,2,025ppb

l Standardna kontrola dodavanja: (1ml/bočica)....….100 ppb

l Koncentrirani enzimski konjugat 1 ml.....…..crvena kapa

l Razrjeđivači enzimskog konjugata 10 ml………..zeleni čep

l Supstrat A 7ml………............................…....…..…..bijeli čep

l Supstrat B 7ml………............................………….…..crvena kapa

l Stop otopina 7ml……………………………žuti čep

l 20×koncentrirana otopina za pranje 40ml

…………………………………….……prozirni čep

l 2×koncentrirana otopina za ekstrakciju 60 ml….plavi čep

l 2-nitrobenzaldehid 15,1 mg………………bijela kapa

  1. 7.Priprema reagensa

Riješenje 1: derivatni reagens:

Dodajte 10 ml metanola u bocu s 2-nitrobenzaldehidom i otopite.(u koncentraciji od 10 mM).

Riješenje 2: 0,1MK2HPO4riješenje:

Teži 22,8g K2HPO4.3H2O do 1L deionizirane vode za otapanje.

Riješenje 3: 1M otopina HCl

Otopiti 8,3 ml koncentrirane klorovodične kiseline s deioniziranom vodom do 100 ml.

Rješenje 4:1M otopina NaOH

Otopite 4 g NaOH sa 100 ml deionizirane vode.

Rješenje 5: otopina za ekstrakciju:

Razrijediti 2× koncentriranu ekstrakcijsku otopinu deioniziranom vodom u volumnom omjeru 1:1.Ova se otopina može čuvati 1 mjesec na 4 ℃, koja će se koristiti za ekstrahiranje uzoraka.

Riješenje 6: otopina za pranje:

Razrijedite 20× koncentriranu otopinu za ispiranje s deioniziranom vodom u volumnom omjeru 1:19, koja će se koristiti za pranje ploča.Ova razrijeđena otopina može se čuvati 1 mjesec na 4 ℃.

  1. 8.Pripreme uzoraka

8.1Napomena i mjere opreza prije rada:

a) Koristite jednokratne vrhove u eksperimentu i mijenjajte vrhove kada upijate različiti reagens.

b) Provjerite jesu li svi eksperimentalni instrumenti čisti.

c) derivat reagensa može se čuvati na 2-8 ℃ tri mjeseca;

d) Otopina HCl može se čuvati na sobnoj temperaturi 3 mjeseca;

e) Otopina NaOH može se čuvati 3 mjeseca na sobnoj temperaturi;

f) Držite netretirane uzorke u zamrzivaču (-20 ℃);

g) Tretirani uzorci mogu se čuvati 24 sata na 2-8 ℃ u tami.

8.2 Uzorci životinjskog tkiva i jetre:

----Homogenizirati uzorke homogenizatorom;

---- Izvažite 1,0±0,05 g uzorka homogeniziranog tkiva u polistirensku epruvetu za centrifugiranje od 50 ml.Dodajte 4 ml deionizirane vode, 0,5 ml 1 M otopine HCl i 100 ul reagensa derivata (vidi otopinu 1).Mućkajte 2 min.

---- Inkubirajte na 37 ℃ preko noći (oko 16 sati);

---- Dodati 5ml 0,1MK2HPO4 (riješenje2), 0,4 ml 1 M NaOH (riješenje4) i 5 ml etil acetata.Snažno tresti 30 sekundi;

---- Centrifugirajte na sobnoj temperaturi (20-25 ℃) 10 minuta, najmanje 3000 g;

---- Uzmite 2,5 ml supernatanta organske faze u čistu staklenu epruvetu od 10 ml, osušite dušikom na 50-60 ℃ ili rotacijskim isparivačem;

---- Otopite suhi ostatak s 1 ml n-heksana (ili n-heptana), vrtložite 30 sekundi, dodajte 1 ml otopine za ekstrakciju (riješenje5), vrtložite 1 minutu, potpuno promiješajte.

---- Centrifugirajte na sobnoj temperaturi (20-25oC) 5 min, najmanje 3000 g;

---- Ukloniti supernatant organske faze;uzmite 50 μl vodene faze supstrata za analizu.

 

8.4 Med

----izvažite 1,0±0,05g homogeniziranog uzorka meda u polistirensku epruvetu za centrifugiranje od 50ml;

----Dodajte 4 ml deionizirane vode, 0,5 ml 1 M HCl (riješenje3) i 100 μl derivata reagensa (riješenje1);potpuno protresite 2 minute;

----Inkubirati na 37 ℃ preko noći (oko 16 sati);

----Dodati 5ml 0,1MK2HPO4 (riješenje2), 0,4 ml 1 M NaOH (riješenje4) i 5 ml etil acetata, snažno mućkati 30 sekundi;

----Centrifugirajte na sobnoj temperaturi (20-25 ℃) 10 minuta, najmanje 3000 g;

----Uzmite 2,5 ml supernatanta organske faze u čistu staklenu epruvetu od 10 ml, osušite dušikom na 50-60 ℃ ili rotacijskim isparivačem;

---- Otopite suhi ostatak s 1 ml n-heksana (ili n-heptana), vrtložite 30 sekundi, dodajte 1 ml otopine za ekstrakciju (riješenje5), vrtložite 1 minutu, potpuno promiješajte.

----Centrifugirajte na sobnoj temperaturi (20-25oC) 10 min, najmanje 3000 g;

----Ukloniti supernatantnu organsku fazu;uzmite 50 μl vodene faze supstrata za analizu.

  1. 9.Proces ispitivanja

9.1Obavijest prije analize

9.1.1 Provjerite jesu li svi reagensi i mikrojažice na sobnoj temperaturi (20-25 ℃).

9.1.2 Vratite sve ostale reagense na 2-8 ℃ odmah nakon upotrebe.

9.1.3 Pravilno pranje mikrojažica važan je korak u procesu analize;to je vitalni faktor za ponovljivost ELISA analize.

9.1.4 Izbjegavajte svjetlo i pokrijte mikrojažice tijekom inkubacije.

9.2 Koraci ispitivanja

9.2.1 Izvadite sve reagense na sobnoj temperaturi (20-25 ℃) dulje od 30 minuta, homogenizirajte prije upotrebe.

9.2.2 Izvadite potrebne mikrojažice i odmah vratite ostatak u vrećicu sa zatvaračem na 2-8 ℃.

9.2.3 Koncentriranu otopinu za ispiranje i koncentriranu otopinu za ekstrakciju treba ponovno zagrijati na sobnu temperaturu prije upotrebe.

9.2.4Broj:Numerirajte svaku poziciju mikrojažice i sve standarde i uzorke treba izvoditi u duplikatu.Zabilježite položaje standarda i uzoraka.

9.2.5Razrjeđivanje koncentrirane otopine protutijela: razrijediti koncentriranu otopinu enzima s razrjeđivačima konjugata enzima u omjeru volumena 1:10 (1 puta koncentrirana otopina enzima: 10 puta više razrjeđivača konjugata enzima).

9.2.6Dodajte standardnu ​​otopinu/uzorak i otopinu enzimskog konjugata: dodajte 50 µl standardne otopine ili pripremljenog uzorka u odgovarajuće jažice, dodajte 50 µl otopine enzimskog konjugata.Lagano promiješajte ručnim protresanjem ploče i inkubirajte 30 minuta na 25 ℃ s poklopcem.

9.2.7Pranje: Nježno uklonite poklopac i izlijte tekućinu iz jažica i isperite mikrojažice s 250 µl razrijeđene otopine za pranje (riješenje6) u intervalu od 10 s 4-5 puta.Upijte preostalu vodu upijajućim papirom (ostatak mjehurića zraka možete ukloniti neiskorištenim vrhom).

9.2.8Obojenost: Dodajte 50 µl otopine supstrata A i 50 ul otopine supstrata B u svaku jažicu.Nježno promiješajte ljuljajući ploču ručno i inkubirajte 15 minuta na 25 ℃ s poklopcem (vidi 12.8).

9.2.11Mjera: Dodajte 50 µl stop otopine u svaku jažicu.Lagano promiješajte ljuljajući ploču ručno i izmjerite apsorbanciju na 450 nm (Predlaže se mjerenje s dvostrukom valnom duljinom od 450/630 nm. Očitajte rezultat unutar 5 minuta nakon dodavanja stop otopine. )

10 Rezultati

10.1Postotak apsorbancije

Srednje vrijednosti vrijednosti apsorbancije dobivene za standarde i uzorke dijele se s vrijednošću apsorbancije prvog standarda (nulti standard) i množe sa 100%.Nulti standard je stoga jednak 100%, a vrijednosti apsorbancije navedene su u postocima.

=

B ——standard apsorpcije (ili uzorak)

B0 ——standard apsorpcije nula

10.2Standardna krivulja

----Za crtanje standardne krivulje: Uzmite vrijednost apsorbancije standarda kao y-os, polulogaritamsku koncentraciju standardne otopine AOZ (ppb) kao x-os.

----Koncentracija AOZ svakog uzorka (ppb), koja se može očitati iz kalibracijske krivulje, množi se s odgovarajućim faktorom razrjeđenja svakog uzorka koji se prati i dobiva se stvarna koncentracija uzorka.

Napomena:

Za sve redukcije podataka razvijen je poseban softver koji se može dobiti na zahtjev.

Faktor razrjeđivanja………………………………………..……2

10.Osjetljivost, točnost i preciznost

Osjetljivost: 0,025 ppb

Granica detekcije:

Tkivo (mišići, jetra)…………………………0,1ppb

Med------------------------------------------------- -0,1 ppb

Točnost:

Životinjsko tkivo (mišići i jetra)…………………100±20%

Med…………………………………..………….... 100±20%

Preciznost:CV ELISA kita manji je od 10%.

11.Obavijest

12.1 Srednje vrijednosti vrijednosti apsorbancije dobivene za standarde i uzorke smanjit će se ako reagensi i uzorci nisu podešeni na sobnu temperaturu (20-25 ℃).

12.2 Nemojte dopustiti da se mikrojažice osuše između koraka kako biste izbjegli neuspješnu ponovljivost i izvršite sljedeći korak odmah nakon što dodirnete držač mikrojažica.

12.3 Lagano protresite svaki reagens prije upotrebe.

12.4 Držite kožu podalje od stop otopine jer je to 0,5MH2SO4riješenje.

12.5 Nemojte koristiti komplete koji su zastarjeli.Ne mijenjajte reagense iz različitih serija jer će u suprotnom doći do pada osjetljivosti.

12.6 Uvjeti skladištenja: Čuvajte ELISA setove na 2-8 ℃, nemojte zamrzavati.Zatvorite pločice s mikrootvorima, izbjegavajte izravnu sunčevu svjetlost tijekom svih inkubacija.Preporuča se prekrivanje mikrotitarskih ploča.

12.7 Otopinu supstrata treba napustiti ako oboji.Reagensi se mogu pokvariti ako je vrijednost apsorbancije (450/630 nm) nultog standarda manja od 0,5 (A450 nm<0,5).

12.8 Reakcija bojanja treba 15 minuta nakon dodavanja otopine supstrata;Možete produžiti vrijeme inkubacije na 20 minuta ili više ako je boja presvijetla da bi se odredila. Nikada ne prelazite 25 minuta. Naprotiv, pravilno skratite vrijeme inkubacije.

12.9 Optimalna temperatura reakcije je 25 ℃.Viša ili niža temperatura dovest će do promjena osjetljivosti i vrijednosti apsorbancije.

12.Uvjeti skladištenja i rok skladištenja

Uvjeti skladištenja: 2-8 ℃.

Rok trajanja: 12 mjeseci.

 

 


  • Prethodna:
  • Sljedeći:

  • Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je

    Povezani proizvodi