produk

Kit Immunoassay Enzim Kompetitif kanggo Analisis Kuantitatif Metabolit Furazolidone (AOZ)

Katrangan singkat:

Kit ELISA iki dirancang kanggo ndeteksi AOZ adhedhasar prinsip immunoassay enzim kompetitif ora langsung.Sumur mikrotiter dilapisi karo antigen sing disambungake BSA.AOZ ing sampel saingan karo antigen sing dilapisi ing piring microtiter kanggo antibodi sing ditambahake.Sawise nambahake konjugat enzim, substrat kromogenik digunakake lan sinyal kasebut diukur nganggo spektrofotometer.Panyerepan iku kuwalik karo konsentrasi AOZ ing sampel.


Detail Produk

Tag produk

Kit Immunoassay Enzim Kompetitif kanggo

Analisis kuantitatif sakaMetabolit furazolidon(AOZ)

 

  1. 1.Latar mburi

Nitrofurans minangka antibiotik spektrum luas sintetik, sing asring digunakake ing produksi kewan amarga sifat antibakteri lan farmakokinetik sing apik banget.Dheweke uga digunakake minangka promotor wutah ing produksi babi, unggas lan akuatik.Ing panaliten jangka panjang karo kewan laboratorium nuduhake yen obat induk lan metabolit kasebut nuduhake ciri karsinogenik lan mutagen.Iki nyebabake larangan nitrofuran kanggo perawatan kewan sing digunakake kanggo produksi panganan.Obat nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin lan nitrofurazone dilarang digunakake ing produksi kewan panganan ing EU ing taun 1993, lan panggunaan furazolidone dilarang ing taun 1995.

Analisis residu obat-obatan nitrofuran kudu adhedhasar deteksi metabolit terikat jaringan saka obat induk nitrofuran.Amarga obat-obatan induk dimetabolisme kanthi cepet, lan metabolit nitrofuran sing kaiket ing jaringan bakal tetep suwe, metabolit kasebut digunakake minangka target kanggo ndeteksi penyalahgunaan nitrofuran, sing kalebu metabolit Furazolidone (AOZ), metabolit Furaltadone (AMOZ). metabolit Nitrofurantoin (AHD) lan metabolit Nitrofurazone (SEM).

AOZ-residue ditemtokake paling umum dening LC-MS utawa LC-MS / MS.Enzim immunoassays, dibandhingake karo cara kromatografi, nuduhake kaluwihan owahan babagan sensitivitas, watesan deteksi, peralatan technical lan syarat wektu.(Biaya wektu: 45 menit)

  1. 2.Prinsip Tes

Kit ELISA iki dirancang kanggo ndeteksi AOZ adhedhasar prinsip immunoassay enzim kompetitif ora langsung.Sumur mikrotiter dilapisi karo antigen sing disambungake BSA.AOZ ing sampel saingan karo antigen sing dilapisi ing piring microtiter kanggo antibodi sing ditambahake.Sawise nambahake konjugat enzim, substrat kromogenik digunakake lan sinyal kasebut diukur nganggo spektrofotometer.Panyerepan iku kuwalik karo konsentrasi AOZ ing sampel.

  1. 3.Aplikasi

Kit iki bisa digunakake ing analisis kuantitatif lan kualitatif residu AOZ ingjaringan anima(otot, ati lsp), madu.

  1. 4.Reaksi silang

Metabolit Furazolidone (AOZ) ……………………………….. 100%

Metabolit Furaltadone (AMOZ) ……………………<0,1%

Metabolit Nitrofurantoin (AHD) ……………………<0,1%

Metabolit Nitrofurazone (SEM)…………………………...<0,1%

Furazolidone ……………………………………………… 16,3%

Furaltadone ……………………………………………………<1%

Nitrofurantoin ……………………………………………….…<1%

Nitrofurazone……………………………………………………<1%

  1. 5.Bahan sing dibutuhake

5.1prabotan

----Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator utawa nitrogen pangatusan instruments

---- Homogenizer / weteng

---- Swara

---- Mixer vortex

---- Centrifuge

---- Neraca analitik (induktansi: 0,01g)

---- Pipet ukur : 10 ml

---- Bola pipet karet

---- Labu volumetrik: 100 ml

----Labu kaca: 10 ml

---- Tabung centrifuge polystyrene: 2ml, 50ml

---- Mikropipet: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipet

5.2Reagen

----Etil asetat (AR)

----n-heksana (utawa n-heptana) (AR)

---- Dipotassium hidrogen fosfat trihidrat

(K2HPO4.3H2O) (AR)

----Asam klorida pekat (HCl, AR)

-----Methanol

----Natrium hidroksida (NaOH, AR)

----Banyu deionisasi

  1. 6.Komponen Kit

l piring Microtiter ditutupi karo antigen, 96 sumur

l Solusi standar (6 botol, 1ml / botol)

0ppb, 0,025ppb, 0,075ppb, 0,225ppb, 0,675ppb, 2,025ppb

l Spiking kontrol standar: (1ml/botol)......100ppb

l Enzim pekat konjugasi 1ml........ tutup abang

l Enzim konjugat pengencer 10ml……….. tutup ijo

l Substrat A 7ml………………………………………………………..tutup putih

l Substrat B 7ml………………………………………………………. tutup abang

l Stop solution 7ml…………………………………………………………………………………………

l 20× larutan cuci pekat 40ml

……………………………………………. tutup transparan

l 2×larutan ekstraksi pekat 60ml….tutup biru

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg……………….putih

  1. 7.Preparation Reagen

Solusi 1: reagen turunan:

Tambah 10ml metanol menyang botol sing duwe 2-Nitrobenzaldehyde lan larut.(ing konsentrasi 10mM).

Solusi 2: 0.1MK2HPO4solusi:

Bobot 22,8 g K2HPO4.3H2O nganti 1L banyu deionisasi kanggo larut.

Solusi 3: larutan HCl 1M

Larutake 8,3 ml asam klorida pekat karo banyu deionized kanggo 100 ml.

Solusi 4:1 M larutan NaOH

Larutake 4g NaOH kanthi 100ml banyu deionisasi.

Solusi 5solusi ekstraksi:

Dilute 2 × solusi ekstraksi pekat karo banyu deionisasi ing rasio volume 1:1.Solusi iki bisa disimpen kanggo 1 sasi ing suhu 4 ℃, sing bakal digunakake kanggo njupuk conto.

Solusi 6: solusi ngumbah:

Dilute 20 × solusi wisuh klempakan karo banyu deionized ing jatah volume 1:19, kang bakal digunakake kanggo wisuh piring.Solusi sing diencerke iki bisa disimpen sajrone 1 wulan ing suhu 4 ℃.

  1. 8.Preparasi Sampel

8.1Kabar lan pancegahan sadurunge operasi:

a) Gunakake tips siji-mati ing eksperimen, lan ngganti tips nalika nresep reagen beda.

b) Priksa manawa kabeh instrumen eksperimen resik.

c) reagen turunan bisa disimpen ing 2-8 ℃ telung sasi;

d) Solusi HCl bisa disimpen ing suhu kamar suwene 3 wulan;

e) Solusi NaOH bisa disimpen nganti 3 sasi ing suhu kamar;

f) Tansah conto sing ora diobati ing beku (-20 ℃);

g) Sampel sing diolah bisa disimpen sajrone 24 jam ing 2-8 ℃ ing peteng.

8.2 Sampel jaringan lan ati kewan:

---- Homogenize conto karo homogenizer;

---- Bobot 1.0±0.05g saka sampel tissue homogenized menyang 50ml polystyrene tabung centrifuge.Tambah 4ml banyu deionisasi, 0,5ml 1M solusi HCl lan 100ul reagen turunan (ndeleng solusi 1).Goyangake nganti 2 menit.

---- Inkubasi ing 37 ℃ sewengi (kira-kira 16h);

---- Tambah 5ml 0,1MK2HPO4 (solusi2), 0,4 ml 1M NaOH (solusi4) lan 5ml etil asetat.Goyangake kanthi kuat nganti 30 detik;

---- Centrifuge ing suhu kamar (20-25 ℃) kanggo 10min, paling 3000g;

---- Njupuk 2.5ml saka fase organik supernatant menyang tabung kaca resik 10ml, garing karo 50-60 ℃ gas nitrogen utawa rotary evaporator;

---- Bubarake sisa garing nganggo 1ml n-heksana (utawa n-heptane), vortex kanggo 30 detik, tambahake 1ml larutan ekstraksi (solusi5), vortex 1min, nyampur rampung.

---- Centrifuge ing suhu kamar (20-25oC) kanggo 5 menit, paling sethithik 3000g;

---- Mbusak fase organik supernatan;njupuk 50μl saka fase banyu substrat kanggo assay.

 

8.4 Madu

---- nimbang 1.0 ± 0.05g saka sampel madu homogenized menyang 50ml polystyrene tabung centrifuge;

----Tambah 4ml banyu deionisasi, 0,5ml 1M HCl (solusi3) lan 100μl reagen turunan (solusi1);goyangake kanthi lengkap kanggo 2 menit;

----Inkubasi ing 37 ℃ sewengi (kira-kira 16h);

----Tambah 5ml 0,1MK2HPO4 (solusi2), 0,4 ml 1M NaOH (solusi4) lan 5ml etil asetat, goyangake kanthi kuat nganti 30 detik;

---- Centrifuge ing suhu kamar (20-25 ℃) kanggo 10min, paling 3000g;

---- Njupuk 2.5ml saka fase organik supernatant menyang tabung kaca resik 10ml, garing karo 50-60 ℃ gas nitrogen utawa rotary evaporator;

---- Larutake sisa garing nganggo 1ml n-heksana (utawa n-heptana), vortex kanggo 30 detik, tambahake 1ml larutan ekstraksi (solusi5), vortex 1min, nyampur rampung.

---- Centrifuge ing suhu kamar (20-25oC) kanggo 10 menit, paling sethithik 3000g;

---- Mbusak fase organik supernatan;njupuk 50μl saka fase banyu substrat kanggo assay.

  1. 9.Proses assay

9.1Kabar sadurunge assay

9.1.1 Priksa manawa kabeh reagen lan microwells kabeh ing suhu kamar (20-25 ℃).

9.1.2 Bali kabeh reagen liyane kanggo 2-8 ℃ sanalika sawise nggunakake.

9.1.3 Ngumbah microwells kanthi bener minangka langkah penting ing proses tes;iku faktor penting kanggo reproducibility saka analisis ELISA.

9.1.4 Nyingkiri cahya lan nutupi microwells nalika inkubasi.

9.2 Langkah-langkah Pengujian

9.2.1 Njupuk kabeh reagen metu ing suhu kamar (20-25 ℃) kanggo luwih saka 30min, homogenize sadurunge digunakake.

9.2.2 Entuk microwells sing dibutuhake lan bali liyane menyang tas zip-kunci ing 2-8 ℃ langsung.

9.2.3 Solusi cuci pekat lan solusi ekstraksi pekat kudu dipanasake maneh ing suhu kamar sadurunge digunakake.

9.2.4nomer:Nomer saben posisi microwell lan kabeh standar lan conto kudu mbukak ing duplikat.Rekam standar lan posisi sampel.

9.2.5Dilution saka solusi antibodi klempakan: encer larutan enzim pekat dengan pelarut konjugat enzim dengan rasio volume 1:10(1 kali lipat larutan enzim pekat: 10 lipatan pengencer konjugat enzim).

9.2.6Tambah solusi standar / sampel lan solusi konjugat enzim: tambahake 50μl larutan standar utawa sampel sing disiapake menyang sumur sing cocog, tambahake 50μl larutan konjugasi enzim.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan inkubasi nganti 30 menit ing 25 ℃ kanthi tutup.

9.2.7wisuh: Copot tutup alon-alon lan tuangake cairan metu saka sumur lan mbilas microwell nganggo larutan cuci 250µl (solusi6) ing interval 10s kanggo 4-5 kaping.Nyerep banyu sing isih ana nganggo kertas penyerap (sisa gelembung udara bisa diilangi nganggo tip sing ora digunakake).

9.2.8pewarnaan: Tambah 50µl larutan substrat A lan 50ul larutan substrat B kanggo saben sumur.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan inkubasi nganti 15 menit ing 25 ℃ kanthi tutup (pirsani 12.8).

9.2.11Ngukur: Tambahkan 50µl stop solution pada masing-masing sumuran.Nyampur alon-alon kanthi goyangake piring kanthi manual lan ngukur absorbansi ing 450nm (Disaranake ngukur kanthi dawa gelombang dual 450/630nm. Waca asil sajrone 5 menit sawise ditambahake solusi mandeg.)

10 Asil

10.1Persentase absorbansi

Nilai rata-rata saka nilai absorbansi sing dipikolehi kanggo standar lan sampel dibagi karo nilai absorbansi standar pisanan (standar nol) lan dikali 100%.Standar nol digawe padha karo 100% lan nilai absorbansi dipetik ing persentase.

=

B ——standar panyerepan (utawa sampel)

B0 ——standar nol penyerapan

10.2Kurva Standar

----Kanggo nggambar kurva standar: Njupuk nilai absorbansi standar minangka sumbu y, semi logaritma konsentrasi larutan standar AOZ (ppb) minangka sumbu x.

---- Konsentrasi AOZ saben sampel (ppb), sing bisa diwaca saka kurva kalibrasi, dikalikan karo faktor pengenceran sing cocog kanggo saben sampel sing diterusake, lan konsentrasi sampel sing nyata ditampa.

Mangga dicathet:

Piranti lunak khusus wis dikembangake kanggo kabeh pengurangan data, sing bisa diwenehake kanthi panyuwunan.

Faktor pengenceran………………………………………………………2

10.Sensitivitas, akurasi lan presisi

Sensitivitas: 0.025ppb

watesan deteksi:

Jaringan (otot, ati) ………………………… 0.1ppb

Madu ------------------------------------------------ -0,1 pb

Akurasi:

Jaringan kewan (otot lan ati) ………………………… 100±20%

Madu…………………………………………………… 100±20%

Presisi:CV kit ELISA kurang saka 10%.

11.Kabar

12.1 Nilai rata-rata saka nilai absorbansi sing dipikolehi kanggo standar lan conto bakal suda yen reagen lan conto durung diatur ing suhu kamar (20-25 ℃).

12.2 Aja ngidini microwells garing ing antarane langkah-langkah kanggo ngindhari reproduktifitas sing ora kasil lan operate langkah sabanjure sanalika sawise nutul wadhah microwells.

12.3 Goncang saben reagen alon-alon sadurunge digunakake.

12.4 Tansah kulit adoh saka solusi stop kanggo iku 0.5MH2SO4solusi.

12.5 Aja nggunakake kits out of date.Aja ngganti reagen saka macem-macem kelompok, utawa bakal nyuda sensitivitas.

12.6 Kondisi panyimpenan: Tansah kit ELISA ing 2-8 ℃, aja beku.Segel piring microwell liyane, Aja langsung suryo srengenge sak kabeh inkubasi.Nutupi piring microtiter dianjurake.

12.7 Solusi substrat kudu ditinggalake yen dadi warna.Reagen bisa rusak yen nilai absorbansi (450/630nm) saka standar nol kurang saka 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 Reaksi pewarnaan mbutuhake 15 menit sawise nambahake solusi substrat;Sampeyan bisa ndawakake wektu inkubasi kanggo 20min utawa luwih yen werna banget cahya kanggo ditemtokake., Aja ngluwihi 25min. Ing nalisir, shorten wektu inkubasi bener.

12.9 Suhu reaksi optimal yaiku 25 ℃.Suhu sing luwih dhuwur utawa luwih murah bakal nyebabake owah-owahan sensitivitas lan nilai absorbansi.

12.Kondisi panyimpenan lan wektu panyimpenan

Kondisi panyimpenan: 2-8 ℃.

Periode panyimpenan: 12 wulan.

 

 


  • Sadurunge:
  • Sabanjure:

  • Tulis pesen sampeyan ing kene lan kirimake menyang kita

    produk sing gegandhengan