mal

Kîta Immunoassay Enzîmê ya Pêşbazî ji bo Analîza Hêjdar a metabolîta Furazolidone (AOZ)

Kurte Danasîn:

Ev kîta ELISA ji bo tespîtkirina AOZ li ser bingeha prensîba immunoassay enzîmê nerasterast-hevrikî hatî çêkirin.Kulên mîkrotîter bi antîjena girêdayî BSA-yê ve têne girtin.AOZ di nimûneyê de bi antîjena ku li ser plakaya mîkrotîterê hatî pêçandî ji bo antîpodê hatî zêdekirin re pêşbaziyê dike.Piştî lêzêdekirina konjugata enzîmê, substrata krojenîk tê bikaranîn û sînyala bi spektrofotometerê tê pîvandin.Avgirtin bi hûrbûna AOZ-ê ya di nimûneyê de berevajî ye.


Detail Product

Tags Product

Kit Enzyme Immunoassay Competitive ji bo

Analysis Quantitative ofMetabolît Furazolidone(AOZ)

 

  1. 1.Paşî

Nîtrofuran antîbiyotîkên berfireh ên sentetîk in, ku bi gelemperî di hilberîna heywanan de ji ber taybetmendiyên xwe yên antîbakterî û pharmacokinetîkî yên hêja têne bikar anîn.Di heman demê de ew di hilberîna beraz, mirîşk û avî de wekî pêşengên mezinbûnê jî hatibûn bikar anîn.Di lêkolînên demdirêj ên bi heywanên laboratîfê de destnîşan kir ku dermanên dêûbav û metabolîtên wan taybetmendiyên kanserojen û mutajenîk nîşan didin.Ev bûye sedema qedexekirina nitrofuranan ji bo dermankirina heywanên ku ji bo hilberîna xwarinê têne bikar anîn.Dermanên nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin û nitrofurazone di sala 1993 de li Yekîtiya Ewropî di hilberîna heywanên xwarinê de hatin qedexe kirin û di 1995 de karanîna furazolidone hate qedexe kirin.

Pêdivî ye ku analîzkirina bermayiyên dermanên nitrofuran li ser bingeha tespîtkirina metabolîtên bi tevnhev ên dermanên bav û kalê nitrofuran be.Ji ber ku dermanên dêûbav pir zû têne metabolîzekirin, û metabolîtên nîtrofuran ên girêdayî tevnvîsê dê ji bo demek dirêj bimînin, van metabolîtan wekî armanc di tespîtkirina destdirêjiya nîtrofuranan de têne bikar anîn, ku di nav wan de metabolîta Furazolidone (AOZ), metabolîta Furaltadone (AMOZ) hene. Metabolît Nitrofurantoin (AHD) û Metabolît Nitrofurazone (SEM).

Bermayiyên AOZ bi gelemperî ji hêla LC-MS an LC-MS / MS ve têne destnîşankirin.Immunoassays enzyme, li gorî rêbazên kromatografiyê, di derheqê hestiyariyê, sînorê tespîtê, alavên teknîkî û hewcedariya demê de avantajên girîng nîşan dide.(Lêçûna dem: 45 min)

  1. 2.Prensîba Testê

Ev kîta ELISA ji bo tespîtkirina AOZ li ser bingeha prensîba immunoassay enzîmê nerasterast-hevrikî hatî çêkirin.Kulên mîkrotîter bi antîjena girêdayî BSA-yê ve têne girtin.AOZ di nimûneyê de bi antîjena ku li ser plakaya mîkrotîterê hatî pêçandî ji bo antîpodê hatî zêdekirin re pêşbaziyê dike.Piştî lêzêdekirina konjugata enzîmê, substrata krojenîk tê bikaranîn û sînyala bi spektrofotometerê tê pîvandin.Avgirtin bi hûrbûna AOZ-ê ya di nimûneyê de berevajî ye.

  1. 3.Applications

Ev kît dikare di analîza mîqdar û kalîte ya bermahiyên AOZ de were bikar anîntevnên heywanan(masûlke, kezeb hwd.), hingiv.

  1. 4.Xaç-reaksiyonên

Metabolît Furazolidone (AOZ)……………………..100%

Metabolît Furaltadone (AMOZ)……………………<0,1%

Metabolît nitrofurantoin (AHD)……………………<0,1%

Metabolît nitrofurazone (SEM)………………………<0,1%

Furazolidone……………………………………………….. 16,3%

Furaltadone……………………………………………<1%

Nitrofurantoin……………………………………………<1%

Nitrofurazone……………………………………………<1%

  1. 5.Materyalên Pêdivî ye

5.1Amûrên

----Spektrofotometera plakaya mîkrotîter (450nm/630nm)

---- Amûrên zuwakirina aveporator an nîtrojenê yên zivirî

----Homogenîzator /stomaker

----Şaker

----Mîksera Vortex

----Sentrîfuj

----Balansa analîtîk (înduktîf: 0.01g)

----Pîpeta derçûyî: 10ml

----Ampûla pîpeta lastîkî

----Ferba Volumetric: 100ml

----Fîra cam: 10ml

----Lûleya santrîfujê ya polystyrene: 2ml, 50ml

---- Micropipettes: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2Reagents

----Etyl acetate (AR)

----n-hexane (an n-heptane) (AR)

----Dîpotassium hîdrojen fosfat trihydrate

(K2HPO4.3H2O) (AR)

----Asîda hîdrochlorîk a konsantre (HCl, AR)

-----Metanol

---- Sodyûm hîdroksîd (NaOH, AR)

----Ava deyonkirî

  1. 6.Kit Components

l plakaya mîkrotîterê bi antîjenê hatiye pêçan, 96 bîr

l çareseriyên standard (6 şûşe, 1 ml/şûşe)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Kontrola standard a spiking: (1ml/şûşe)........100ppb

l Enzîma konjugata konsantrekirî 1ml........kapa sor

l Diluentên konjugata enzîmê 10ml………..kapa kesk

l Substrat A 7ml……………………………..kapa spî

l Substrat B 7ml……………………………..kapa sor

l Çareseriya rawestandinê 7ml……………………………………………

l 20×çareseriya şuştinê ya konsantrekirî 40ml

………………………………………………kapek zelal

l 2×çareseriya derxistina konsantrekirî 60ml….kapa şîn

l 2-Nîtrobenzaldehîd 15,1 mg……………………kapa spî

  1. 7.Amadekirina Reagents

Çare 1: reagenta derivative:

10 ml metanol têxin şûşeya ku 2-Nîtrobenzaldehîd heye û bihelînin.(bi giraniya 10 mM).

Çare 2: 0.1MK2HPO4çare:

Giraniya wê 22,8 g K2HPO4.3H2O bi 1L ava deionized ji bo helandinê.

Çare 3: Çareya HCl 1M

8,3 ml asîda hîdrochlorîk a konsantrekirî bihelînin bi ava deionized heta 100ml.

Çareserî 4:1M çareseriya NaOH

4 gr NaOH bi 100 ml ava deyonîzekirî bihelînin.

Çareserî 5: çareseriya derxistinê:

2 × çareseriya derxistina konsantrekirî bi ava deionîzekirî bi rêjeya qebareya 1:1 vekin.Ev çareserî dikare 1 mehê li 4℃ were parastin, ku dê ji bo nimûneyên derxistinê were bikar anîn.

Çare 6: çareseriya şuştinê:

Çareseriya şuştinê ya 20 × konsantrekirî bi ava deionîzekirî di rêjeya 1:19 de, ku dê ji bo şuştina lewheyan were bikar anîn, bişewitînin.Ev çareseriya tîrêjkirî dikare 1 mehê di 4℃ de were parastin.

  1. 8.Sample Preparations

8.1Hişyar û tedbîrên beriya operasyonê:

a) Ji kerema xwe di ceribandinê de serişteyên yekcar bikar bînin, û dema ku reagentên cihêreng vedigirin serişteyan biguherînin.

b) Bawer bikin ku hemî amûrên ceribandinê paqij in.

c) reagenta derivative dikare sê mehan li 2-8℃ were parastin;

d) Çareseriya HCl dikare 3 mehan li germahiya odeyê were parastin;

e) Çareseriya NaOH dikare 3 mehan li germahiya odeyê were parastin;

f) Nimûneyên nehatine dermankirin di cemidî de bihêlin (-20℃);

g) Nimûneyên dermankirî dikarin 24 demjimêran li 2-8℃ di tariyê de bêne parastin.

8.2 Mînakên tevn û kezebê yên heywanan:

----Nimûneyan bi homojenîzatorê homojen bikin;

---- Giraniya 1,0±0,05 g ji nimûneya tevna homojenkirî di lûleya santrîfujê ya 50 ml ya polîstirenê de ye.4 ml ava deionîzekirî, 0,5 ml çareseriya 1M HCl û 100 ul reagenta derivative lê zêde bikin (li çareseriya 1 binêre).Ji bo 2 deqîqeyan bihejînin.

---- Şevê li 37 ℃ (nêzîkî 16h) înkub bikin;

---- 5ml 0.1MK zêde bikin2HPO4 (çare2), 0,4 ml 1M NaOH (çare4) û 5 ml ethyl acetate.Ji bo 30s bi tundî bihejînin;

---- Li germahiya odeyê (20-25℃) ji bo 10 hûrdeman, herî kêm 3000 g santrîfuj bikin;

---- 2,5 ml ji qonaxa organîk a supernatant hildin nav boriyek camê ya paqij a 10 ml, bi gaza nîtrojenê ya 50-60 ℃ an evaporatorê zivirî hişk bikin;

---- Bermayê ziwa bi 1ml n-hexane (an n-heptane) bihelînin, 30 s vortex bikin, 1 ml çareya derxistinê lê zêde bikin (çare5), vortex 1min, bi tevahî tevlihev bikin.

---- Li germahiya odeyê (20-25) santrîfuj bikinoC) ji bo 5 min, herî kêm 3000g;

---- Qonaxa organîk a supernatant rakin;ji bo ceribandinê 50 μl ji qonaxa ava substratê bistînin.

 

8.4 Hingiv

---- 1,0±0,05g ji nimûneya hingivê homojenkirî bixin nav lûleya 50ml ya santrîfujê ya polistirenê;

---- 4 ml ava deionized, 0,5 ml 1M HCl (çare3) û 100μl reagenta derivative (çare1);2 hûrdeman bi tevahî bihejînin;

---- Şevê li 37 ℃ (nêzîkî 16h) înkubat bikin;

---- 5ml 0.1MK lê zêde bike2HPO4 (çare2), 0,4 ml 1M NaOH (çare4) û 5 ml ethyl acetate, ji bo 30s bi tundî bihejînin;

---- Li germahiya odeyê (20-25 ℃) ji bo 10 hûrdeman, herî kêm 3000 g santrîfuj bikin;

---- 2,5 ml ji qonaxa organîk a supernatant hildin nav boriyek camê ya paqij a 10 ml, bi gaza nîtrojenê ya 50-60 ℃ an evaporatorê zivirî hişk bikin;

---- Bermayê ziwa bi 1ml n-hexane (an n-heptane) bihelînin, 30 s vortex bikin, 1 ml çareya derxistinê lê zêde bikin (çare5), vortex 1min, bi tevahî tevlihev bikin.

---- Li germahiya odeyê (20-25) santrîfuj bikinoC) ji bo 10min, herî kêm 3000g;

---- Qonaxa organîk a supernatant rakin;ji bo ceribandinê 50 μl ji qonaxa ava substratê bistînin.

  1. 9.Pêvajoya assay

9.1Berî ceribandinê hişyar bikin

9.1.1 Bawer bikin ku hemî reagent û mîkrobat hemî li germahiya odeyê (20-25℃) bin.

9.1.2 Hemî reagentên mayî tavilê piştî bikar anînê vegerînin 2-8℃.

9.1.3 Şuştina mîkrokan bi rêkûpêk di pêvajoya vekolînê de gavek girîng e;ew faktora girîng a ji nû ve hilberandina analîza ELISA ye.

9.1.4 Di dema înkubasyonê de ji ronahiyê dûr bikevin û mîkrokaniyan veşêrin.

9.2 Gavên Assay

9.2.1 Hemî reagentan ji 30 hûrdeman zêdetir li germahiya odeyê (20-25℃) derxînin, berî bikar bînin homojen bikin.

9.2.2 Mîkrokên pêwîst derxînin û yên mayî tavilê di 2-8℃ de vegerînin çenteyê zip-lock.

9.2.3 Çareseriya şuştinê ya konsantrekirî û çareseriya derxistina konsantrekirî divê ji nû ve were germ kirin da ku berî bikar bînin li germahiya odeyê be.

9.2.4Jimare:Pêdivî ye ku her pozîsyonên mîkrokalê û hemî standard û nimûneyên jimarekirî ducar bêne xebitandin.Pîvanên standard û nimûneyan tomar bikin.

9.2.5Dilbûna çareseriya antîpodî ya konsantrekirî: Çarçoveya enzîmê ya konsantrekirî bi diluentên konjugata enzîmê bi rêjeya 1:10 (1 qat çareseriya enzîmê ya konsantrekirî: 10 qat rijandinên konjugata enzîmê) berz bike.

9.2.6Çareseriya standard / nimûne û çareseriya konjugata enzîmê zêde bikin: 50 μl çareseriya standard an nimûneya amadekirî li bîrên peywendîdar zêde bikin, 50 μl çareseriya konjugata enzîmê lê zêde bikin.Bi hejandina plakaya bi destan bi nermî tevlihev bikin û 30 hûrdeman di 25℃ de bi serşokê vekin.

9.2.7Cil: Bi nermî qapaxê jêkin û şilê ji bîrê birijînin û mîkrokaniyan bi 250 μl çareseriya şuştinê ya zirav bişon (çare6) di navberek 10 de ji bo 4-5 caran.Ava mayî bi kaxezek vegirtinê veşêrin (baba hewayê ya mayî bi tîpa ku nayê bikar anîn were rakirin).

9.2.8Rengdêr: Li her bîrekê 50 μl çareseriya substratê A û 50 mîlîtro çareseriya substratê B bikin.Bi hejandina plakê bi destan bi nermî tevlihev bikin û 15 hûrdeman li 25℃ bi serpêçê re bihêlin (binihêre 12.8).

9.2.11Pîvan: 50µl çareseriya rawestanê li her bîrekê zêde bikin.Bi hejandina plakaya bi destan bi nermî tevlihev bikin û vegirtinê di 450 nm de bipîvin (Pêşniyar kir ku bi dirêjahiya pêla dualî ya 450/630 nm pîvandin. Piştî zêdekirina çareseriya rawestanê encamê di nav 5 hûrdeman de bixwînin. )

10 Encam

10.1Percentage absorbance

Nirxên navînî yên nirxên vegirtinê yên ku ji bo standardan û nimûneyan hatine wergirtin bi nirxa vegirtinê ya standarda yekem (standard sifir) ve têne dabeş kirin û bi 100% têne zêdekirin.Bi vî rengî standarda sifir bi 100% re wekhev tête çêkirin û nirxên vegirtinê bi sedî têne destnîşan kirin.

=

B - standarda vegirtinê (an nimûne)

B0 ——standard sifir vegirtinê

10.2Curve Standard

----Ji bo xêzkirina kêşek standard: Nirxa vegirtinê ya standardan wekî y-tewra, nîv logarîtmîkî ya giraniya çareseriya standard AOZ (ppb) wekî x-xebatê bigirin.

---- Kêmbûna AOZ ya her nimûneyê (ppb), ku dikare ji kavilkirina kalibrasyonê were xwendin, bi faktora helandinê ya têkildar a her nimûneyek peydakirî re tê zêdekirin, û giraniya rastîn a nimûneyê tê bidestxistin.

Ji kerema xwe hişyar bikin:

Nermalava taybetî ji bo kêmkirina hemî daneyan hatî pêşve xistin, ku li ser daxwazê ​​​​ dikare were peyda kirin.

Faktora Dilution…………………………………………………2

10.Hestiyarî, rastbûn û rastbûn

Hisê nazik: 0.025ppb

Sînorê tespîtkirinê:

Tîçek (masûlk, kezeb)…………………………0.1ppb

Hûngiv------------------------------------------------- -0.1ppb

Tamî:

Tevna heywanan (masûlk û kezeb)……………………………………………………………………………………………………………………………………………

Hêlîn……………………………………………. 100±20%

Tamî:CV ya kîtê ELISA ji 10% kêmtir e.

11.Nivîsk

12.1 Ger reagent û nimûne li germahiya odeyê (20-25 ℃) nehatibin rêkûpêk kirin, nirxên navînî yên nirxên vegirtinê yên ku ji bo standard û nimûneyan hatine wergirtin dê kêm bibin.

12.2 Nehêlin ku mîkrokan di navbera gavan de zuwa bibin da ku ji nûveberbûna neserkeftî dûr bikevin û gavê din tavilê piştî ku tikandina xwedan mîkroyê zuwa bikin.

12.3 Berî ku bikar bînin her reagentê bi nermî bihejînin.

12.4 Çermê xwe ji çareseriya rawestandinê dûr bixin ji ber ku ew 0.5MH e2SO4çare.

12.5 Kitên kevnar bikar neynin.Reagentên beşên cûda neguherînin, an na ew ê hestiyariyê hilweşîne.

12.6 Rewşa hilanînê: Kîtên ELISA di 2-8℃ de bihêlin, necemidin.Peleyên mîkrobêhnê yên mayî mor bikin, Di dema hemî inkubasyonê de rasterast ji tîrêja rojê dûr bixin.Tê pêşniyar kirin ku lewheyên mîkrotîter veşêrin.

12.7 Çareseriya substratê ger reng bizivire divê were terikandin.Ger nirxa vegirtinê (450/630nm) ya standarda sifir ji 0,5 (A450nm<0,5) kêmtir be reagent xera bibin.

12.8 Reaksiyona rengînkirinê 15 hûrdem piştî lêzêdekirina çareseriya substratê hewce dike;Ger reng pir sivik be ku nayê destnîşankirin, hûn dikarin dema inkubasyonê 20 hûrdeman dirêj bikin., tu carî ji 25 hûrdeman derbas neke.

12.9 Germahiya reaksiyonê ya çêtirîn 25℃ e.Germahiya bilind an nizm dê bibe sedema guheztina nirxên hestiyar û vegirtinê.

12.Rewşa hilanînê û dema hilanînê

Rewşa hilanînê: 2-8℃.

Dema hilanînê: 12 meh.

 

 


  • Pêşî:
  • Piştî:

  • Peyama xwe li vir binivîse û ji me re bişîne

    berhemên related