продукт

Фуразолидон метаболитинин (AOZ) сандык анализи үчүн атаандаштыкка жөндөмдүү иммундук анализ комплекти

Кыска сүрөттөмө:

Бул ELISA комплекти кыйыр атаандаштыкка жөндөмдүү иммундук анализ принцибинин негизинде AOZ аныктоо үчүн иштелип чыккан.Микротитр скважиналары BSA-байланышкан антиген менен капталган.Үлгүдөгү AOZ кошулган антитело үчүн микротитр пластинкасында капталган антиген менен атаандашат.Фермент конъюгаты кошулгандан кийин хромогендик субстрат колдонулат жана сигнал спектрофотометр менен өлчөнөт.Абсорбция үлгүдөгү AOZ концентрациясына тескери пропорционалдуу.


Продукт чоо-жайы

Продукт тегдери

Конкуренттүү энзим иммуноанализ комплекти

Сандык талдооФуразолидон метаболити(AOZ)

 

  1. 1.Фон

Нитрофурандар синтетикалык кең спектрдеги антибиотиктер, алар эң сонун антибактериалдык жана фармакокинетикалык касиеттери үчүн жаныбарлардын өндүрүшүндө көп колдонулат.Алар ошондой эле чочко, канаттуулар жана суу чарба өндүрүшүндө өстүрүүчү катары колдонулган.Лабораториялык жаныбарлар менен узак мөөнөттүү изилдөөлөр негизги дарылар жана алардын метаболиттери канцерогендик жана мутагендик мүнөздөмөлөрдү көрсөттү.Бул тамак-аш өндүрүү үчүн колдонулган жаныбарларды дарылоо үчүн нитрофурандар тыюу салууга алып келди.Нитрофуран препараттары фуралтадон, нитрофурантоин жана нитрофуразон ЕБде 1993-жылы жаныбарлардын азык-түлүк өндүрүшүндө колдонууга тыюу салынган, ал эми 1995-жылы фуразолидонду колдонууга тыюу салынган.

Нитрофуран препараттарынын калдыктарын талдоо нитрофурандын негизги препараттарынын ткандар менен байланышкан метаболиттерин аныктоого негизделиши керек.Негизги дары-дармектер абдан тез метаболизденгендиктен жана ткань менен байланышкан нитрофурандын метаболиттери узак убакытка чейин сакталып тургандыктан, бул метаболиттер нитрофурандарды кыянаттык менен пайдаланууну аныктоодо максат катары колдонулат, анын ичинде Фуразолидон метаболитин (AOZ), Фуралтадон метаболитин (AMOZ) камтыйт. ), Nitrofurantoin метаболити (AHD) жана Nitrofurazon метаболити (SEM).

AOZ-калдыктары көбүнчө LC-MS же LC-MS/MS тарабынан аныкталат.Хроматографиялык методдор менен салыштырганда ферменттик иммундук анализдер сезгичтик, аныктоо чеги, техникалык жабдуулар жана убакыт талабы боюнча бир топ артыкчылыктарды көрсөтөт.(Убакыт баасы: 45мин)

  1. 2.Test Principle

Бул ELISA комплекти кыйыр атаандаштыкка жөндөмдүү иммундук анализ принцибинин негизинде AOZ аныктоо үчүн иштелип чыккан.Микротитр скважиналары BSA-байланышкан антиген менен капталган.Үлгүдөгү AOZ кошулган антитело үчүн микротитр пластинкасында капталган антиген менен атаандашат.Фермент конъюгаты кошулгандан кийин хромогендик субстрат колдонулат жана сигнал спектрофотометр менен өлчөнөт.Абсорбция үлгүдөгү AOZ концентрациясына тескери пропорционалдуу.

  1. 3.Тиркемелер

Бул комплект АОЗ калдыктарынын сандык жана сапаттык анализинде колдонулушу мүмкүнанима ткандары(булчуң, боор ж.б.), бал.

  1. 4.Кайчылаш реакциялар

Фуразолидон метаболити (AOZ)……………………..100%

Фуралтадон метаболити (АМОЗ)…………………<0,1%

Нитрофурантоин метаболити (AHD)……………………<0,1%

Нитрофуразон метаболити (SEM)………………………<0,1%

Фуразолидон…………………………………….…..…16,3%

Фуралтадон………………………………………….…<1%

Нитрофурантоин…………………………………….…….…<1%

Нитрофуразон………………………………………..…<1%

  1. 5.Талап кылынган материалдар

5.1Жабдуулар

---- Микротитр плитасы спектрофотометри (450нм/630нм)

---- Айлануучу бууланткыч же азот кургатуучу приборлор

---- Гомогенизатор / ашказан

----Шакер

---- Vortex аралаштыргыч

---- Центрифуга

---- Аналитикалык баланс (индуктивдүүлүк: 0,01г)

---- Бүтүрүлгөн пипетка: 10мл

---- Резина пипетка лампочкасы

---- Колба: 100мл

---- Айнек колба: 10мл

---- Полистиролдук центрифуга түтүгү: 2мл, 50мл

----Микропипеттер: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2Реагенттер

----Этилацетат (AR)

----n-гексан (же н-гептан) (AR)

---- Дикалий суутек фосфат тригидрат

(K2HPO4.3H2О) (AR)

---- Концентрленген туз кислотасы (HCl, AR)

-----Метанол

----Натрий гидроксиди (NaOH, AR)

---- Деионизацияланган суу

  1. 6.Комплекттин компоненттери

l Антиген менен капталган микротитр плитасы, 96 скважина

л Стандарттык эритмелер (6 бөтөлкө, 1 мл / бөтөлкө)

0ppb,0,025ppb,0,075ppb,0,225ppb,0,675ppb,2,025ppb

l Spiking стандарттык башкаруу: (1 мл/бөтөлкө).......100ppb

л Концентрацияланган фермент конъюгаты 1мл.......кызыл капкак

l Enzyme conjugate эриткичтери 10мл………..жашыл капкак

l Субстрат А 7мл……………………………..ак капкак

l Субстрат В 7мл………………………………..кызыл капкак

l Stop эритмеси 7мл……………………………сары калпак

л 20 × концентрацияланган жуугуч эритмеси 40 мл

……………………………………………….тунук капкак

л 2 × концентрацияланган экстракция эритмеси 60мл….көк капкак

л 2-нитробензальдегид 15,1 мг………………ак капкак

  1. 7.Реагенттерди даярдоо

Чечим 1: туунду реагент:

2-Нитробензальдегиди бар бөтөлкөгө 10 мл метанолду кошуп, эритиңиз.(10мМ концентрациясында).

Чечим 2: 0.1MK2HPO4чечим:

Салмагы 22,8 г К2HPO4.3H2О 1 л деионизацияланган сууну эритүү үчүн.

Чечим 3: 1M HCl эритмеси

8,3 мл концентраттуу туз кислотасын эритет деионизацияланган суу менен 100 мл.

Чечим 4:1М NaOH эритмеси

4г NaOH 100мл деионизацияланган суу менен эритет.

Чечим 5: экстракция чечими:

2×концентрацияланган экстракция эритмени деионизацияланган суу менен 1:1 көлөмдүк катышта суюлтуңуз.Бул эритмени 1 ай бою 4℃ температурада сактоого болот, ал алынган үлгүлөрдү алуу үчүн колдонулат.

Чечим 6: жуу эритмеси:

20 × концентрацияланган жуу эритмени 1:19 көлөмүндөгү деионизацияланган суу менен суюлтуңуз, ал плиталарды жуу үчүн колдонулат.Бул суюлтулган эритмени 4℃ температурада 1 ай сактаса болот.

  1. 8.Үлгү даярдоо

8.1Операциядан мурун эскертүү жана сактык чаралары:

а) Экспериментте бир жолку кеңештерди колдонуңуз жана башка реагентти сиңирип алууда учтарды өзгөртүңүз.

б) Бардык эксперименталдык приборлор таза экендигин текшериңиз.

в) туунду реагент үч ай бою 2-8℃ температурада сакталышы мүмкүн;

г) HCl эритмеси бөлмө температурасында 3 ай бою сакталышы мүмкүн;

д) NaOH эритмеси бөлмө температурасында 3 айга чейин сакталышы мүмкүн;

е) тазаланбаган үлгүлөрдү тоңдургучта сактаңыз (-20 ℃);

g) Дарыланган үлгүлөрдү караңгылыкта 2-8℃ температурада 24 саатка сактоого болот.

8.2 Жаныбарлардын ткандарынын жана боорунун үлгүлөрү:

---- үлгүлөрдү гомогенизатор менен гомогендөө;

---- 50мл полистирол центрифугасынын түтүкчөсүнө гомогендештирилген кыртыш үлгүсүнүн 1,0±0,05 г салмагы.4мл деионизацияланган сууну, 0,5мл 1М HCl эритмесин жана 100ул туунду реагентти кошуңуз (1-эритимди караңыз).2 мүнөткө чайкаңыз.

---- Түнкүсүн 37℃ температурада инкубациялоо (болжол менен 16 саат);

---- 5мл 0,1МК кошуңуз2HPO4 (чечим2), 0,4мл 1М NaOH (чечим4) жана 5 мл этилацетат.30 үчүн катуу чайкап;

---- Бөлмө температурасында (20-25 ℃) 10 мин, жок дегенде 3000 г центрифугалоо;

---- 2,5 мл органикалык фазадан 10 мл таза айнек түтүккө алыңыз, 50-60 ℃ азот газы же айлануучу бууланткыч менен кургатыңыз;

---- Кургак калдыкты 1мл н-гексан (же н-гептан) менен эритип, 30 секундга куюп, 1мл экстракция эритмени кошобуз (чечим5), 1мин куюп, толугу менен аралаштырыңыз.

---- Бөлмө температурасында центрифугалоо (20-25oC) 5 мин, 3000г кем эмес;

---- Жогорку органикалык фазаны алып салуу;анализ үчүн субстрат суу фазасынан 50μl алыңыз.

 

8.4 Бал

---- 1,0 ± 0,05 г гомогендештирилген бал үлгүсүн 50 мл полистирол центрифугасынын түтүкчөсүнө таразалоо;

---- 4мл деионизацияланган суу, 0,5мл 1М HCl кошуңуз (чечим3) жана 100мкл туунду реагент (чечим1);толугу менен 2 мүнөт чайкап;

---- Түнкүсүн 37 ℃ температурада инкубациялоо (болжол менен 16 саат);

----5мл 0,1МК кошуңуз2HPO4 (чечим2), 0,4мл 1М NaOH (чечим4) жана 5мл этилацетат, 30с катуу чайкагыла;

---- Бөлмө температурасында (20-25 ℃) 10 мин, жок дегенде 3000 г центрифугалоо;

---- 2,5 мл органикалык фазадан 10 мл таза айнек түтүккө алып, 50-60 ℃ азот газы же айлануучу бууланткыч менен кургатыңыз;

---- Кургак калдыкты 1 мл н-гексан (же н- гептан) менен эритип, 30 секундга куюп, 1 мл экстракция эритмени кошобуз (чечим5), 1мин куюп, толугу менен аралаштырыңыз.

---- Бөлмө температурасында центрифугалоо (20-25oC) 10 мин, кеминде 3000г;

---- Supernatant органикалык фазасын алып салуу;анализ үчүн субстрат суу фазасынан 50μl алыңыз.

  1. 9.Талдоо процесси

9.1Талдоодон мурун эскертүү

9.1.1 Бардык реагенттер жана микроуюктар бөлмө температурасында (20-25℃) болушун текшериңиз.

9.1.2 Калган реагенттерди колдонгондон кийин дароо 2-8 ℃ чейин кайтарыңыз.

9.1.3 Микрокудуктарды туура жуу - анализдөө процессиндеги маанилүү кадам;бул ELISA анализинин кайталанышы үчүн маанилүү фактор болуп саналат.

9.1.4 Инкубация учурунда жарыктан алыс болуңуз жана микроуюктарды жаап коюңуз.

9.2 Талдоо кадамдары

9.2.1 Бардык реагенттерди бөлмө температурасында (20-25℃) 30 мүнөттөн ашык убакытка чыгарыңыз, колдонуудан мурун гомогенизациялаңыз.

9.2.2 Керектүү микро кудуктарды алып чыгып, калганын дароо 2-8℃ температурада сыдырма баштыкка салып коюңуз.

9.2.3 Концентрацияланган жуугуч эритмени жана концентрацияланган экстракция эритмени колдонуудан мурун бөлмө температурасында болушу үчүн кайра жылытылуу керек.

9.2.4Номер:Ар бир микрокудуктун позициялары номерленген жана бардык стандарттар жана үлгүлөр эки нускада иштетилиши керек.Стандарттарды жана үлгүлөрдү позицияларды жазыңыз.

9.2.5Концентрацияланган антитело эритмени суюлтуу: концентрацияланган фермент эритмесин 1:10 көлөмдүк катышта ферменттик конъюгациялык эриткичтер менен суюлтуңуз (1 эселенген концентрацияланган фермент эритмеси: 10 бүктөлгөн фермент конъюгациялык эриткичтери).

9.2.6Стандарттык эритмени/үлгүнү жана энзим конъюгат эритменин кошуңуз: 50 мкл стандарттуу эритмени же даярдалган үлгүнү тиешелүү скважиналарга кошуңуз, 50 мкл энзим коньюгат эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана капкагы менен 25 ℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз.

9.2.7Жуу: Капкакты акырын алып, суюктукту скважиналардан төгүңүз жана микро тешиктерди 250 мкл суюлтулган жуу эритмеси менен чайкаңыз (чечим6) 10 секунд аралыкта 4-5 жолу.Калган сууну соргуч кагаз менен сиңирип алыңыз (калган аба көбүкчөсүн пайдаланылбаган учу менен жок кылууга болот).

9.2.8Түстүү: Ар бир кудукка 50мл субстрат эритмесин жана 50ул субстрат B эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана капкагы менен 25℃ температурада 15 мүнөт инкубациялаңыз (12.8ди караңыз).

9.2.11өлчөө: Ар бир скважинага 50 мкл токтотуу эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана 450нмде абсорбенцияны өлчөңүз (Ал 450/630нм кош толкун узундугу менен өлчөөнү сунуш кылат. Токтоочу эритме кошулгандан кийин 5 мүнөттүн ичинде натыйжаны окуңуз. )

10 Жыйынтыктар

10.1Проценттик абсорбент

Стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбциялык маанилердин орточо маанилери биринчи эталондун (нөлдүк эталон) абсорбциялык маанисине бөлүнөт жана 100% көбөйтүлөт.Ошентип, нөлдүк стандарт 100% га барабар түзүлөт жана абсорбенттик маанилер пайыздар менен келтирилет.

=

B —— абсорбция стандарты (же үлгү)

В0 ——абсорбциянын нөл стандарты

10.2Стандарттык ийри

----Стандарт ийри сызыгын чийүү үчүн: Стандарттардын абсорбциялык маанисин y огу катары, AOZ стандарттуу эритмесинин концентрациясынын жарым логарифмдик (ppb) x огу катары алыңыз.

---- Калибрлөө ийри сызыгынан окууга мүмкүн болгон ар бир үлгүнүн AOZ концентрациясы (ppb) ар бир кийинки үлгүдөгү суюлтуу коэффициентине көбөйтүлөт жана үлгүнүн иш жүзүндөгү концентрациясы алынат.

Суранам көңүл буруңуз:

Бардык маалыматтарды кыскартуу үчүн атайын программалык камсыздоо иштелип чыккан, ал суроо боюнча берилиши мүмкүн.

Суюлтуу фактору…………………………………………………2

10.Сезимталдуулук, тактык жана тактык

Сезимталдуулук: 0.025ppb

Аныктоо чеги:

Ткань (булчуң, боор)………………………0,1ppb

Бал------------------------------------------------- -0.1ppb

Тактыгы:

Жаныбар тканы (булчуң жана боор)…………………100±20%

Бал………………………………………………….. 100±20%

Тактык:ELISA комплектинин резюмеси 10% дан аз.

11.Эскертүү

12.1 Эгерде реагенттер жана үлгүлөр бөлмө температурасына чейин (20-25 ℃) жөнгө салынбаса, стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбциялык маанилердин орточо мааниси төмөндөйт.

12.2 Ийгиликсиз кайталанууга жол бербөө үчүн микро уячалардын кадамдардын ортосунда кургап кетишине жол бербеңиз жана микро кудук кармагычты таптагандан кийин дароо кийинки кадамды иштетиңиз.

12.3 Колдонуунун алдында ар бир реагентти акырын чайкаңыз.

12.4 Териңизди токтотуучу эритмеден алыс кармаңыз, анткени ал 0,5MH2SO4чечим.

12.5 Эскирген комплекттерди колдонбоңуз.Ар кандай партиялардагы реагенттерди алмаштырбаңыз, антпесе ал сезгичтикти төмөндөтөт.

12.6 Сактоо шарты: ELISA комплекттерин 2-8℃ температурада сактаңыз, тоңдурбаңыз.Чакан түтүкчөлөрдү мөөр менен бекитиңиз, бардык инкубация учурунда күн нурунан сактаныңыз.Микротитрлик плиталарды жабуу сунушталат.

12.7 Субстрат эритмеси түстүү болуп калса, аны таштап салуу керек.Эгерде нөлдүк стандарттын абсорбциялык мааниси (450/630нм) 0,5тен (A450nm<0,5) аз болсо, реагенттер начарлашы мүмкүн.

12.8 түстүү реакция субстрат эритмеси кошулгандан кийин 15мин керек;Түсү өтө ачык болсо, инкубация убактысын 20 мүнөткө же андан көпкө узарта аласыз., эч качан 25 мүнөттөн ашпаңыз. Тескерисинче, инкубация убактысын туура кыскартыңыз.

12.9 Оптималдуу реакция температурасы 25℃.Жогорку же төмөн температура сезгичтиктин жана абсорбенттик маанилердин өзгөрүшүнө алып келет.

12.Сактоо абалы жана сактоо мөөнөтү

Сактоо шарты: 2-8℃.

Сактоо мөөнөтү: 12 ай.

 

 


  • Мурунку:
  • Кийинки:

  • Бул жерге билдирүүңүздү жазып, бизге жөнөтүңүз

    байланыштуу буюмдар