product

1. 1 .Background

Nitrofurani sunt synthetica lato-spectrum antibioticorum, quae frequenter in productione animalis utuntur propter excellentias proprietates antibacterial et pharmacokineticae.Etiam aucti auctorum in suillo, gallinarum et aquatilium productione usi sunt.Longo termino studia cum lab animalibus significaverunt parentem medicinae et metabolitae eorum notas carcinogenicas et mutagenicas ostendisse.Inde vetitum nitrofurans induxit ad productionem cibi curationem animalium adhibitorum.Medicamenta nitrofurana furaltadone, nitrofurantoin et nitrofurazona ab usu in ciborum productione animali in EU anno 1993 interdicti sunt, et usus furazolidone anno 1995 prohibitus est.

Analysis medicamentorum reliquiarum nitrofuranae nititur in detectione ligatorum metabolitarum medicamentorum parentis nitrofurani.Cum parens medicamenta nimis celeriter metabolita sunt, et textus metabolitae nitrofuranae ligatus diu retinebit, hae metabolitae adhibentur ut scopo in abusu nitrofurans deprehensio, quod metabolitum Furazolidone includunt (AOZ), metabolitae Furaltadone (AMOZ. ), nitrofurantoin metabolitae (AHD) et metabolitae Nitrofurazonis (SEM).

AOZ-residua frequentissime ab LC-MS vel LC-MS/MS determinantur.Enzyme immunoassaes, cum methodis chromatographicis comparatae, magnas utilitates ostendunt circa sensum, modum deprehendendi, technici apparatum ac temporis exigentiam.(Tempus sumptus: 45min)

1. 2.Test Principium

Hoc ornamentum ELISA designatum est ad deprehendendum AOZ secundum principium enzyme immunoassay indirectae-competitivae.Putei microtiter obductis captis BSA antigenis coniunguntur.AOZ in sample certat cum antigeno lamina microtiter obducta pro anticorpore addita.Post additionem enzyme conjugatae, substratum chromogenicum adhibetur et signum mensuratur per spectrophotometrum.effusio AOZ in specimen reciproce proportionalis est.

1. 3.Applications

Hoc ornamentum adhiberi potest in analysi quantitativa et qualitativa reliquiarum in AOZanima tela(Musculus, iecoris etc.), mel.

1. 4.Cross-progressiones

Furazolidone metabolite (AOZ) ..................................100%

Furaltadone metabolite (AMOZ) ................................................<0.1%

Nitrofurantoin metabolite (AHD) ..................................<0.1%

Nitrofurazone metabolite (SEM) ..................................................<0.1%

Furazolidone …………………………………………… 16.3%

Furaltadone ……………………………………………<1%

Nitrofurantoin ……………………………………………<1%

Nitrofurazone ……………………………………………<1%

1. 5.materiae required

5.1Apparatus

---- Microtiter lamina spectrophotometer (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator vel NITROGENIUM instrumentorum exsiccatio

---- Homogenizer/stomacher

---- Shaker

---- Vortex mixer

----Centrifuge

---- Analytica statera (inductance: 0.01g)

---- lectus pipette: 10ml

---- Flexilis pipette bulbus

---- LAGONA: 100ml

----Glass: 10ml

---- Polytyrene tubi centrifugii: 2ml, 50ml

---- Micropipettes: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2Reagents

---- Ethyl acetatis (AR)

---- n-hexane (or n-heptane) (AR)

---- Dipotassium hydrogenii phosphas trihydratorum

(K₂HPO₄.3H₂O)

---- Acidi hydrochlorici attenti (HCl, AR)

-----Methanol

---- Sodium hydroxidum (NaOH, AR)

---- Deionized aqua

1. 6.Ornamentum Components

l Microtiter lammina obducta cum antigen, 96 putei

l solutions Standard (6 utres, 1ml/utrem)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Spiking standard control : (1ml/bottle) .......100ppb

l Attenti enzyme conjugati 1ml...... rubri

l Enzyme conjugatum diluentium 10ml ..

l Substratum A 7ml ................

l Substratum B 7ml ................

l Siste solutionem 7ml ................

l 20× attenti lava solutio 40ml

................................................

l 2×solutio attenti extractionis 60ml….blue cap

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg .

1. 7.Reagentia Praeparatio

Solutio 1: reagens derivativa;

Adde 10ml methanolum in utrem habentem 2-Nitrobenzaldehyde et dissolve.(ad intentionem 10mM).

Solutio 2: 0.1MK₂HPO₄solutio;

Expende 22.8g K₂HPO₄.3H₂IO AD 1L Aquae deionized dissolvere.

Solutio 3: 1M HCl solutionem

Acidi hydrochlorici attenti dissolve 8.3ml cum deionized aqua 100ml.

Solutio in quarto.1M NaOH solution

Dissolve 4g NaOH cum 100ml aqua deionizata.

Solutio 5: solutione extractionis:

Diluunt 2× solutionem extractionis attenti cum aqua deionizata in ratione voluminis 1:1.Haec solutio conservari potest pro 1mense ad 4°, quod ad exempla extrahenda adhiberi poterit.

Solutio 6: Lava solutio;

Diluendum 20× solutionem attenti lava cum aqua deionizata in ratione voluminis 1:19, quae laminas lavare adhibebitur.Haec solutio diluta conservari potest per 1 mensem ante 4℃.

1. VIII.Sample Apparatus

8.1Animadverte et cautiones ante operationem;

a) Quaeso utaris apicibus in experimento, et apices muta cum diversis gerentis absorbentis.

b) Fac omnia instrumenta experimenta munda.

c) vices gerens inde conservari potest ad 2-8° per tres menses;

d) Solutio HCl ad cella temperies per 3 menses conservari potest;

e) Solutio NaOH conservari potest per 3 menses in cella temperie;

f) Increatum exemplaria in frigore (-20℃);

g) Specimina tractata conservari possunt pro 24h ad 2-8℃ in tenebris.

8.2 Animal textus et iecoris exempla:

---- Homogenize exempla cum homogenizer;

---- Pondus 1.0± 0.05g specimen texti homogenized in 50ml polystyrenum tubi centrifugii.Adde aquam 4ml deionizatam, 0.5ml 1M HCl solutionem et 100ul derivativum reagens (vide solutionem 1).Excute pro 2min.

---- Incubare 37℃ pernoctare (circa 16h);

---- Add 5ml 0.1MK₂HPO₄ (solution2), 0.4ml 1M NaOH (solution4) et 5ml ethyl acetas.30s Acriter excutere ;

---- Centrifugium ad cella temperies (20-25℃) pro 10min, ad minimum 3000g;

---- Accipe 2.5ml phases supernatantis organici in 10ml tubo vitreo mundo, cum 50-60℃ gasi nitrogenii vel gyratorii evaporatoris sicce;

---- Solve reliquias aridas cum 1ml n-hexane (vel n- heptane), vortice pro 30s, solutionem extractionis 1ml adde (solution5) vorticem 1min miscere.

---- Centrifuge ad locus temperatus (20-25^oC) pro 5min, saltem 3000g;

---- Organicum supernatantem periodum remove;sume 50µl aquae subiectae phase ad primordium.

8.4 Honey

---- 1.0±0.05g specimen mellis homogenisatum in tubo centrifugii 50ml polystyrene;

---- Adde 4ml aquam deionatam, 0.5ml 1M HCl (solution3) et 100μl gerens derivativum (solution1);excutite totaliter ad 2min;

---- Incubare 37℃ pernoctare (circa 16h);

---- Add 5ml 0.1MK₂HPO₄ (solution2), 0.4ml 1M NaOH (solution4) et 5ml ethyl acetas, acriter quate pro 30*;

---- Centrifugium ad cella temperies (20-25℃) pro 10min, ad minimum 3000g;

---- Accipe 2.5ml phases organici supernatantis in 10ml tubo vitreo mundo, cum 50-60℃ gasi nitrogenii vel gyratorii evaporatoris sicce;

---- Dissolve aridam reliquias cum 1ml n-hexane (vel n- heptane), vortice pro 30s, solutionem extractionis 1ml adde (solution5) vorticem 1min miscere.

---- Centrifuge ad locus temperatus (20-25^oC) pro 10min, saltem 3000g;

---- Organicum supernatantem periodum remove;sume 50µl aquae subiectae phase ad primordium.

1. VIIII.Processus primordium

9.1Notitia in conspectu primordium

9.1.1 Fac omnes regentes et microwellos omnes in cella temperie (20-25℃).

9.1.2 Reliquos omnes regentes ad 2-8℃ statim post usum redi.

9.1.3 lotis microwellis recte maximus gradus est in processu tentationis;elementum vitale est ad reproducibilitatem analysis ELISA.

9.1.4 Fuge lucem et microwellum incubatione tege.

9.2 Asssay Steps

9.2.1 Omnes regentes ad cella temperies (20-25℃) sunt plus quam 30 min, homogenize ante usum.

9.2.2 Microwellum opus habe et reliquas in peram cincinnis ad 2-8℃ statim redde.

9.2.3 Solutio contracta lotura et solutio contractae contractae praemonenda est ut sit in cella temperies ante usum.

9.2.4Numerus:Singulis microwell positionibus numeratis et omnia signa et exempla in du- plici currere debent.Notare signa et exempla positionum.

9.2.5Dilutio concentrata antibody solution: solutionem enzyme contractam dilue cum diluentibus enzyme conjugatis in tomo ratione 1, 10(1 plica solutio enzyme contracta: 10 plica enzyme diluentium conjugatorum).

9.2.6Solutio vexillum addere / solutionem enzyme et enzyme conjugatam: 50µl solutionis vexillum seu specimen parato ad puteos respondentes adde, 50µl enzyme solutionem coniugatam adde.Commisce leniter concutiendo bracteam manually et incubare pro 30min at 25℃ operculo.

9.2.7lava: tegumentum leniter remove et liquorem e puteis infunde et microwellum cum 250µl solutione dilutum ablue (solutionVI) interuallo 10s pro 4-5 temporibus.Residua aquam hauriunt cum charta bibula (cetera bulla aere insueto apice eliminari potest).

9.2.8Coloratio: solutionem subiectam 50µl adde A et 50ul solutionem subiectae B unicuique bene.Commisce leniter gestando laminam manually et incubare pro 15min at 25℃ cum operculo (cf. 12.8).

9.2.11mensura: 50µl solutionem sistendi cuiusque bene adde.Leniter mittendo bractea manually et metire absorpiam ad 450nm (Suggessit mensura cum duali adaequatione 450/630nm. Lege exitum intra 5min post solutionem sistendi additam).

10 Proventus

10.1CENTESIMA absorbance

Mediocritas valorum absorbance pro signis consecutis et exemplaria divisa sunt per absorbance valorem primi vexillum (nullum vexillum) et multiplicatum per C%.Vexillum nulla est ita aequale %% ac valores absorbance in percentages adducuntur.

=

B --absorbance vexillum (vel specimen)

B0 --absorbance nulla vexillum

10.2Latin Curve

---- Ut vexillum curvam ducas: Sume absorbance valorem signorum y-axis, logarithmicum semi- levationis solutionis vexillum AOZ (ppb) ut x-axis.

---- The AOZ concentratio uniuscuiusque exempli (ppb), quae ex curva calibratione legi potest, multiplicatur per factorem dilutionis respondentis cuiusvis specimen consecutum, et retrahitur actualis specimen specimen.

Quaeso animadverto:

Specialis programmatus est ad omnes reductiones datae, quae postulationi praestari possunt.

Dilution factor................

10.Sensibilitas, accuratio et praecisio

Sensibilitas: 0.025ppb

Deprehensio modus:

TEXTUS (musculus, iecoris) ................................................. 0.1ppb

Mel------------------------------------------------- -0.1ppb

Sagaciter:

TEXTUS animalis (musculi et hepatis) ................. .

MELLE .................................................

Subtilitas:CV ornamentum ELISA minus est quam 10%.

11.Notice

12.1 Mediocres valores absorbance pro signis consecuti et exemplaria reducentur, si reagentes et exempla ad cella temperiei non moderata (20-25℃).

12.2 Nolite permittere microwellos inter gradus siccescere ad reproducibilitatem infeliciter vitandam et proximum gradum operandum immediate post microwellum possessorem sonum.

12.3 Excute quamque iodo leniter ante usum.

12.4 Pellem tuam a solutione stop siste quia est 0.5MH₂SO₄solutio.

12.5 Noli rhoncus obsole uti.batches diversae reagentes non commutant, alioquin sensus decidet.

12.6 Repono conditionem: Serva ELISA kits 2-8℃, non congelatur.Requiem sigillum microwellum laminas, fuge rectum solis in omnibus incubationibus.Tegere laminas microtiter commendatur.

12.7 Substrata solutio relinquenda est si in colore versatur.Reagentes debilitari possunt si absorbance valor (450/630nm) vexillum zerum minus est quam 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 Coloratio reactionis XV min indiget solutione subiecta addita;Incubationis tempus prorogare potes ad 20min vel plus, si color levius est ad determinandum., numquam excedunt 25min. Sed contra, incubationis tempus apte minuat.

12.9 Optimam reactionem temperatus est 25℃.Superior vel inferior temperatus ducet ad mutationes sensibilitatis et absorbentiae valorum.

XII.Repono conditione et repono tempus

Repono conditionem: 2-8℃.

Repono tempus: 12months.