ഉൽപ്പന്നം

1. 1.പശ്ചാത്തലം

നൈട്രോഫുറൻസ് സിന്തറ്റിക് ബ്രോഡ്-സ്പെക്ട്രം ആൻറിബയോട്ടിക്കുകളാണ്, അവ മികച്ച ആൻറി ബാക്ടീരിയൽ, ഫാർമക്കോകിനറ്റിക് ഗുണങ്ങൾക്കായി മൃഗങ്ങളുടെ ഉൽപാദനത്തിൽ പതിവായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.പന്നി, കോഴി, ജല ഉൽപ്പാദനം എന്നിവയിൽ വളർച്ച പ്രമോട്ടർമാരായും അവ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു.ലാബ് മൃഗങ്ങളുമായുള്ള ദീർഘകാല പഠനങ്ങളിൽ, പാരന്റ് മരുന്നുകളും അവയുടെ മെറ്റബോളിറ്റുകളും കാർസിനോജെനിക്, മ്യൂട്ടജെനിക് സവിശേഷതകൾ കാണിക്കുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിച്ചു.ഇത് ഭക്ഷ്യ ഉൽപാദനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കുന്ന മൃഗങ്ങളുടെ ചികിത്സയ്ക്കായി നൈട്രോഫുറാൻ നിരോധിക്കുന്നതിന് കാരണമായി.1993-ൽ നൈട്രോഫുറാൻ മരുന്നുകളായ ഫ്യൂറൽറ്റാഡോൺ, നൈട്രോഫുറാന്റോയിൻ, നൈട്രോഫുരാസോൺ എന്നിവ യൂറോപ്യൻ യൂണിയനിൽ ഭക്ഷ്യ മൃഗങ്ങളുടെ ഉൽപാദനത്തിൽ ഉപയോഗിക്കുന്നത് നിരോധിച്ചു, 1995-ൽ ഫ്യൂറസോളിഡോണിന്റെ ഉപയോഗം നിരോധിച്ചു.

നൈട്രോഫുറാൻ മരുന്നുകളുടെ അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ വിശകലനം നൈട്രോഫുറാൻ പാരന്റ് മരുന്നുകളുടെ ടിഷ്യു ബന്ധിത മെറ്റബോളിറ്റുകളുടെ കണ്ടെത്തലിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതായിരിക്കണം.പാരന്റ് മരുന്നുകൾ വളരെ വേഗത്തിൽ മെറ്റബോളിസീകരിക്കപ്പെടുകയും ടിഷ്യു ബന്ധിത നൈട്രോഫുറാൻ മെറ്റബോളിറ്റുകൾ വളരെക്കാലം നിലനിർത്തുകയും ചെയ്യുന്നതിനാൽ, ഈ മെറ്റബോളിറ്റുകൾ നൈട്രോഫുറാനുകളുടെ ദുരുപയോഗം കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള ലക്ഷ്യമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതിൽ ഫ്യൂറാസോളിഡോൺ മെറ്റാബോലൈറ്റ് (AOZ), ഫ്യൂറൽടഡോൺ മെറ്റാബോലൈറ്റ് (AMOZ) ഉൾപ്പെടുന്നു. ), Nitrofurantoin metabolite (AHD), Nitrofurazone metabolite (SEM).

AOZ-അവശിഷ്ടങ്ങൾ LC-MS അല്ലെങ്കിൽ LC-MS/MS ആണ് സാധാരണയായി നിർണ്ണയിക്കുന്നത്.ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് രീതികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ എൻസൈം ഇമ്മ്യൂണോഅസെയ്‌സ്, സംവേദനക്ഷമത, കണ്ടെത്തൽ പരിധി, സാങ്കേതിക ഉപകരണങ്ങൾ, സമയ ആവശ്യകത എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട് ഗണ്യമായ നേട്ടങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു.(സമയ ചെലവ്: 45 മിനിറ്റ്)

1. 2.ടെസ്റ്റ് തത്വം

ഈ ELISA കിറ്റ്, പരോക്ഷ-മത്സര എൻസൈം ഇമ്മ്യൂണോഅസെയുടെ തത്വത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി AOZ കണ്ടുപിടിക്കാൻ രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിട്ടുള്ളതാണ്.മൈക്രോടൈറ്റർ കിണറുകൾ ക്യാപ്‌ചർ ബിഎസ്എ-ലിങ്ക്ഡ് ആന്റിജൻ കൊണ്ട് പൊതിഞ്ഞതാണ്.ചേർത്ത ആന്റിബോഡിക്കായി മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റിൽ പൊതിഞ്ഞ ആന്റിജനുമായി സാമ്പിളിലെ AOZ മത്സരിക്കുന്നു.എൻസൈം സംയോജനം ചേർത്തതിനുശേഷം, ക്രോമോജെനിക് സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ഉപയോഗിക്കുകയും സിഗ്നൽ ഒരു സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.സാമ്പിളിലെ AOZ സാന്ദ്രതയ്ക്ക് വിപരീത അനുപാതത്തിലാണ് ആഗിരണം.

1. 3.അപേക്ഷകൾ

AOZ അവശിഷ്ടത്തിന്റെ അളവും ഗുണപരവുമായ വിശകലനത്തിൽ ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കാംഅനിമ ടിഷ്യുകൾ(പേശി, കരൾ മുതലായവ), തേൻ.

1. 4.ക്രോസ് പ്രതികരണങ്ങൾ

Furazolidone മെറ്റാബോലൈറ്റ് (AOZ)……………………..100%

ഫ്യൂറൽടഡോൺ മെറ്റാബോലൈറ്റ് (AMOZ)……………………<0.1%

നൈട്രോഫുറാന്റോയിൻ മെറ്റാബോലൈറ്റ് (AHD)……………………<0.1%

നൈട്രോഫുരാസോൺ മെറ്റാബോലൈറ്റ് (SEM)…………………………………………<0.1%

Furazolidone ……………………………………………… 16.3%

ഫുറൽടഡോൺ……………………………………………………<1%

നൈട്രോഫുറാന്റോയിൻ……………………………………………………<1%

നൈട്രോഫുരാസോൺ……………………………………………………<1%

1. 5.ആവശ്യമുള്ള വസ്തുക്കൾ

5.1ഉപകരണങ്ങൾ

----മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റ് സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (450nm/630nm)

----റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം അല്ലെങ്കിൽ നൈട്രജൻ ഉണക്കൽ ഉപകരണങ്ങൾ

----ഹോമോജെനൈസർ / വയറ്റിൽ

----ഷേക്കർ

---- വോർട്ടക്സ് മിക്സർ

----സെൻട്രിഫ്യൂജ്

----അനലിറ്റിക്കൽ ബാലൻസ് (ഇൻഡക്‌ടൻസ്: 0.01 ഗ്രാം)

---- ബിരുദം നേടിയ പൈപ്പറ്റ്: 10 മില്ലി

----റബ്ബർ പൈപ്പറ്റ് ബൾബ്

----വോള്യൂമെട്രിക് ഫ്ലാസ്ക്: 100ml

----ഗ്ലാസ് ഫ്ലാസ്ക്: 10 മില്ലി

----പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബ്: 2ml, 50ml

----മൈക്രോപിപെറ്റുകൾ: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-മൾട്ടിപിപ്പെറ്റ്

5.2റിയാഗന്റുകൾ

----എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ് (AR)

----n-ഹെക്സെയ്ൻ (അല്ലെങ്കിൽ n-ഹെപ്റ്റെയ്ൻ) (AR)

----ഡിപൊട്ടാസ്യം ഹൈഡ്രജൻ ഫോസ്ഫേറ്റ് ട്രൈഹൈഡ്രേറ്റ്

(K₂എച്ച്പിഒ₄.3H₂O) (AR)

----സാന്ദ്രീകൃത ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് (HCl, AR)

-----മെഥനോൾ

----സോഡിയം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് (NaOH, AR)

----അയണുകള് കളഞ്ഞ വെള്ളം

1. 6.കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ

l ആന്റിജൻ പൂശിയ മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റ്, 96 കിണറുകൾ

l സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൊല്യൂഷനുകൾ (6 കുപ്പികൾ, 1 മില്ലി / ബോട്ടിൽ)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l സ്പൈക്കിംഗ് സ്റ്റാൻഡേർഡ് കൺട്രോൾ : (1ml/കുപ്പി)........100ppb

l സാന്ദ്രീകൃത എൻസൈം സംയോജനം 1ml........ചുവന്ന തൊപ്പി

l എൻസൈം കൺജഗേറ്റ് ഡില്യൂവന്റ്‌സ് 10ml........ഗ്രീൻ ക്യാപ്

l സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് എ 7 മില്ലി …………………………………………………….. വെള്ള തൊപ്പി

l സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ബി 7 മില്ലി …………………………………………….. ചുവന്ന തൊപ്പി

l സ്റ്റോപ്പ് ലായനി 7ml……………………………… മഞ്ഞ തൊപ്പി

l 20 × സാന്ദ്രീകൃത വാഷ് ലായനി 40 മില്ലി

…………………………………………… സുതാര്യമായ തൊപ്പി

l 2×സാന്ദ്രീകൃത എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ ലായനി 60 മില്ലി....നീല തൊപ്പി

l 2-നൈട്രോബെൻസാൽഡിഹൈഡ് 15.1 മില്ലിഗ്രാം …………………….വെളുത്ത തൊപ്പി

1. 7.റിയാക്ടറുകൾ തയ്യാറാക്കൽ

പരിഹാരം 1: ഡെറിവേറ്റീവ് റിയാജന്റ്:

2-നൈട്രോബെൻസാൽഡിഹൈഡ് ഉള്ള കുപ്പിയിൽ 10 മില്ലി മെഥനോൾ ചേർത്ത് അലിയിക്കുക.(10mM സാന്ദ്രതയിൽ).

പരിഹാരം 2: 0.1MK₂എച്ച്പിഒ₄പരിഹാരം:

ഭാരം 22.8 ഗ്രാം കെ₂എച്ച്പിഒ₄.3H₂O മുതൽ 1L വരെ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളം.

പരിഹാരം 3: 1M HCl പരിഹാരം

8.3 മില്ലി സാന്ദ്രീകൃത ഹൈഡ്രോക്ലോറിക് ആസിഡ് അലിയിക്കുക 100 മില്ലി വരെ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളം.

പരിഹാരം 4:1M NaOH പരിഹാരം

4g NaOH 100ml deionized വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.

പരിഹാരം 5: വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പരിഹാരം:

1:1 എന്ന വോളിയം അനുപാതത്തിൽ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ 2×സാന്ദ്രീകൃത എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ലായനി നേർപ്പിക്കുക.ഈ ലായനി 4 ഡിഗ്രിയിൽ 1 മാസത്തേക്ക് സംരക്ഷിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് സാമ്പിളുകൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ഉപയോഗിക്കും.

പരിഹാരം 6: കഴുകാനുള്ള പരിഹാരം:

20× സാന്ദ്രതയുള്ള വാഷ് ലായനി 1:19 എന്ന അളവിൽ ഡീയോണൈസ്ഡ് വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക, ഇത് പ്ലേറ്റുകൾ കഴുകാൻ ഉപയോഗിക്കും.ഈ നേർപ്പിച്ച ലായനി 4 ഡിഗ്രിയിൽ 1 മാസത്തേക്ക് സൂക്ഷിക്കാം.

1. 8.മാതൃകാ തയ്യാറെടുപ്പുകൾ

8.1പ്രവർത്തനത്തിന് മുമ്പുള്ള അറിയിപ്പുകളും മുൻകരുതലുകളും:

a) പരീക്ഷണത്തിൽ ദയവായി ഒറ്റത്തവണ നുറുങ്ങുകൾ ഉപയോഗിക്കുക, വ്യത്യസ്‌ത റിയാജന്റ് ആഗിരണം ചെയ്യുമ്പോൾ നുറുങ്ങുകൾ മാറ്റുക.

b) എല്ലാ പരീക്ഷണ ഉപകരണങ്ങളും വൃത്തിയുള്ളതാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

c) ഡെറിവേറ്റീവ് റീജന്റ് മൂന്ന് മാസത്തേക്ക് 2-8 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കാം;

d) HCl ലായനി 3 മാസത്തേക്ക് ഊഷ്മാവിൽ സൂക്ഷിക്കാം;

ഇ) NaOH ലായനി ഊഷ്മാവിൽ 3 മാസത്തേക്ക് സംരക്ഷിക്കാം;

f) ചികിത്സിക്കാത്ത സാമ്പിളുകൾ ഫ്രീസറിൽ സൂക്ഷിക്കുക(-20℃);

g) ചികിത്സിച്ച സാമ്പിളുകൾ 24 മണിക്കൂർ 2-8 ഡിഗ്രിയിൽ ഇരുട്ടിൽ സൂക്ഷിക്കാം.

8.2 മൃഗകലകളുടെയും കരളിന്റെയും സാമ്പിളുകൾ:

---- ഹോമോജെനൈസർ ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകൾ ഏകീകരിക്കുക;

----50ml പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് ഹോമോജെനൈസ് ചെയ്ത ടിഷ്യു സാമ്പിളിന്റെ ഭാരം 1.0±0.05g.4ml deionized water, 0.5ml 1M HCl ലായനി, 100ul ഡെറിവേറ്റീവ് റീജന്റ് എന്നിവ ചേർക്കുക (പരിഹാരം 1 കാണുക).2മിനിറ്റ് കുലുക്കുക.

---- രാത്രിയിൽ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക (ഏകദേശം 16 മണിക്കൂർ);

---- 5ml 0.1MK ചേർക്കുക₂എച്ച്പിഒ₄ (പരിഹാരം2), 0.4ml 1M NaOH (പരിഹാരം4) കൂടാതെ 5 മില്ലി എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ്.30 സെക്കൻഡ് കഠിനമായി കുലുക്കുക;

---- ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) സെൻട്രിഫ്യൂജ് 10മിനിറ്റ്, കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

---- സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ഓർഗാനിക് ഘട്ടത്തിന്റെ 2.5 മില്ലി 10 മില്ലി ശുദ്ധമായ ഗ്ലാസ് ട്യൂബിലേക്ക് എടുക്കുക, 50-60 ℃ നൈട്രജൻ വാതകം അല്ലെങ്കിൽ റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം ഉപയോഗിച്ച് ഉണക്കുക;

---- ഉണങ്ങിയ അവശിഷ്ടം 1ml n-hexane (അല്ലെങ്കിൽ n- heptane) ഉപയോഗിച്ച് ലയിപ്പിക്കുക, 30s നേരത്തേക്ക് വോർടെക്സ്, 1ml എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ലായനി ചേർക്കുക (പരിഹാരം5), ചുഴി 1മിനിറ്റ്, പൂർണ്ണമായും ഇളക്കുക.

---- ഊഷ്മാവിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് (20-25^oസി) 5 മിനിറ്റ്, കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

---- സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ഓർഗാനിക് ഘട്ടം നീക്കം ചെയ്യുക;50μl സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ജലത്തിന്റെ ഘട്ടം വിശകലനത്തിനായി എടുക്കുക.

8.4 തേൻ

----50 മില്ലി പോളിസ്റ്റൈറൈൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിലേക്ക് 1.0± 0.05 ഗ്രാം ഹോമോജെനൈസ്ഡ് തേൻ സാമ്പിൾ എടുക്കുക;

----4ml deionized വെള്ളം ചേർക്കുക, 0.5ml 1M HCl (പരിഹാരം3) കൂടാതെ 100μl ഡെറിവേറ്റീവ് റീജന്റ് (പരിഹാരം1);2 മിനിറ്റ് പൂർണ്ണമായും കുലുക്കുക;

---- രാത്രിയിൽ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക (ഏകദേശം 16 മണിക്കൂർ);

----5ml 0.1MK ചേർക്കുക₂എച്ച്പിഒ₄ (പരിഹാരം2), 0.4ml 1M NaOH (പരിഹാരം4) കൂടാതെ 5ml എഥൈൽ അസറ്റേറ്റ്, 30 സെക്കന്റ് വരെ ഉഗ്രമായി കുലുക്കുക;

----റൂം ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) 10മിനിറ്റ്, കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

---- 2.5 മില്ലി സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ഓർഗാനിക് ഘട്ടം 10 മില്ലി വൃത്തിയുള്ള ഗ്ലാസ് ട്യൂബിലേക്ക് എടുക്കുക, 50-60 ℃ നൈട്രജൻ ഗ്യാസ് അല്ലെങ്കിൽ റോട്ടറി ബാഷ്പീകരണം ഉപയോഗിച്ച് ഉണക്കുക;

---- ഉണങ്ങിയ അവശിഷ്ടം 1ml n-hexane (അല്ലെങ്കിൽ n- heptane) ഉപയോഗിച്ച് ലയിപ്പിക്കുക, 30 സെക്കൻഡിനുള്ള ചുഴലിക്കാറ്റ്, 1ml എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ലായനി ചേർക്കുക (പരിഹാരം5), ചുഴി 1മിനിറ്റ്, പൂർണ്ണമായും ഇളക്കുക.

----ഊഷ്മാവിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് (20-25^oസി) 10 മിനിറ്റ്, കുറഞ്ഞത് 3000 ഗ്രാം;

---- സൂപ്പർനറ്റന്റ് ഓർഗാനിക് ഘട്ടം നീക്കം ചെയ്യുക;50μl സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ജലത്തിന്റെ ഘട്ടം വിശകലനത്തിനായി എടുക്കുക.

1. 9.വിലയിരുത്തൽ പ്രക്രിയ

9.1വിലയിരുത്തുന്നതിന് മുമ്പ് ശ്രദ്ധിക്കുക

9.1.1 എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും മൈക്രോവെല്ലുകളും എല്ലാം ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

9.1.2 ഉപയോഗത്തിന് ശേഷം ബാക്കിയുള്ള എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും 2-8℃ ലേക്ക് തിരികെ നൽകുക.

9.1.3 മൈക്രോവെല്ലുകൾ ശരിയായി കഴുകുന്നത് പരിശോധനാ പ്രക്രിയയിലെ ഒരു പ്രധാന ഘട്ടമാണ്;ELISA വിശകലനത്തിന്റെ പുനരുൽപാദനക്ഷമതയുടെ സുപ്രധാന ഘടകമാണിത്.

9.1.4 ഇൻകുബേഷൻ സമയത്ത് വെളിച്ചം ഒഴിവാക്കുകയും മൈക്രോവെല്ലുകളെ മൂടുകയും ചെയ്യുക.

9.2 വിലയിരുത്തൽ ഘട്ടങ്ങൾ

9.2.1 30 മിനിറ്റിൽ കൂടുതൽ ഊഷ്മാവിൽ (20-25℃) എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും എടുക്കുക, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഏകതാനമാക്കുക.

9.2.2 ആവശ്യമായ മൈക്രോവെല്ലുകൾ പുറത്തെടുക്കുക, ബാക്കിയുള്ളവ 2-8℃-ൽ ഉടൻ സിപ്പ്-ലോക്ക് ബാഗിലേക്ക് തിരികെ നൽകുക.

9.2.3 സാന്ദ്രീകൃത വാഷ് ലായനിയും സാന്ദ്രീകൃത എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ ലായനിയും ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഊഷ്മാവിൽ വീണ്ടും ചൂടാക്കണം.

9.2.4നമ്പർ:എല്ലാ മൈക്രോവെൽ സ്ഥാനങ്ങളും അക്കമിട്ടു, എല്ലാ മാനദണ്ഡങ്ങളും സാമ്പിളുകളും ഡ്യൂപ്ലിക്കേറ്റിൽ പ്രവർത്തിപ്പിക്കണം.മാനദണ്ഡങ്ങളും സാമ്പിളുകളുടെ സ്ഥാനങ്ങളും രേഖപ്പെടുത്തുക.

9.2.5സാന്ദ്രീകൃത ആന്റിബോഡി ലായനി നേർപ്പിക്കുക: 1:10 (1 മടങ്ങ് സാന്ദ്രീകൃത എൻസൈം പരിഹാരം: 10 മടങ്ങ് എൻസൈം സംയോജിത ഡില്യൂവന്റ്സ്) വോളിയം അനുപാതത്തിൽ എൻസൈം സംയോജിത ഡൈല്യൂയന്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് സാന്ദ്രീകൃത എൻസൈം ലായനി നേർപ്പിക്കുക.

9.2.6സാധാരണ പരിഹാരം / സാമ്പിൾ, എൻസൈം സംയോജിത പരിഹാരം എന്നിവ ചേർക്കുക: 50µl സാധാരണ ലായനി അല്ലെങ്കിൽ തയ്യാറാക്കിയ സാമ്പിൾ അനുബന്ധ കിണറുകളിലേക്ക് ചേർക്കുക, 50µl എൻസൈം സംയോജിത പരിഹാരം ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി, 25 ഡിഗ്രിയിൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.

9.2.7കഴുകുക: കവർ സൌമ്യമായി നീക്കം ചെയ്ത് കിണറുകളിൽ നിന്ന് ദ്രാവകം ഒഴിക്കുക, 250µl നേർപ്പിച്ച വാഷ് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് മൈക്രോവെല്ലുകൾ കഴുകുക (പരിഹാരം6) 10 സെക്കന്റ് ഇടവേളയിൽ 4-5 തവണ.ആഗിരണം ചെയ്യാവുന്ന പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് ശേഷിക്കുന്ന വെള്ളം ആഗിരണം ചെയ്യുക (ബാക്കിയുള്ള എയർ ബബിൾ ഉപയോഗിക്കാത്ത ടിപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് ഇല്ലാതാക്കാം).

9.2.8കളറിംഗ്: ഓരോ കിണറിലും 50µl സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി A, 50ul സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി B എന്നിവ ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി 15 മിനിറ്റ് 25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക (12.8 കാണുക).

9.2.11അളക്കുക: ഓരോ കിണറിലും 50µl സ്റ്റോപ്പ് ലായനി ചേർക്കുക.പ്ലേറ്റ് സ്വമേധയാ കുലുക്കി 450nm-ൽ ആഗിരണം ചെയ്യുന്നതിലൂടെ മൃദുവായി ഇളക്കുക (ഇത് 450/630nm എന്ന ഇരട്ട തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ അളക്കാൻ നിർദ്ദേശിച്ചു. സ്റ്റോപ്പ് ലായനി ചേർത്തതിന് ശേഷം 5 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ഫലം വായിക്കുക. )

10 ഫലം

10.1ശതമാനം ആഗിരണം

സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾക്കും സാമ്പിളുകൾക്കുമായി ലഭിച്ച ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെ ശരാശരി മൂല്യങ്ങൾ ആദ്യ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ (സീറോ സ്റ്റാൻഡേർഡ്) ആഗിരണം മൂല്യം കൊണ്ട് ഹരിക്കുകയും 100% കൊണ്ട് ഗുണിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.പൂജ്യം സ്റ്റാൻഡേർഡ് അങ്ങനെ 100% ന് തുല്യമാക്കുകയും ആഗിരണം മൂല്യങ്ങൾ ശതമാനത്തിൽ ഉദ്ധരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

=

B ——ആഗിരണ നിലവാരം (അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ)

B0 ——ആഗിരണ പൂജ്യം നിലവാരം

10.2സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ്

----ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് വരയ്ക്കുന്നതിന്: സ്റ്റാൻഡേർഡുകളുടെ ആഗിരണം മൂല്യം y-ആക്സിസ് ആയി എടുക്കുക, AOZ സ്റ്റാൻഡേർഡ് സൊല്യൂഷന്റെ (ppb) സാന്ദ്രതയുടെ സെമി ലോഗരിതം x-ആക്സിസായി എടുക്കുക.

----കാലിബ്രേഷൻ വക്രത്തിൽ നിന്ന് വായിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും (പിപിബി) AOZ കോൺസൺട്രേഷൻ, പിന്തുടരുന്ന ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും അനുബന്ധ നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം കൊണ്ട് ഗുണിച്ചാൽ, സാമ്പിളിന്റെ യഥാർത്ഥ സാന്ദ്രത ലഭിക്കുന്നു.

ദയവായി ശ്രദ്ധിക്കുക:

എല്ലാ ഡാറ്റയും കുറയ്ക്കുന്നതിന് പ്രത്യേക സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്, അത് അഭ്യർത്ഥന പ്രകാരം നൽകാം.

നേർപ്പിക്കൽ ഘടകം…………………………………………………… 2

10.സംവേദനക്ഷമത, കൃത്യത, കൃത്യത

സംവേദനക്ഷമത: 0.025ppb

കണ്ടെത്തൽ പരിധി:

ടിഷ്യു (പേശി, കരൾ)……………………………… 0.1ppb

തേന്------------------------------------------------- -0.1ppb

കൃത്യത:

മൃഗങ്ങളുടെ ടിഷ്യു (പേശിയും കരളും)………………………………100 ± 20%

തേൻ…………………………………………………… 100 ± 20%

കൃത്യത:ELISA കിറ്റിന്റെ CV 10% ൽ താഴെയാണ്.

11.ശ്രദ്ധിക്കുക

12.1 റിയാക്ടറുകളും സാമ്പിളുകളും റൂം ടെമ്പറേച്ചറിലേക്ക് (20-25℃) നിയന്ത്രിച്ചിട്ടില്ലെങ്കിൽ, സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾക്കും സാമ്പിളുകൾക്കും ലഭിച്ച ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെ ശരാശരി മൂല്യങ്ങൾ കുറയും.

.

12.3 ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഓരോ റീജന്റും സൌമ്യമായി കുലുക്കുക.

12.4 നിങ്ങളുടെ ചർമ്മത്തെ സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷനിൽ നിന്ന് അകറ്റി നിർത്തുക, കാരണം ഇത് 0.5MH ആണ്₂SO₄പരിഹാരം.

12.5 കാലഹരണപ്പെട്ട കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കരുത്.വ്യത്യസ്ത ബാച്ചുകളുടെ റിയാക്ടറുകൾ കൈമാറ്റം ചെയ്യരുത്, അല്ലെങ്കിൽ അത് സംവേദനക്ഷമത കുറയ്ക്കും.

12.6 സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ: ELISA കിറ്റുകൾ 2-8℃-ൽ സൂക്ഷിക്കുക, ഫ്രീസ് ചെയ്യരുത്.റെസ്റ്റ് മൈക്രോവെൽ പ്ലേറ്റുകൾ അടയ്ക്കുക, എല്ലാ ഇൻകുബേഷൻ സമയത്തും നേരായ സൂര്യപ്രകാശം ഒഴിവാക്കുക.മൈക്രോടൈറ്റർ പ്ലേറ്റുകൾ മൂടുന്നത് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

12.7 സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി നിറമാകുകയാണെങ്കിൽ ഉപേക്ഷിക്കണം.സീറോ സ്റ്റാൻഡേർഡിന്റെ ആഗിരണം മൂല്യം (450/630nm) 0.5-ൽ (A450nm<0.5) കുറവാണെങ്കിൽ റിയാഗന്റുകൾ വഷളായേക്കാം.

12.8 സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് ലായനി ചേർത്തതിന് ശേഷം കളറേഷൻ പ്രതികരണത്തിന് 15 മിനിറ്റ് ആവശ്യമാണ്;നിറം നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയാത്തത്ര നേരിയതാണെങ്കിൽ നിങ്ങൾക്ക് ഇൻകുബേഷൻ സമയം 20 മിനിറ്റോ അതിൽ കൂടുതലോ നീട്ടാം., 25 മിനിറ്റിൽ കൂടരുത്. നേരെമറിച്ച്, ഇൻകുബേഷൻ സമയം ശരിയായി ചുരുക്കുക.

12.9 ഒപ്റ്റിമൽ പ്രതികരണ താപനില 25 ° ആണ്.ഉയർന്നതോ താഴ്ന്നതോ ആയ താപനില സംവേദനക്ഷമതയുടെയും ആഗിരണം മൂല്യങ്ങളുടെയും മാറ്റങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കും.

12.സംഭരണ ​​അവസ്ഥയും സംഭരണ ​​കാലയളവും

സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥ: 2-8℃.

സംഭരണ ​​കാലയളവ്: 12 മാസം.