ଉତ୍ପାଦ

1. ୧।ପୃଷ୍ଠଭୂମି

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ସ ହେଉଛି ସିନ୍ଥେଟିକ୍ ବ୍ରଡ-ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍, ଯାହା ଏହାର ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଲ୍ ଏବଂ ଫାର୍ମାକୋକିନେଟିକ୍ ଗୁଣ ପାଇଁ ପଶୁ ଉତ୍ପାଦନରେ ବାରମ୍ବାର ନିୟୋଜିତ ହୋଇଥାଏ |ଘୁଷୁରି, କୁକୁଡ଼ା ଏବଂ ଜଳ ଉତ୍ପାଦନରେ ସେଗୁଡିକ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପ୍ରୋତ୍ସାହକ ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ଲ୍ୟାବ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କ ସହିତ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ଅଧ୍ୟୟନରେ ସୂଚାଇ ଦିଆଗଲା ଯେ ପିତାମାତା drugs ଷଧ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ କର୍କିନୋଜେନିକ୍ ଏବଂ ମ୍ୟୁଟେଜେନିକ୍ ଗୁଣ ଦେଖାଇଥାଏ |ଖାଦ୍ୟ ଉତ୍ପାଦନରେ ବ୍ୟବହୃତ ପଶୁମାନଙ୍କର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏହା ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ସକୁ ନିଷେଧ କରିଛି |1993 ରେ ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ drugs ଷଧ ଫୁରାଲଟାଡୋନ୍, ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଣ୍ଟୋଏନ୍ ଏବଂ ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଜୋନ୍ ଖାଦ୍ୟ ପଶୁ ଉତ୍ପାଦନରେ ବ୍ୟବହାର ଉପରେ ବାରଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 1995 ରେ ଫୁରାଜୋଲିଡୋନ୍ ବ୍ୟବହାର ନିଷେଧ କରାଯାଇଥିଲା।

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ drugs ଷଧର ଅବଶିଷ୍ଟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ ପ୍ୟାରେଣ୍ଟ୍ drugs ଷଧର ଟିସୁ ବନ୍ଧା ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଚିହ୍ନଟ ଉପରେ ଆଧାରିତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |ଯେହେତୁ ପ୍ୟାରେଣ୍ଟ୍ drugs ଷଧଗୁଡିକ ଅତି ଶୀଘ୍ର ମେଟାବୋଲିଜଡ୍ ହୋଇଥାନ୍ତି, ଏବଂ ଟିସୁ ବନ୍ଧା ହୋଇଥିବା ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଗୁଡିକ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ରହିବେ, ଏହି ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଗୁଡିକ ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାନ୍ସର ଅପବ୍ୟବହାର ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଯେଉଁଥିରେ ଫୁରାଜୋଲିଡୋନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AOZ), ଫୁରାଲଟାଡୋନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AMOZ) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ | ), ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଣ୍ଟୋଏନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AHD) ଏବଂ ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଜୋନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (SEM) |

AOZ- ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ LC LC-MS କିମ୍ବା LC-MS / MS ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ |କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତିରୋପଣ, ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ଚିହ୍ନଟ ସୀମା, ବ technical ଷୟିକ ଉପକରଣ ଏବଂ ସମୟ ଆବଶ୍ୟକତା ସମ୍ବନ୍ଧରେ ଯଥେଷ୍ଟ ସୁବିଧା ଦେଖାଏ |(ସମୟ ମୂଲ୍ୟ: 45 ମିନିଟ୍)

1. ୨।ପରୀକ୍ଷା ନୀତି

ଏହି ELISA କିଟ୍ ପରୋକ୍ଷ-ପ୍ରତିଯୋଗୀ ଏନଜାଇମ୍ ଇମ୍ୟୁନୋଏସ୍ଏର ନୀତି ଉପରେ ଆଧାର କରି AOZ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି |ମାଇକ୍ରୋଟିଟର କୂଅଗୁଡିକ BSA- ସଂଯୁକ୍ତ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ କ୍ୟାପଚର ସହିତ ଆବୃତ |ନମୁନାରେ AOZ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିବା ଆଣ୍ଟିବଡି ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଟାଇଟର ପ୍ଲେଟରେ ଆବୃତ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ସହିତ ପ୍ରତିଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱିତା କରେ |ଏନଜାଇମ୍ କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ଯୋଡିବା ପରେ କ୍ରୋମୋଜେନିକ୍ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଏବଂ ଏକ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର ଦ୍ୱାରା ସିଗନାଲ୍ ମାପ କରାଯାଏ |ଅବଶୋଷଣ ନମୁନାରେ AOZ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ବିପରୀତ ଅନୁପଯୁକ୍ତ |

1. 3ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ

ଏହି କିଟ୍ AOZ ଅବଶିଷ୍ଟ ପରିମାଣର ଏବଂ ଗୁଣାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |ଆନିମା ଟିସୁ |(ମାଂସପେଶୀ, ଯକୃତ ଇତ୍ୟାଦି), ମହୁ

1. 4କ୍ରସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା |

ଫୁରାଜୋଲିଡୋନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AOZ) …………………… ..100%

ଫୁରାଲଟାଡୋନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AMOZ) …………………… <0.1%

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଣ୍ଟୋଏନ୍ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (AHD) …………………… <0.1%

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଜୋନ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ (SEM) ………………… ...… <0.1%

ଫୁରାଜୋଲିଡୋନ୍ ……………………………………।… ..… 16.3%

ଫୁରାଲଟାଡୋନ୍ ……………………………………………।… <1%

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଣ୍ଟୋଏନ୍ ……………………………………। ……।… <1%

ନାଇଟ୍ରୋଫୁରାଜୋନ୍ …………………………………… ..… <1%

1. 5ସାମଗ୍ରୀ ଆବଶ୍ୟକ |

5.1ଉପକରଣ

---- ମାଇକ୍ରୋଟିଟର୍ ପ୍ଲେଟ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର (450nm / 630nm)

---- ରୋଟାରୀ ବାଷ୍ପୀକରଣକାରୀ କିମ୍ବା ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଶୁଖାଇବା ଉପକରଣ |

---- ହୋମୋଜେନାଇଜର / ଷ୍ଟୋମାଚର୍ |

---- ଶେକର୍ |

---- ଭର୍ଟେକ୍ସ ମିକ୍ସର୍ |

---- ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ |

---- ଆନାଲିଟିକାଲ୍ ସନ୍ତୁଳନ (ଇନ୍ଦୁକାନ୍ସ: 0.01g)

---- ସ୍ନାତକ ପାଇପେଟ୍: 10 ମି

---- ରବର ପାଇପେଟ୍ ବଲ୍ବ |

---- ଭଲ୍ୟୁମେଟ୍ରିକ୍ ଫ୍ଲାସ୍କ: 100 ମି

---- ଗ୍ଲାସ୍ ଫ୍ଲାସ୍କ: 10 ମି

---- ପଲିଷ୍ଟାଇରନ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍: 2ml, 50ml |

---- ମାଇକ୍ରୋପିପେଟ୍: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul- ମଲ୍ଟିପେଟ୍ |

5.2ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ |

---- ଇଥିଲ୍ ଆସେଟେଟ୍ (ଆର୍)

---- n-hexane (କିମ୍ବା n-heptane) (AR)

---- ଡିପୋଟାସିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ଫସଫେଟ୍ ଟ୍ରାଇହାଇଡ୍ରେଟ୍ |

(K₂HPO₄.3H₂ଓ) (ଆର୍)

---- ଏକାଗ୍ର ହାଇଡ୍ରୋକ୍ଲୋରିକ୍ ​​ଏସିଡ୍ (HCl, AR)

----- ମିଥାନୋଲ୍ |

---- ସୋଡିୟମ୍ ହାଇଡ୍ରକ୍ସାଇଡ୍ (NaOH, AR)

---- ଡିଓନାଇଜଡ୍ ଜଳ |

1. 6କିଟ୍ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |

l ମାଇକ୍ରୋଟିଟର୍ ପ୍ଲେଟ୍ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍, 96 କୂଅରେ ଆବୃତ |

l ମାନକ ସମାଧାନ (6 ବୋତଲ, 1ml / ବୋତଲ)

0ppb, 0.025ppb, 0.075ppb, 0.225ppb, 0.675ppb, 2.025ppb

l ସ୍ପାଇକ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍: (1ml / ବୋତଲ) ....…।100ppb

l ଏକାଗ୍ର ଏନଜାଇମ୍ କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ 1ml ...… .. ରେଡ୍ କ୍ୟାପ୍ |

l ଏନଜାଇମ୍ କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ diluents 10ml ……… .. ସବୁଜ କ୍ୟାପ୍ |

l ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ A 7ml ……… ..............… ....… ..… .. ଧଳା କ୍ୟାପ୍ |

l ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ B 7ml ……… ..............… ........…।… ..red cap

l ସମାଧାନ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ 7ml …………………………… ହଳଦିଆ କ୍ୟାପ୍ |

l 20 × ଏକାଗ୍ର ଧୋଇବା ସମାଧାନ 40ml |

……………………………………। …… ସ୍ୱଚ୍ଛ କ୍ୟାପ୍ |

l 2 × ଏକାଗ୍ର ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନ 60ml… .ବ୍ଲୁ କ୍ୟାପ୍ |

l 2-ନାଇଟ୍ରୋବେଞ୍ଜାଲଡେହାଇଡ୍ 15.1 ମିଗ୍ରା ……………… ଧଳା କ୍ୟାପ୍ |

1. 7Reagents ପ୍ରସ୍ତୁତି |

ସମାଧାନ 1: derivative reagent:

2-ନାଇଟ୍ରୋବେଞ୍ଜାଲଡେହାଇଡ୍ ଥିବା ବୋତଲରେ 10ml ମିଥାନୋଲ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଦ୍ରବଣ କରନ୍ତୁ |(୧୦୦ ମିଟର ଏକାଗ୍ରତାରେ) |

ସମାଧାନ 2: 0.1MK₂HPO₄ସମାଧାନ:

ଓଜନ 22.8g କେ₂HPO₄.3H₂O ରୁ 1L ଡିଓନାଇଜଡ୍ ଜଳ ତରଳିବା ପାଇଁ |

ସମାଧାନ 3: 1M HCl ସମାଧାନ |

8.3ml ଏକାଗ୍ର ହାଇଡ୍ରୋକ୍ଲୋରିକ୍ ​​ଏସିଡ୍ ବିସର୍ଜନ କରନ୍ତୁ | 100ml ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ deionized ଜଳ ସହିତ |

ସମାଧାନ 4:1M NaOH ସମାଧାନ |

4m NaOH କୁ 100ml deionized ପାଣି ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ |

ସମାଧାନ 5: ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନ:

ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଅନୁପାତରେ 1: 1 ରେ ଡିଓନାଇଜଡ୍ ଜଳ ସହିତ 2 × ଏକାଗ୍ର ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନକୁ ମିଶ୍ରିତ କରନ୍ତୁ |ଏହି ସମାଧାନ 1month ପାଇଁ 4 at ରେ ସଂରକ୍ଷିତ ହୋଇପାରିବ, ଯାହା ନମୁନା ବାହାର କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେବ |

ସମାଧାନ 6: ଧୋଇବା ସମାଧାନ:

20 × ଏକାଗ୍ର ଧୋଇବା ସମାଧାନକୁ 1:19 ର ଭଲ୍ୟୁମ ରେସନରେ ଡିଓନାଇଜଡ୍ ପାଣି ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ, ଯାହା ପ୍ଲେଟ ଧୋଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହେବ |ଏହି ମିଶ୍ରିତ ସମାଧାନ 1 ମାସରେ 4 at ରେ ସଂରକ୍ଷିତ ହୋଇପାରିବ |

1. 8ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି |

8.1କାର୍ଯ୍ୟ ପୂର୍ବରୁ ବିଜ୍ଞପ୍ତି ଏବଂ ସତର୍କତା:

କ) ଦୟାକରି ପରୀକ୍ଷଣରେ ଏକ-ଅଫ୍ ଟିପ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଅବଶୋଷଣ କରିବା ସମୟରେ ଟିପ୍ସ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ |

ଖ) ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଯନ୍ତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ପରିଷ୍କାର ଅଟେ |

ଗ) ଡେରିଭେଟିଭ୍ ରିଜେଣ୍ଟକୁ ତିନି ମାସ ପାଇଁ 2-8 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ;

ଘ) HCl ସମାଧାନକୁ 3 ମାସ ପାଇଁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ;

ଇ) NaOH ସମାଧାନକୁ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 3 ମାସ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ;

ଚ) ଚିକିତ୍ସିତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ଫ୍ରିଜରେ ରଖନ୍ତୁ (-20 ℃);

ଛ) ଚିକିତ୍ସିତ ନମୁନାଗୁଡିକ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ଧାରରେ 2-8 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ |

8.2 ପଶୁ ଟିସୁ ଏବଂ ଯକୃତ ନମୁନା:

---- ହୋମୋଜେନାଇଜର ସହିତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ;

---- ହୋମୋଜେନାଇଜଡ୍ ଟିସୁ ନମୁନାର ଓଜନ 1.0 ± 0.05g 50ml ପଲିଷ୍ଟାଇରନ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ |4ml deionized water, 0.5ml 1M HCl ସମାଧାନ ଏବଂ 100ul derivative reagent ମିଶାନ୍ତୁ (ସମାଧାନ 1 ଦେଖନ୍ତୁ) |ଏହାକୁ 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ହଲାନ୍ତୁ |

---- ରାତାରାତି 37 at ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ (ପ୍ରାୟ 16 ଘଣ୍ଟା);

---- 5ml 0.1MK ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |₂HPO₄ (ସମାଧାନ2), 0.4ml 1M NaOH (ସମାଧାନ4) ଏବଂ 5ml ଇଥିଲ୍ ଆସେଟେଟ୍ |S ୦ ଦଶକ ପାଇଁ ଜୋରରେ ହଲାନ୍ତୁ;

---- ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ (20-25 ℃) 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ, ଅତି କମରେ 3000g;

---- ଅଲ ern କିକ ଜ organic ବ ପର୍ଯ୍ୟାୟର 2.5ml କୁ 10ml ପରିଷ୍କାର ଗ୍ଲାସ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ନିଅ, 50-60 ℃ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଗ୍ୟାସ୍ କିମ୍ବା ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ବାଷ୍ପୀକରଣ ସହିତ ଶୁଖ;

---- ଶୁଖିଲା ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ 1ml n-hexane (କିମ୍ବା n- heptane), 30s ପାଇଁ ଭର୍ଟେକ୍ସ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ, 1ml ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ (ସମାଧାନ5), ଭର୍ଟେକ୍ସ 1 ମିନିଟ୍, ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |

---- କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ (20-25) |^oଗ) 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ, ଅତି କମରେ 3000g;

---- ଅଲ ern କିକ ଜ organic ବ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଅପସାରଣ କରନ୍ତୁ;ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଜଳ ପର୍ଯ୍ୟାୟର 50μl ନିଅ |

8.4 ମହୁ

---- ହୋମୋଜେନାଇଜଡ୍ ମହୁ ନମୁନାର 1.0 ± 0.05g ଓଜନ 50ml ପଲିଷ୍ଟାଇରନ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ଓଜନ କରନ୍ତୁ;

---- 4ml deionized ପାଣି, 0.5ml 1M HCl ମିଶାନ୍ତୁ (ସମାଧାନ3) ଏବଂ 100μl derivative reagent (ସମାଧାନ1);2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ହଲାନ୍ତୁ;

---- ରାତାରାତି 37 at ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ (ପ୍ରାୟ 16 ଘଣ୍ଟା);

---- 5ml 0.1MK ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |₂HPO₄ (ସମାଧାନ2), 0.4ml 1M NaOH (ସମାଧାନ4) ଏବଂ 5ml ଇଥାଇଲ୍ ଆସେଟେଟ୍, 30 ଦଶକ ପାଇଁ ଜୋରରେ ହଲାନ୍ତୁ;

---- ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ (20-25 ℃) 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ, ଅତି କମରେ 3000g;

---- ଅଲ ern କିକ ଜ organic ବ ପର୍ଯ୍ୟାୟର 2.5ml କୁ 10ml ପରିଷ୍କାର ଗ୍ଲାସ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ନିଅ, 50-60 ℃ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଗ୍ୟାସ୍ କିମ୍ବା ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ବାଷ୍ପୀକରଣ ସହିତ ଶୁଖ;

---- ଶୁଖିଲା ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ 1ml n-hexane (କିମ୍ବା n- heptane), 30s ପାଇଁ ଭର୍ଟେକ୍ସ ସହିତ ମିଶାନ୍ତୁ, 1ml ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ (ସମାଧାନ5), ଭର୍ଟେକ୍ସ 1 ମିନିଟ୍, ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |

---- କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ (20-25) |^oଗ) 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ, ଅତି କମରେ 3000g;

---- ଅଲ ern କିକ ଜ organic ବ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଅପସାରଣ କରନ୍ତୁ;ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଜଳ ପର୍ଯ୍ୟାୟର 50μl ନିଅ |

1. 9ଅନୁଧ୍ୟାନ ପ୍ରକ୍ରିୟା |

9.1ଅନୁଧ୍ୟାନ ପୂର୍ବରୁ ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |

9.1.1 ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋୱେଲ୍ ସବୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଅଛି (20-25 ℃) |

9.1.2 ସମସ୍ତ ଅବଶିଷ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର ପରେ ତୁରନ୍ତ 2-8 to କୁ ଫେରନ୍ତୁ |

9.1.3 ମାଇକ୍ରୋୱେଲଗୁଡିକ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଧୋଇବା ଅନୁଧ୍ୟାନ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପଦକ୍ଷେପ;ଏହା ELISA ବିଶ୍ଳେଷଣର ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ |

9.1.4 ଆଲୋକରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ ଏବଂ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟରେ ମାଇକ୍ରୋୱେଲଗୁଡିକୁ ଘୋଡାନ୍ତୁ |

9.2 ଅନୁଧ୍ୟାନ ପଦକ୍ଷେପ |

9.2.1 ସମସ୍ତ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକୁ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ (20-25 ℃) 30 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ସମୟ ପାଇଁ ବାହାର କରନ୍ତୁ, ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ |

9.2.2 ଆବଶ୍ୟକ ମାଇକ୍ରୋୱେଲଗୁଡିକ ବାହାର କର ଏବଂ ବାକିଗୁଡ଼ିକୁ ତୁରନ୍ତ 2-8 at ରେ ଜିପ୍-ଲକ୍ ବ୍ୟାଗକୁ ଫେରାଇ ଦିଅ |

9.2.3 ଏକାଗ୍ର ଧୋଇବା ସମାଧାନ ଏବଂ ଏକାଗ୍ର ନିଷ୍କାସନ ସମାଧାନ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ରହିବା ପାଇଁ ପୁନ arm ନିର୍ମାଣ କରାଯିବା ଉଚିତ |

9.2.4ସଂଖ୍ୟା:ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଇକ୍ରୋୱେଲ୍ ସ୍ଥିତିକୁ ନମ୍ବର କରାଯାଇଛି ଏବଂ ସମସ୍ତ ମାନକ ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡିକ ନକଲରେ ଚାଲିବା ଉଚିତ |ମାନକ ଏବଂ ନମୁନା ସ୍ଥିତିକୁ ରେକର୍ଡ କରନ୍ତୁ |

9.2.5ଏକାଗ୍ର ଆଣ୍ଟିବଡି ସମାଧାନର ମିଶ୍ରଣ |: ଭଲ୍ୟୁମ ଅନୁପାତରେ 1:10 (1 ଗୁଣା ଏକାଗ୍ର ଏନଜାଇମ ସମାଧାନ: 10 ଗୁଣା ଏନଜାଇମ କଞ୍ଜୁଗେଟ ଡିଲୁଏଣ୍ଟ) ରେ ଏନଜାଇମ କଞ୍ଜୁଗେଟ ଡିଲୁଏଣ୍ଟ ସହିତ ଏକାଗ୍ର ଏନଜାଇମ ସମାଧାନକୁ ମିଶ୍ରିତ କରନ୍ତୁ |

9.2.6ମାନକ ସମାଧାନ / ନମୁନା ଏବଂ ଏନଜାଇମ୍ କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ସମାଧାନ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |: ସଂପୃକ୍ତ କୂଅରେ 50µl ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କିମ୍ବା ପ୍ରସ୍ତୁତ ନମୁନା ଯୋଡନ୍ତୁ, 50µl ଏନଜାଇମ୍ କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ହଲାଇ ହଲାଇ ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ cover ୦ ମିନିଟରେ 25 cover କଭର୍ ସହିତ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |

9.2.7ଧୋଇ ଦିଅ |: କଭରକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ କା ove ଼ି କୂଅରୁ ତରଳ pour ାଳନ୍ତୁ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋୱେଲଗୁଡିକୁ 250µl ମିଶ୍ରିତ ଧୋଇବା ଦ୍ରବଣରେ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ (ସମାଧାନ6) 4-5 ଥର 10s ବ୍ୟବଧାନରେ |ଅବଶୋଷିତ କାଗଜ ସହିତ ଅବଶିଷ୍ଟ ଜଳକୁ ଅବଶୋଷଣ କର (ଅବଶିଷ୍ଟ ବାୟୁ ବବୁଲକୁ ଅବ୍ୟବହୃତ ଟିପ୍ ସହିତ ଦୂର କରାଯାଇପାରିବ) |

9.2.8ରଙ୍ଗ: ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50µl ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ A ଏବଂ 50ul ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ B ମିଶାନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ହସ୍ତକୃତ ଭାବରେ ରୋକ୍ କରି ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ କଭର୍ ସହିତ 25 at ରେ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ (12.8 ଦେଖନ୍ତୁ) |

9.2.11ମାପ |: ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50µl ଷ୍ଟପ୍ ସମାଧାନ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ହସ୍ତକୃତ ଭାବରେ ରୋକ୍ କରି ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଅବଶୋଷଣକୁ 450nm ରେ ମାପନ୍ତୁ (ଏହା 450 / 630nm ର ଦ୍ୱ ual ତ ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟ ସହିତ ମାପ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦେଇଛି | ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଡିବା ପରେ 5 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଫଳାଫଳ ପ Read ନ୍ତୁ |)

10 ଫଳାଫଳ

10.1ଶତକଡା ଅବଶୋଷଣ |

ମାନକ ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡିକ ପାଇଁ ପ୍ରାପ୍ତ ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକର ହାରାହାରି ମୂଲ୍ୟଗୁଡିକ ପ୍ରଥମ ମାନକ (ଶୂନ ମାନକ) ର ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟ ଦ୍ୱାରା ବିଭକ୍ତ ଏବଂ 100% ଗୁଣିତ |ଶୂନ ମାନକ ଏହିପରି 100% ସହିତ ସମାନ ଏବଂ ଶୋଷିବା ମୂଲ୍ୟ ଶତକଡା ଉଦ୍ଧୃତ ହୋଇଛି |

=

B ——absorbance ମାନକ (କିମ୍ବା ନମୁନା)

B0 ——absorbance ଶୂନ ମାନକ |

10.2ମାନକ ବକ୍ର

---- ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ଆଙ୍କିବା ପାଇଁ: ମାନାଙ୍କ ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟକୁ y-axis, AOZ ମାନକ ସମାଧାନ (ppb) ର ଏକାଗ୍ରତାର ସେମି ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ଭାବରେ ଗ୍ରହଣ କର |

---- ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାର AOZ ଏକାଗ୍ରତା (ppb), ଯାହା କାଲିବ୍ରେସନ୍ ବକ୍ରରୁ ପ read ାଯାଇପାରିବ, ଅନୁସରଣ କରାଯାଉଥିବା ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାର ଅନୁରୂପ ମିଶ୍ରଣ କାରକ ଦ୍ୱାରା ବହୁଗୁଣିତ ହୁଏ, ଏବଂ ନମୁନାର ପ୍ରକୃତ ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ |

ଦୟାକରି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ:

ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟ ହ୍ରାସ ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ସଫ୍ଟୱେର୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଛି, ଯାହା ଅନୁରୋଧରେ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇପାରିବ |

ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର୍ |……………………………………… .. …… 2

୧୦।ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ସଠିକତା ଏବଂ ସଠିକତା |

ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା: 0.025ppb

ଚିହ୍ନଟ ସୀମା:

ଟିସୁ (ମାଂସପେଶୀ, ଯକୃତ) ………………………… 0.1ppb

ମହୁ ------------------------------------------------- -0.1ppb

ସଠିକତା:

ପଶୁ ଟିସୁ (ମାଂସପେଶୀ ଏବଂ ଯକୃତ) …… ... ………… 100 ± 20%

ମହୁ ……………………………… .. ………… .... 100 ± 20%

ସଠିକତା:ELISA କିଟ୍ ର CV 10% ରୁ କମ୍ ଅଟେ |

11ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |

12.1 ମାନକ ଏବଂ ନମୁନା ପାଇଁ ପ୍ରାପ୍ତ ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟର ହାରାହାରି ମୂଲ୍ୟ ହ୍ରାସ ହେବ ଯଦି ରେଜେଣ୍ଟ ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡିକ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇନଥାଏ (20-25 ℃) |

12.2 ଅସଫଳ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତିକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ପଦକ୍ଷେପଗୁଡିକ ମଧ୍ୟରେ ମାଇକ୍ରୋୱେଲଗୁଡ଼ିକୁ ଶୁଖିବାକୁ ଦିଅନ୍ତୁ ନାହିଁ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋୱେଲ୍ସ ଧାରକକୁ ଟ୍ୟାପ୍ କରିବା ପରେ ତୁରନ୍ତ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପଦକ୍ଷେପକୁ ଚଲାନ୍ତୁ |

12.3 ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ ହଲାନ୍ତୁ |

12.4 ଆପଣଙ୍କ ଚର୍ମକୁ ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଠାରୁ ଦୂରରେ ରଖନ୍ତୁ କାରଣ ଏହା ହେଉଛି 0.5MH |₂SO₄ସମାଧାନ

12.5 କିଟ୍ ଗୁଡିକ ପୁରୁଣା ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |ବିଭିନ୍ନ ବ୍ୟାଚ୍ ର ରେଜେଣ୍ଟ୍ ବଦଳାନ୍ତୁ ନାହିଁ, ନଚେତ୍ ଏହା ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ହ୍ରାସ କରିବ |

12.6 ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା: ELISA କିଟ୍କୁ 2-8 at ରେ ରଖନ୍ତୁ, ଫ୍ରିଜ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |ବିଶ୍ରାମ ମାଇକ୍ରୋୱେଲ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ, ସମସ୍ତ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟରେ ସିଧା ସୂର୍ଯ୍ୟ କିରଣରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |ମାଇକ୍ରୋଟାଇଟର ପ୍ଲେଟଗୁଡ଼ିକୁ ଆଚ୍ଛାଦନ କରିବା ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |

12.7 ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯଦି ରଙ୍ଗ ହୋଇଯାଏ ତେବେ ପରିତ୍ୟାଗ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଶୂନ୍ୟ ମାନାଙ୍କ ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟ (450 / 630nm) 0.5। 0.5 (A450nm <0.5) ରୁ କମ୍ ହେଲେ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ଖରାପ ହୋଇପାରେ |

12.8 ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଡିବା ପରେ ରଙ୍ଗର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା 15 ମିନିଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଯଦି ରଙ୍ଗ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଅତି ହାଲୁକା ହୁଏ, ତେବେ ଆପଣ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟକୁ 20 ମିନିଟ କିମ୍ବା ତା’ଠାରୁ ଅଧିକ ବ olong ାଇ ପାରିବେ।, 25 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ ହୁଅନ୍ତୁ ନାହିଁ।

12.9 ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା 25 is |ଉଚ୍ଚ କିମ୍ବା ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଆଣିବ |

12ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ଅବଧି |

ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା: 2-8 ℃।

ସଂରକ୍ଷଣ ଅବଧି: 12 ମାସ.