produk

Kit Immunoassay Énzim Kompetitif pikeun Analisis Kuantitatif métabolit Furazolidone (AOZ)

Katerangan pondok:

Kit ELISA ieu dirancang pikeun ngadeteksi AOZ dumasar kana prinsip immunoassay énzim kompetitif teu langsung.Sumur microtiter dilapis ku antigen anu aya hubunganana sareng BSA.AOZ dina sampel bersaing jeung antigén coated dina piring microtiter pikeun antibodi ditambahkeun.Saatos tambihan konjugat énzim, substrat kromogenik dianggo sareng sinyalna diukur ku spéktrofotométer.Nyerepna sabanding tibalik jeung konsentrasi AOZ dina sampel.


Rincian produk

Tag produk

Énzim kalapa Immunoassay Kit pikeun

Analisis Kuantitatif tinaMétabolit furazolidone(AOZ)

 

  1. 1.Latar

Nitrofurans mangrupikeun antibiotik spéktrum lega sintétik, anu sering dianggo dina produksi sato pikeun sipat antibakteri sareng farmakokinetik anu saé.Éta ogé kungsi dipaké salaku promoters tumuwuhna babi, jangjangan jeung produksi akuatik.Dina studi jangka panjang sareng sato lab nunjukkeun yén ubar indungna sareng métabolitna nunjukkeun ciri karsinogenik sareng mutagenik.Ieu nyababkeun larangan nitrofuran pikeun pengobatan sato anu dianggo pikeun produksi pangan.Ubar nitrofuran furaltadone, nitrofurantoin sareng nitrofurazone dilarang dianggo dina produksi sato pangan di EU dina taun 1993, sareng panggunaan furazolidone dilarang dina taun 1995.

Analisis résidu ubar nitrofuran kedah dumasar kana deteksi métabolit kabeungkeut jaringan tina obat induk nitrofuran.Kusabab ubar indungna gancang pisan métabolismena, sareng métabolit nitrofuran anu kabeungkeut ku jaringan bakal nahan kanggo waktos anu lami, métabolit ieu dianggo salaku udagan pikeun ngadeteksi panyalahgunaan nitrofuran, anu kalebet métabolit Furazolidone (AOZ), métabolit Furaltadone (AMOZ). ), Nitrofurantoin métabolit (AHD) jeung Nitrofurazone métabolit (SEM).

AOZ-résidu ditangtukeun paling umum ku LC-MS atanapi LC-MS / MS.Imunoassay énzim, dibandingkeun sareng metode kromatografi, nunjukkeun kaunggulan anu ageung ngeunaan sensitipitas, wates deteksi, alat téknis sareng syarat waktos.(Ongkos waktos: 45 mnt)

  1. 2.Prinsip Ujian

Kit ELISA ieu dirancang pikeun ngadeteksi AOZ dumasar kana prinsip immunoassay énzim kompetitif teu langsung.Sumur microtiter dilapis ku antigen anu aya hubunganana sareng BSA.AOZ dina sampel bersaing jeung antigén coated dina piring microtiter pikeun antibodi ditambahkeun.Saatos tambihan konjugat énzim, substrat kromogenik dianggo sareng sinyalna diukur ku spéktrofotométer.Nyerepna sabanding tibalik jeung konsentrasi AOZ dina sampel.

  1. 3.Aplikasi

Kit ieu tiasa dianggo dina analisis kuantitatif sareng kualitatif résidu AOZ dijaringan anima(otot, ati jsb), madu.

  1. 4.Réaksi silang

Métabolit furazolidone (AOZ) ……………………………….. 100%

Furaltadone métabolit (AMOZ)……………………<0.1%

Nitrofurantoin métabolit (AHD)……………………<0,1%

Métabolit Nitrofurazone (SEM)…………………………...<0,1%

Furazolidone ……………………………………………… 16,3%

Furaltadone……………………………………………………<1%

Nitrofurantoin………………………………………………..<1%

Nitrofurazon ……………………………………………..<1%

  1. 5.Bahan Diperlukeun

5.1Parabot

----Microtiter plat spéktrofotométer (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator atawa nitrogén drying instrumen

----Homogénizer / burih

---- Goyang

----Adun Vortex

----Sentrifugal

---- Kasaimbangan analitik (induktansi: 0.01g)

---- Pipet ukur : 10 ml

---- Bola pipet karét

----Labu volumetrik: 100ml

----Labu kaca: 10ml

----Polystyrene centrifuge tube: 2ml, 50ml

---- Mikropipet: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-multipipette

5.2réagen

----Étil asetat (AR)

----n-heksana (atau n-heptana) (AR)

----Dipotassium hidrogén fosfat trihidrat

(K2HPO4.3H2O) (AR)

----Asam hidroklorat pekat (HCl, AR)

-----Métanol

----Natrium hidroksida (NaOH, AR)

---- Cai deionized

  1. 6.Komponén Kit

l plat Microtiter coated kalawan antigen, 96 sumur

l Solusi standar (6 botol, 1ml / botol)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l Spiking kontrol standar: (1ml/botol)........100ppb

l Énzim kentel konjugasi 1ml ........ tutup beureum

l Énzim conjugate diluents 10ml………..topi héjo

l Substrat A 7ml………………………………………………………..cap bodas

l Substrat B 7ml………………………………………………………………………………

l Eureun solusi 7ml……………………………………………………………………

l 20 × leyuran nyeuseuh kentel 40ml

………………………………………………….. tutup transparan

l 2 × leyuran ékstraksi kentel 60ml….blue cap

l 2-Nitrobenzaldehida 15,1 mg………………

  1. 7.Persiapan réagen

Solusi 1: réagen turunan:

Tambahkeun 10ml métanol kana botol anu ngandung 2-Nitrobenzaldehyde sareng larut.(dina konsentrasi 10mM).

Solusi 2: 0,1MK2HPO4solusi:

Beuratna 22,8 g K2HPO4.3H2O mun 1L cai deionized ngaleyurkeun.

Solusi 3: 1 M larutan HCl

Ngaleyurkeun 8,3 ml asam hidroklorat kentel kalawan cai deionized ka 100ml.

Solusi 4:1 M larutan NaOH

Ngaleyurkeun 4g NaOH kalawan 100ml cai deionized.

Solusi 5: solusi ékstraksi:

Éncér 2 × solusi ékstraksi kentel jeung cai deionized dina nisbah volume 1:1.Leyuran ieu bisa conserved pikeun 1month di 4 ℃, nu bakal dipaké pikeun sasari sampel.

Solusi 6: solusi ngumbah:

Éncér 20 × solusi nyeuseuh kentel jeung cai deionized dina jatah volume 1:19, nu bakal dipaké pikeun ngumbah piring.Solusi éncér ieu tiasa disimpen salami 1 bulan dina suhu 4 ℃.

  1. 8.Persiapan Sampel

8.1Bewara sareng pancegahan sateuacan operasi:

a) Mangga pigunakeun tip hiji-off dina percobaan, sarta ngarobah tips nalika nyerep réagen béda.

b) Pastikeun yén sakabéh instrumén ékspérimén beresih.

c) réagen turunan bisa dilestarikan dina 2-8 ℃ salila tilu bulan;

d) Leyuran HCl bisa dilestarikan dina suhu kamar salila 3 bulan;

e) Leyuran NaOH bisa dilestarikan salila 3 bulan dina suhu kamar;

f) Simpen sampel untreated di freeze (-20 ℃);

g) Sampel anu dirawat tiasa disimpen salami 24 jam dina 2-8 ℃ dina gelap.

8.2 Sampel jaringan sareng ati sato:

---- Homogénisasi sampel kalawan homogenizer;

---- Beurat 1.0 ± 0.05g tina sampel jaringan homogenized kana 50ml polystyrene centrifuge tube.Tambahkeun 4ml cai deionized, 0,5ml 1M solusi HCl jeung 100ul réagen turunan (tingali solusi 1).Ngocok pikeun 2 mnt.

---- Inkubasi dina 37 ℃ sapeuting (kira-kira 16h);

---- Tambahkeun 5ml 0,1MK2HPO4 (solusi2), 0,4 ml 1M NaOH (solusi4) jeung 5ml étil asetat.Ngocok fiercely pikeun 30s;

---- Centrifuge dina suhu kamar (20-25 ℃) pikeun 10min, sahenteuna 3000g;

---- Candak 2.5ml fase organik supernatant kana tube kaca bersih 10ml, garing kalayan 50-60 ℃ gas nitrogén atawa evaporator Rotary;

---- Larutkan sisa kering dengan 1 ml n-heksana (atawa n-heptana), vortex selama 30 detik, tambahkan 1 ml larutan ekstraksi (solusi5), vortex 1min, campur lengkep.

---- Centrifuge dina suhu kamar (20-25oC) salila 5 menit, sahenteuna 3000g;

---- Leupaskeun fase organik supernatant;nyandak 50μl fase cai substrat pikeun assay.

 

8.4 Madu

---- beurat 1.0 ± 0.05g tina sampel madu homogenized kana 50ml polystyrene centrifuge tube;

----Tambahkeun 4ml cai deionisasi, 0,5ml 1M HCl (solusi3) jeung 100μl réagen turunan (solusi1);ngocok lengkep pikeun 2 mnt;

---- Incubate dina 37 ℃ sapeuting (kira-kira 16h);

----Tambahkeun 5ml 0,1MK2HPO4 (solusi2), 0,4 ml 1M NaOH (solusi4) jeung 5ml étil asétat, ngocok fiercely pikeun 30s;

---- Centrifuge dina suhu kamar (20-25 ℃) pikeun 10min, sahenteuna 3000g;

---- Candak 2.5ml fase organik supernatant kana tube kaca bersih 10ml, garing kalayan 50-60 ℃ gas nitrogén atawa evaporator Rotary;

---- Larutkan sisa kering dengan 1 ml n-heksana (atawa n-heptana), vortex selama 30 detik, tambahkan 1 ml larutan ekstraksi (solusi5), vortex 1min, campur lengkep.

---- Centrifuge dina suhu kamar (20-25oC) salila 10 menit, sahenteuna 3000g;

---- Leupaskeun fase organik supernatant;nyandak 50μl fase cai substrat pikeun assay.

  1. 9.Prosés assay

9.1Perhatikeun saméméh assay

9.1.1 Pastikeun sadaya réagen sareng microwells sadayana dina suhu kamar (20-25 ℃).

9.1.2 Balikkeun sadaya réagen sésana ka 2-8 ℃ langsung saatos dianggo.

9.1.3 Ngumbah microwells leres mangrupa hambalan penting dina prosés assay;éta faktor vital pikeun reproducibility tina analisis ELISA.

9.1.4 Hindarkeun cahaya sareng nutupan microwells salami inkubasi.

9.2 Léngkah Assay

9.2.1 Candak sadaya réagen kaluar dina suhu kamar (20-25 ℃) pikeun leuwih ti 30min, homogenize saméméh pamakéan.

9.2.2 Kéngingkeun microwells anu diperyogikeun teras balikkeun sésa-sésa kana kantong zip-lock dina suhu 2-8 ℃ langsung.

9.2.3 Solusi cuci kentel sareng solusi ékstraksi kentel kedah dipanaskeun deui dina suhu kamar sateuacan dianggo.

9.2.4Jumlah:Dinomerkeun unggal posisi microwell sareng sadaya standar sareng conto kedah dijalankeun dina duplikat.Rékam standar sareng posisi sampel.

9.2.5Éncér solusi antibodi kentel: éncér leyuran énzim pekat jeung éncér konjugasi énzim dina nisbah volume 1:10 (1 lipetan larutan énzim pekat: 10 lipet éncér conjugate diluent).

9.2.6Tambahkeun solusi standar / sampel jeung solusi conjugate énzim: tambahkeun 50µl larutan baku atawa sampel anu disusun ka sumur anu saluyu, tambahkeun 50µl larutan konjugat énzim.Campur gently ku oyag piring sacara manual tur incubate pikeun 30min dina 25 ℃ kalawan panutup.

9.2.7Nyeuseuh: Cabut panutupna sacara lembut sareng tuang cairan kaluar tina sumur sareng bilas microwells nganggo larutan cuci éncér 250µl (solusi6) dina interval 10s pikeun 4-5 kali.Nyerep cai sésa-sésa ku kertas nyerep (sésana gelembung hawa tiasa dileungitkeun ku tip anu henteu dianggo).

9.2.8Ngawarnaan: Tambahkeun 50µl larutan substrat A jeung 50ul larutan substrat B ka unggal sumur.Campur gently ku goyang piring ku cara manual tur incubate pikeun 15min dina 25 ℃ kalawan panutup (tingali 12.8).

9.2.11Ukur: Tambahkeun 50µl stop solution ka unggal sumur.Campur gently ku goyang piring ku cara manual tur ngukur absorbance dina 450nm (Ieu ngusulkeun ukuran jeung dual-panjang gelombang 450/630nm. Baca hasilna dina 5min sanggeus nambahkeun solusi eureun.)

10 Hasilna

10.1Persentase nyerep

Nilai rata-rata nilai absorbansi diala pikeun standar jeung sampel dibagi ku nilai absorbansi tina standar kahiji (standar enol) jeung dikali 100%.Standar enol dijieun sarua jeung 100% jeung nilai absorbance dicutat dina percentages.

=

B --standar nyerep (atawa sampel)

B0 --nyerep nol baku

10.2Kurva Standar

----Ngagambar kurva baku: Candak nilai absorbance tina standar salaku sumbu-y, semi logaritmik tina konsentrasi leyuran standar AOZ (ppb) salaku sumbu-x.

---- Konsentrasi AOZ unggal sampel (ppb), nu bisa dibaca tina kurva calibration, dikali faktor éncér pakait unggal sampel dituturkeun, sarta konsentrasi sabenerna sampel dicandak.

Punten perhatikeun:

Parangkat lunak khusus parantos dikembangkeun pikeun sadaya réduksi data, anu tiasa disayogikeun upami dipénta.

Faktor éncér…………………………………………………2

10.Sensitipitas, akurasi sareng presisi

Sensitipitas: 0.025ppb

wates deteksi:

Jaringan (otot, ati) ………………………… 0.1ppb

Madu ------------------------------------------------ -0,1 pb

Akurasi:

Jaringan sato (otot jeung ati) ………………………………100±20%

Madu…………………………………………………… 100±20%

Precision:CV kit ELISA kirang ti 10%.

11.Bewara

12.1 Nilai rata-rata tina nilai absorbansi anu dicandak pikeun standar sareng sampel bakal dikirangan upami réagen sareng conto henteu diatur kana suhu kamar (20-25 ℃).

12.2 Ulah ngantep microwells garing antara hambalan pikeun nyegah reproducibility gagal tur ngajalankeun lengkah saterusna langsung saatos ketok wadah microwells.

12.3 Ngocok unggal réagen gently saméméh pamakéan.

12.4 Jauhkeun kulit anjeun tina solusi eureun pikeun éta 0.5MH2SO4solusi.

12.5 Entong nganggo kit anu kadaluwarsa.Ulah tukeur réagen tina bets béda, atawa nu sejenna bakal leupaskeun sensitipitas.

12.6 Kaayaan Panyimpenan: Simpen kit ELISA dina suhu 2-8 ℃, ulah beku.Segel pelat microwell sésana, Hindarkeun sinar panonpoé langsung salila sakabéh inkubasi.Disarankeun nutupan piring microtiter.

12.7 Solusi substrat kudu ditinggalkeun lamun robah warna ka warna.Réagen bisa jadi ruksak lamun nilai absorbansi (450/630nm) tina standar enol kirang ti 0,5 (A450nm <0,5).

12.8 Réaksi pewarnaan peryogi 15 menit saatos nambihan solusi substrat;Anjeun tiasa manjangkeun waktu inkubasi ka 20min atawa leuwih lamun warna teuing lampu bisa ditangtukeun., pernah ngaleuwihan 25min.Sabalikna, shorten waktu inkubasi leres.

12.9 Suhu réaksi optimal nyaéta 25 ℃.Suhu anu langkung luhur atanapi langkung handap bakal nyababkeun parobahan sensitipitas sareng nilai nyerep.

12.Kaayaan neundeun sareng jaman panyimpen

Kaayaan gudang: 2-8 ℃.

Mangsa panyimpen: 12 bulan.

 

 


  • saméméhna:
  • Teras:

  • Tulis pesen anjeun di dieu sareng kirimkeun ka kami

    produk patali