ఫ్యూరజోలిడోన్ మెటాబోలైట్ (AOZ) యొక్క పరిమాణాత్మక విశ్లేషణ కోసం పోటీ ఎంజైమ్ ఇమ్యునోఅస్సే కిట్
- 1.నేపథ్య
నైట్రోఫ్యూరాన్లు సింథటిక్ బ్రాడ్-స్పెక్ట్రమ్ యాంటీబయాటిక్స్, ఇవి అద్భుతమైన యాంటీ బాక్టీరియల్ మరియు ఫార్మకోకైనటిక్ లక్షణాల కోసం జంతు ఉత్పత్తిలో తరచుగా ఉపయోగించబడతాయి.వారు పంది, పౌల్ట్రీ మరియు జల ఉత్పత్తిలో వృద్ధి ప్రమోటర్లుగా కూడా ఉపయోగించబడ్డారు.ప్రయోగశాల జంతువులతో దీర్ఘకాలిక అధ్యయనాలలో మాతృ మందులు మరియు వాటి జీవక్రియలు క్యాన్సర్ మరియు ఉత్పరివర్తన లక్షణాలను చూపించాయని సూచించాయి.ఇది ఆహార ఉత్పత్తికి ఉపయోగించే జంతువుల చికిత్స కోసం నైట్రోఫ్యూరాన్ల నిషేధానికి దారితీసింది.1993లో EUలో ఆహార జంతు ఉత్పత్తిలో ఉపయోగించకుండా నైట్రోఫ్యూరాన్ మందులు ఫ్యూరల్టాడోన్, నైట్రోఫురంటోయిన్ మరియు నైట్రోఫురాజోన్ నిషేధించబడ్డాయి మరియు 1995లో ఫ్యూరజోలిడోన్ వాడకం నిషేధించబడింది.
నైట్రోఫ్యూరాన్ ఔషధాల అవశేషాల విశ్లేషణ నైట్రోఫ్యూరాన్ మాతృ ఔషధాల యొక్క కణజాల బంధిత జీవక్రియలను గుర్తించడంపై ఆధారపడి ఉంటుంది.పేరెంట్ డ్రగ్స్ చాలా వేగంగా జీవక్రియ చేయబడి, కణజాలానికి కట్టుబడి ఉండే నైట్రోఫ్యూరాన్ మెటాబోలైట్లు చాలా కాలం పాటు నిలుపుకుంటాయి కాబట్టి, ఈ మెటాబోలైట్లు నైట్రోఫ్యూరాన్ల దుర్వినియోగాన్ని గుర్తించడంలో లక్ష్యంగా ఉపయోగించబడతాయి, వీటిలో ఫ్యూరాజోలిడోన్ మెటాబోలైట్ (AOZ), ఫురల్టాడోన్ మెటాబోలైట్ (AMOZ) ఉన్నాయి. ), Nitrofurantoin మెటాబోలైట్ (AHD) మరియు Nitrofurazone మెటాబోలైట్ (SEM).
AOZ- అవశేషాలు సాధారణంగా LC-MS లేదా LC-MS/MS ద్వారా నిర్ణయించబడతాయి.క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పద్ధతులతో పోలిస్తే ఎంజైమ్ ఇమ్యునోఅస్సేస్, సున్నితత్వం, గుర్తింపు పరిమితి, సాంకేతిక పరికరాలు మరియు సమయ అవసరానికి సంబంధించి గణనీయమైన ప్రయోజనాలను చూపుతాయి.(సమయం ఖర్చు: 45నిమి)
- 2.పరీక్ష సూత్రం
ఈ ELISA కిట్ పరోక్ష-పోటీ ఎంజైమ్ ఇమ్యునోఅస్సే సూత్రం ఆధారంగా AOZని గుర్తించడానికి రూపొందించబడింది.మైక్రోటైటర్ బావులు క్యాప్చర్ BSA-లింక్డ్ యాంటిజెన్తో పూత పూయబడి ఉంటాయి.జోడించిన యాంటీబాడీ కోసం మైక్రోటైటర్ ప్లేట్పై పూసిన యాంటిజెన్తో నమూనాలో AOZ పోటీపడుతుంది.ఎంజైమ్ కంజుగేట్ జోడించిన తర్వాత, క్రోమోజెనిక్ సబ్స్ట్రేట్ ఉపయోగించబడుతుంది మరియు సిగ్నల్ స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ ద్వారా కొలుస్తారు.శోషణ నమూనాలోని AOZ ఏకాగ్రతకు విలోమానుపాతంలో ఉంటుంది.
- 3.అప్లికేషన్లు
ఈ కిట్ను AOZ అవశేషాల పరిమాణాత్మక మరియు గుణాత్మక విశ్లేషణలో ఉపయోగించవచ్చుయానిమా కణజాలం(కండరాలు, కాలేయం మొదలైనవి), తేనె.
- 4.క్రాస్ రియాక్షన్స్
ఫ్యూరజోలిడోన్ మెటాబోలైట్ (AOZ)……………………..100%
ఫురల్టాడోన్ మెటాబోలైట్ (AMOZ)……………………<0.1%
నైట్రోఫురంటోయిన్ మెటాబోలైట్ (AHD)……………………<0.1%
నైట్రోఫురాజోన్ మెటాబోలైట్ (SEM)…………………………………<0.1%
ఫురాజోలిడోన్ ……………………………………………… 16.3%
ఫురల్టాడోన్……………………………………………………<1%
నైట్రోఫురంటోయిన్ ……………………………………………………<1%
నైట్రోఫురాజోన్……………………………………………………<1%
- 5.అవసరమైన పదార్థాలు
5.1పరికరాలు
----మైక్రోటైటర్ ప్లేట్ స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (450nm/630nm)
----రోటరీ ఆవిరిపోరేటర్ లేదా నైట్రోజన్ ఎండబెట్టే సాధనాలు
----హోమోజెనైజర్ / పొట్ట
----షేకర్
----వోర్టెక్స్ మిక్సర్
---- సెంట్రిఫ్యూజ్
----విశ్లేషణ సంతులనం (ఇండక్టెన్స్: 0.01గ్రా)
----గ్రాడ్యుయేట్ పైపెట్: 10ml
----రబ్బరు పైపెట్ బల్బ్
----వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్: 100ml
----గ్లాస్ ఫ్లాస్క్: 10మి.లీ
----పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్: 2ml, 50ml
----మైక్రోపిపెట్లు: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,
250ul-మల్టీపిపెట్
5.2కారకాలు
----ఇథైల్ అసిటేట్ (AR)
----n-హెక్సేన్ (లేదా n-హెప్టేన్) (AR)
----డిపోటాషియం హైడ్రోజన్ ఫాస్ఫేట్ ట్రైహైడ్రేట్
(K2HPO4.3H2O) (AR)
----సాంద్రీకృత హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం (HCl, AR)
-----మిథనాల్
----సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ (NaOH, AR)
---- డీయోనైజ్డ్ నీరు
- 6.కిట్ భాగాలు
l మైక్రోటైటర్ ప్లేట్ యాంటిజెన్తో పూత, 96 బావులు
l ప్రామాణిక పరిష్కారాలు (6 సీసాలు, 1ml/బాటిల్)
0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb
l స్పైకింగ్ ప్రామాణిక నియంత్రణ : (1ml/బాటిల్)........100ppb
l సాంద్రీకృత ఎంజైమ్ కంజుగేట్ 1ml........ఎరుపు టోపీ
l ఎంజైమ్ కంజుగేట్ డైలెంట్స్ 10ml........ గ్రీన్ క్యాప్
l సబ్స్ట్రేట్ A 7ml...................................... వైట్ క్యాప్
l సబ్స్ట్రేట్ B 7ml …………………………………………….. రెడ్ క్యాప్
l స్టాప్ సొల్యూషన్ 7ml ……………………………… పసుపు టోపీ
l 20× గాఢమైన వాష్ ద్రావణం 40ml
…………………………………………… పారదర్శక టోపీ
l 2×సాంద్రీకృత వెలికితీత పరిష్కారం 60ml....నీలం టోపీ
l 2-నైట్రోబెంజాల్డిహైడ్ 15.1mg…………………… వైట్ క్యాప్
- 7.కారకాల తయారీ
పరిష్కారం 1: ఉత్పన్న కారకం:
2-నైట్రోబెంజాల్డిహైడ్ ఉన్న సీసాలో 10ml మిథనాల్ వేసి కరిగించండి.(10mM గాఢత వద్ద).
పరిష్కారం 2: 0.1MK2HPO4పరిష్కారం:
బరువు 22.8g K2HPO4.3H2కరిగించడానికి O నుండి 1L డీయోనైజ్డ్ నీరు.
పరిష్కారం 3: 1M HCl పరిష్కారం
8.3ml సాంద్రీకృత హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లాన్ని కరిగించండి డీయోనైజ్డ్ నీటితో 100 మి.లీ.
పరిష్కారం 4:1M NaOH పరిష్కారం
100ml డీయోనైజ్డ్ నీటితో 4g NaOH కరిగించండి.
పరిష్కారం 5: వెలికితీత పరిష్కారం:
1:1 వాల్యూమ్ నిష్పత్తిలో డీయోనైజ్డ్ నీటితో 2×సాంద్రీకృత వెలికితీత ద్రావణాన్ని కరిగించండి.ఈ ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద 1 నెల వరకు భద్రపరచవచ్చు, ఇది నమూనాలను సేకరించేందుకు ఉపయోగించబడుతుంది.
పరిష్కారం 6: వాష్ సొల్యూషన్:
20× గాఢమైన వాష్ ద్రావణాన్ని 1:19 వాల్యూమ్ రేషన్లో డీయోనైజ్డ్ నీటితో కరిగించండి, ఇది ప్లేట్లను కడగడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.ఈ పలచబరిచిన ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద 1 నెల వరకు భద్రపరచవచ్చు.
- 8.నమూనా సన్నాహాలు
8.1ఆపరేషన్ ముందు నోటీసు మరియు జాగ్రత్తలు:
ఎ) దయచేసి ప్రయోగంలో ఒకదానికొకటి చిట్కాలను ఉపయోగించండి మరియు విభిన్న రియాజెంట్ను గ్రహించేటప్పుడు చిట్కాలను మార్చండి.
బి) అన్ని ప్రయోగాత్మక సాధనాలు శుభ్రంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.
c) ఉత్పన్న రియాజెంట్ను 2-8℃ వద్ద మూడు నెలలపాటు భద్రపరచవచ్చు;
d) HCl ద్రావణాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 3 నెలల పాటు భద్రపరచవచ్చు;
ఇ) NaOH ద్రావణాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 3 నెలల పాటు భద్రపరచవచ్చు;
f) చికిత్స చేయని నమూనాలను ఫ్రీజ్లో ఉంచండి(-20℃);
g) చికిత్స చేయబడిన నమూనాలను చీకటిలో 2-8℃ వద్ద 24h వరకు భద్రపరచవచ్చు.
8.2 జంతు కణజాలం మరియు కాలేయ నమూనాలు:
----హోమోజెనైజర్తో నమూనాలను సజాతీయపరచండి;
----50ml పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్లోకి సజాతీయ కణజాల నమూనా యొక్క బరువు 1.0±0.05g.4ml డీయోనైజ్డ్ వాటర్, 0.5ml 1M HCl ద్రావణం మరియు 100ul డెరివేటివ్ రియాజెంట్ జోడించండి (పరిష్కారం 1 చూడండి).2 నిమిషాలు షేక్ చేయండి.
---- రాత్రిపూట 37℃ వద్ద పొదిగే (సుమారు 16గం);
---- 5ml 0.1MK జోడించండి2HPO4 (పరిష్కారం2), 0.4ml 1M NaOH (పరిష్కారం4) మరియు 5ml ఇథైల్ అసిటేట్.30 సెకన్ల పాటు తీవ్రంగా షేక్ చేయండి;
---- గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) సెంట్రిఫ్యూజ్ 10నిమి, కనీసం 3000గ్రా;
---- 2.5ml సూపర్నాటెంట్ ఆర్గానిక్ ఫేజ్ని 10ml క్లీన్ గ్లాస్ ట్యూబ్లోకి తీసుకోండి, 50-60℃ నైట్రోజన్ గ్యాస్ లేదా రోటరీ ఆవిరిపోరేటర్తో ఆరబెట్టండి;
---- పొడి మిగులును 1ml n-హెక్సేన్ (లేదా n- హెప్టేన్)తో కరిగించండి, 30s వరకు వోర్టెక్స్, 1ml వెలికితీత ద్రావణాన్ని జోడించండి (పరిష్కారం5), సుడి 1నిమి, పూర్తిగా కలపండి.
---- గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ (20-25oసి) 5 నిమిషాలు, కనీసం 3000 గ్రా;
---- సూపర్నాటెంట్ ఆర్గానిక్ దశను తొలగించండి;పరీక్ష కోసం 50μl సబ్స్ట్రేట్ వాటర్ ఫేజ్ తీసుకోండి.
8.4 తేనె
----ఒక 50ml పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్లో 1.0±0.05g సజాతీయ తేనె నమూనాను బరువుగా ఉంచాలి;
----4ml డీయోనైజ్డ్ వాటర్ జోడించండి, 0.5ml 1M HCl (పరిష్కారం3) మరియు 100μl డెరివేటివ్ రియాజెంట్ (పరిష్కారం1);2 నిమిషాలు పూర్తిగా కదిలించు;
----రాత్రిపూట 37℃ వద్ద పొదిగే (సుమారు 16గం);
----5ml 0.1MK జోడించండి2HPO4 (పరిష్కారం2), 0.4ml 1M NaOH (పరిష్కారం4) మరియు 5ml ఇథైల్ అసిటేట్, 30 సెకన్ల పాటు తీవ్రంగా షేక్ చేయండి;
----గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) సెంట్రిఫ్యూజ్ 10నిమి, కనీసం 3000గ్రా;
---- 2.5ml సూపర్నాటెంట్ ఆర్గానిక్ ఫేజ్ని 10ml శుభ్రమైన గాజు గొట్టంలోకి తీసుకోండి, 50-60℃ నైట్రోజన్ గ్యాస్ లేదా రోటరీ ఆవిరిపోరేటర్తో ఆరబెట్టండి;
----1ml n-హెక్సేన్ (లేదా n- హెప్టేన్), 30s కోసం వోర్టెక్స్తో పొడిగా మిగిలిపోయిన వాటిని కరిగించి, 1ml వెలికితీత ద్రావణాన్ని జోడించండి (పరిష్కారం5), సుడి 1నిమి, పూర్తిగా కలపండి.
----గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ (20-25oసి) 10నిమి, కనీసం 3000గ్రా;
----అతీతమైన సేంద్రీయ దశను తొలగించండి;పరీక్ష కోసం 50μl సబ్స్ట్రేట్ వాటర్ ఫేజ్ తీసుకోండి.
- 9.పరీక్ష ప్రక్రియ
9.1పరీక్షకు ముందు గమనించండి
9.1.1 అన్ని కారకాలు మరియు మైక్రోవెల్లు అన్నీ గది ఉష్ణోగ్రత (20-25℃) వద్ద ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.
9.1.2 ఉపయోగించిన వెంటనే మిగిలిన అన్ని రియాజెంట్లను 2-8℃కి తిరిగి ఇవ్వండి.
9.1.3 మైక్రోవెల్లను సరిగ్గా కడగడం అనేది పరీక్ష ప్రక్రియలో ఒక ముఖ్యమైన దశ;ELISA విశ్లేషణ యొక్క పునరుత్పత్తికి ఇది కీలకమైన అంశం.
9.1.4 పొదిగే సమయంలో కాంతిని నివారించండి మరియు మైక్రోవెల్లను కవర్ చేయండి.
9.2 పరీక్ష దశలు
9.2.1 గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) 30 నిమిషాల కంటే ఎక్కువ సేపు అన్ని కారకాలను బయటకు తీయండి, ఉపయోగం ముందు సజాతీయంగా మార్చండి.
9.2.2 అవసరమైన మైక్రోవెల్లను పొందండి మరియు మిగిలిన వాటిని వెంటనే 2-8℃ వద్ద జిప్-లాక్ బ్యాగ్లోకి తిరిగి ఇవ్వండి.
9.2.3 సాంద్రీకృత వాష్ ద్రావణం మరియు సాంద్రీకృత వెలికితీత ద్రావణాన్ని ఉపయోగించే ముందు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉండేలా తిరిగి వేడి చేయాలి.
9.2.4సంఖ్య:ప్రతి మైక్రోవెల్ స్థానాలను లెక్కించారు మరియు అన్ని ప్రమాణాలు మరియు నమూనాలు నకిలీలో అమలు చేయబడాలి.ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల స్థానాలను రికార్డ్ చేయండి.
9.2.5సాంద్రీకృత యాంటీబాడీ ద్రావణం యొక్క పలుచన: సాంద్రీకృత ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని 1:10 వాల్యూమ్ నిష్పత్తిలో ఎంజైమ్ కంజుగేట్ డైల్యూంట్స్తో పలుచన చేయండి (1 రెట్లు సాంద్రీకృత ఎంజైమ్ ద్రావణం: 10 ఫోల్డ్స్ ఎంజైమ్ కంజుగేట్ డైలెంట్స్).
9.2.6ప్రామాణిక పరిష్కారం / నమూనా మరియు ఎంజైమ్ సంయోగ ద్రావణాన్ని జోడించండి: సంబంధిత బావులకు 50µl ప్రామాణిక ద్రావణం లేదా సిద్ధం చేసిన నమూనాను జోడించండి, 50µl ఎంజైమ్ కంజుగేట్ ద్రావణాన్ని జోడించండి.ప్లేట్ను మాన్యువల్గా షేక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు కవర్తో 25℃ వద్ద 30 నిమిషాలు పొదిగేది.
9.2.7కడగండి: కవర్ను సున్నితంగా తీసివేసి, బావుల నుండి ద్రవాన్ని పోసి, మైక్రోవెల్లను 250µl పలుచన చేసిన వాష్ ద్రావణంతో శుభ్రం చేయండి (పరిష్కారం6) 10 సెకన్ల విరామంలో 4-5 సార్లు.శోషక కాగితంతో అవశేష నీటిని పీల్చుకోండి (మిగిలిన గాలి బుడగను ఉపయోగించని చిట్కాతో తొలగించవచ్చు).
9.2.8కలరింగ్: ప్రతి బావికి 50µl సబ్స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ A మరియు 50ul సబ్స్ట్రేట్ సొల్యూషన్ B కలపండి.ప్లేట్ను మాన్యువల్గా రాక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు కవర్తో 25℃ వద్ద 15 నిమిషాలు పొదిగేది (12.8 చూడండి).
9.2.11కొలత: ప్రతి బావికి 50µl స్టాప్ సొల్యూషన్ జోడించండి.ప్లేట్ను మాన్యువల్గా రాక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు 450nm వద్ద శోషణను కొలవండి (ఇది ద్వంద్వ-తరంగదైర్ఘ్యం 450/630nmతో కొలవాలని సూచించింది. స్టాప్ సొల్యూషన్ జోడించిన తర్వాత 5 నిమిషాలలోపు ఫలితాన్ని చదవండి. )
10 ఫలితాలు
10.1శాతం శోషణ
ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు మొదటి ప్రమాణం (సున్నా ప్రమాణం) యొక్క శోషణ విలువతో విభజించబడ్డాయి మరియు 100% గుణించబడతాయి.ఈ విధంగా సున్నా ప్రమాణం 100%కి సమానంగా చేయబడుతుంది మరియు శోషణ విలువలు శాతాలలో కోట్ చేయబడతాయి.
=
B ——శోషణ ప్రమాణం (లేదా నమూనా)
B0 ——శోషణ సున్నా ప్రమాణం
10.2ప్రామాణిక వక్రత
----ప్రామాణిక వక్రరేఖను గీయడానికి: ప్రమాణాల శోషణ విలువను y-యాక్సిస్గా, సెమీ లాగరిథమిక్గా AOZ స్టాండర్డ్ సొల్యూషన్ (ppb) యొక్క గాఢత x-యాక్సిస్గా తీసుకోండి.
----ప్రతి నమూనా యొక్క AOZ ఏకాగ్రత (ppb), ఇది అమరిక వక్రరేఖ నుండి చదవబడుతుంది, అనుసరించిన ప్రతి నమూనా యొక్క సంబంధిత పలుచన కారకం ద్వారా గుణించబడుతుంది మరియు నమూనా యొక్క వాస్తవ గాఢత పొందబడుతుంది.
దయచేసి గుర్తించు:
అన్ని డేటా తగ్గింపు కోసం ప్రత్యేక సాఫ్ట్వేర్ అభివృద్ధి చేయబడింది, ఇది అభ్యర్థనపై అందించబడుతుంది.
పలుచన కారకం…………………………………………………… 2
10.సున్నితత్వం, ఖచ్చితత్వం మరియు ఖచ్చితత్వం
సున్నితత్వం: 0.025ppb
గుర్తింపు పరిమితి:
కణజాలం (కండరాలు, కాలేయం)……………………………… 0.1ppb
తేనె------------------------------------------------- -0.1ppb
ఖచ్చితత్వం:
జంతు కణజాలం (కండరాలు మరియు కాలేయం)…………………….. 100 ± 20%
తేనె …………………………………………… 100 ± 20%
ఖచ్చితత్వం:ELISA కిట్ యొక్క CV 10% కంటే తక్కువ.
11.గమనించండి
12.1 రియాజెంట్లు మరియు నమూనాలను గది ఉష్ణోగ్రత (20-25℃)కి నియంత్రించకపోతే ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు తగ్గించబడతాయి.
12.2 విజయవంతం కాని పునరుత్పత్తిని నివారించడానికి దశల మధ్య మైక్రోవెల్లను పొడిగా అనుమతించవద్దు మరియు మైక్రోవెల్స్ హోల్డర్ను నొక్కిన వెంటనే తదుపరి దశను ఆపరేట్ చేయండి.
12.3 ఉపయోగం ముందు ప్రతి రియాజెంట్ను సున్నితంగా షేక్ చేయండి.
12.4 మీ చర్మాన్ని స్టాప్ సొల్యూషన్ నుండి దూరంగా ఉంచండి, అది 0.5MH2SO4పరిష్కారం.
12.5 కాలం చెల్లిన కిట్లను ఉపయోగించవద్దు.వేర్వేరు బ్యాచ్ల రియాజెంట్లను మార్పిడి చేయవద్దు, లేకుంటే అది సున్నితత్వాన్ని తగ్గిస్తుంది.
12.6 నిల్వ పరిస్థితి: ELISA కిట్లను 2-8℃ వద్ద ఉంచండి, ఫ్రీజ్ చేయవద్దు.సీల్ రెస్ట్ మైక్రోవెల్ ప్లేట్లు, అన్ని పొదిగే సమయంలో నేరుగా సూర్యరశ్మిని నివారించండి.మైక్రోటైటర్ ప్లేట్లను కవర్ చేయడం సిఫార్సు చేయబడింది.
12.7 సబ్స్ట్రేట్ ద్రావణం రంగులు మారితే వదిలివేయాలి.సున్నా ప్రమాణం యొక్క శోషణ విలువ (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) కంటే తక్కువగా ఉంటే రియాజెంట్లు క్షీణించవచ్చు.
12.8 సబ్స్ట్రేట్ ద్రావణాన్ని కలిపిన తర్వాత రంగు ప్రతిచర్యకు 15 నిమిషాలు అవసరం;రంగు చాలా తేలికగా ఉంటే, మీరు పొదిగే సమయాన్ని 20 నిమిషాలు లేదా అంతకంటే ఎక్కువ పొడిగించవచ్చు., 25 నిమిషాలకు మించకూడదు. దీనికి విరుద్ధంగా, పొదిగే సమయాన్ని సరిగ్గా తగ్గించండి.
12.9 సరైన ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రత 25℃.ఎక్కువ లేదా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సున్నితత్వం మరియు శోషణ విలువల మార్పులకు దారి తీస్తుంది.
12.నిల్వ పరిస్థితి మరియు నిల్వ కాలం
నిల్వ పరిస్థితి: 2-8℃.
నిల్వ కాలం: 12 నెలలు.