פּראָדוקט

1. 1.הינטערגרונט

ניטראָפוראַנס זענען סינטעטיש ברייט-ספּעקטרום אַנטיביאַטיקס, וואָס זענען אָפט געניצט אין כייַע פּראָדוקציע פֿאַר זייַן ויסגעצייכנט אַנטיבאַקטיריאַל און פאַרמאַקאָקינעטיק פּראָפּערטיעס.זיי זענען אויך געניצט ווי גראָוט פּראַמאָוטערז אין חזיר, אָף און וואַסער פּראָדוקציע.אין לאַנג-טערמין שטודיום מיט לאַב אַנימאַלס אנגעוויזן אַז די פאָטער דרוגס און זייער מעטאַבאָליטעס האָבן געוויזן קאַרסאַנאָודזשעניק און מוטאַגעניק קעראַקטעריסטיקס.דאָס האָט געפֿירט צו אַ פאַרווער פון ניטראָפוראַנס פֿאַר די באַהאַנדלונג פון אַנימאַלס געניצט פֿאַר עסנוואַרג פּראָדוקציע.די ניטראָפוראַן דרוגס פוראַלטאַדאָנע, ניטראָפוראַנטאָין און ניטראָפוראַזאָנע זענען באַנד פון נוצן אין עסנוואַרג כייַע פּראָדוקציע אין די אי.יו. אין 1993, און די נוצן פון פוראַזאָלידאָנע איז פּראָוכיבאַטאַד אין 1995.

די אַנאַליסיס פון די רעזאַדו פון ניטראָפוראַן דרוגס דאַרף זיין באזירט אויף די דיטעקשאַן פון די געוועב-בונדן מעטאַבאָליטעס פון די ניטראָפוראַן פאָטער דרוגס.זינט די פאָטער דרוגס זענען זייער ראַפּאַדלי מעטאַבאָליזעד, און די מעטאַבאָליטעס פון ניטראָפוראַן בונד פֿאַר אַ לאַנג צייַט, די מעטאַבאָליטעס זענען געניצט ווי אַ ציל אין די דיטעקשאַן פון זידלען פון ניטראָפוראַנס, אַרייַנגערעכנט Furazolidone מעטאַבאָליטע (AOZ), Furaltadone מעטאַבאָליטע (AMOZ). ), ניטראָפוראַנטאָין מעטאַבאָליטע (אַהד) און ניטראָפוראַזאָנע מעטאַבאָליטע (סעם).

AOZ-רעזאַדז זענען מערסט קאַמאַנלי באשלאסן דורך LC-MS אָדער LC-MS/MS.ענזיים ימיונאָאַססיז, קאַמפּערד מיט טשראָמאַטאָגראַפיק מעטהאָדס, ווייַזן היפּש אַדוואַנטידזשיז וועגן סענסיטיוויטי, דיטעקשאַן שיעור, טעכניש ויסריכט און צייט פאָדערונג.(צייט קאָס: 45 מינוט)

1. 2.טעסט פּרינציפּ

דעם ELISA קיט איז דיזיינד צו דעטעקט AOZ באזירט אויף דעם פּרינציפּ פון ומדירעקט-קאַמפּעטיטיוו ענזיים ימיונאָואַסיי.די מיקראָטיטער וועלז זענען קאָוטאַד מיט כאַפּן BSA-לינגקט אַנטיגען.AOZ אין מוסטער קאַמפּיץ מיט די אַנטיגען קאָוטאַד אויף די מיקראָטיטער טעלער פֿאַר די אַנטיבאָדי צוגעגעבן.נאָך די אַדישאַן פון ענזיים קאָנדזשוגאַטע, טשראָמאָגעניק סאַבסטרייט איז געניצט און דער סיגנאַל איז געמאסטן דורך אַ ספּעקטראָפאָטאָמעטער.די אַבזאָרפּשאַן איז פאַרקערט פּראַפּאָרשאַנאַל צו די AOZ קאַנסאַנטריישאַן אין די מוסטער.

1. 3.אַפּפּליקאַטיאָנס

דעם קיט קענען זיין געוויינט אין קוואַנטיטאַטיווע און קוואַליטאַטיווע אַנאַליסיס פון AOZ רעזאַדו איןאַנימאַ געוועבן(מוסקל, לעבער עטק), האָניק.

1. 4.קרייַז-ריאַקשאַנז

פוראַזאָלידאָנע מעטאַבאָליטע (אַאָז) …………………………..100%

פוראַלטאַדאָנע מעטאַבאָליטע (אַמאָז) ………………………… <0.1%

ניטראָפוראַנטאָין מעטאַבאָליטע (אַהד) ………………………… <0.1%

ניטראָפוראַזאָנע מעטאַבאָליטע (SEM) ………………………………… <0.1%

פוראַזאָלידאָנע …………………………………………………..…16.3%

פוראַלטאַדאָנע………………………………………………………..<1%

ניטראָפוראַנטאָין …………………………………………………………………..…<1%

ניטראָפוראַזאָנע…………………………………………………..…<1%

1. 5.מאַטעריאַלס פארלאנגט

5.1עקוויפּמענץ

---- מיקראָטיטער טעלער ספּעקטראָפאָטאָמעטער (450nm/630nm)

---- ראָטאַרי יוואַפּערייטער אָדער ניטראָגען דרייינג ינסטראַמאַנץ

----האָמאָגעניזער / סטאָמאַטשער

----שאַקער

---- וואָרטעקס מיקסער

---- סענטריפיוזש

---- אַנאַליטיש וואָג (ינדוקטאַנס: 0.01 ג)

---- גראַדזשאַווייטיד פּייפּעט: 10 מל

---- גומע פּיפּעטטע ציבעלע

---- וואָלומעטריק קאָלבע: 100 מל

---- גלאז קאָלבע: 10 מל

---- פּאָליסטירענע סענטריפוגע רער: 2 מל, 50 מל

---- מיקראָפּיפּעטעס: 20ul-200ul, 100ul-1000ul,

250ul-מולטיפּיפּעטע

5.2רעאַגענץ

---- עטהיל אַסאַטייט (AR)

---- n-העקסאַן (אָדער n-העפּטיין) (AR)

---- דיפּאַטאַסיאַם הידראָגען פאָספאַטע טריהידראַטע

(K₂HPO₄.3ה₂אָ) (אַר)

---- קאַנסאַנטרייטאַד הידראָטשלאָריק זויער (הקל, אַר)

-----מעטאַנאָל

---- סאָדיום כיידראַקסייד (נאַאָה, אַר)

---- דעיאָניזעד וואַסער

1. 6.קיט קאַמפּאָונאַנץ

l מיקראָטיטער טעלער קאָוטאַד מיט אַנטיגען, 96 וועלז

ל נאָרמאַל סאַלושאַנז (6 לאגלען, 1 מל / פלאַש)

0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb

l ספּיקינג נאָרמאַל קאָנטראָל: (1 מל / פלאַש). ... ....100פּפּב

ל קאַנסאַנטרייטאַד ענזיים קאָנדזשוגאַטע 1 מל .... רויט היטל

ל ענזיים קאָנדזשוגאַטע דילואַנץ 10 מל ……….. גרין היטל

l סאַבסטרייט א 7 מל………..............................................…..…..ווייַס היטל

l סאַבסטרייט ב 7 מל………..............................................................….. רויט היטל

l האַלטן לייזונג 7 מל……………………………………… געל היטל

ל 20 × קאַנסאַנטרייטאַד וואַש לייזונג 40 מל

………………………………………….…… טראַנספּעראַנט היטל

ל 2 × קאַנסאַנטרייטאַד יקסטראַקשאַן לייזונג 60 מל .... בלוי היטל

l 2-Nitrobenzaldehyde 15.1mg……………… ווייַס היטל

1. 7.רעאַגענץ צוגרייטונג

לייזונג 1: דעריוואַט רעאַגענט:

לייג 10 מל פון מעטאַנאָל צו די פלאַש מיט 2-ניטראָבענזאַלדעהידע און צעלאָזן.(אין די קאַנסאַנטריישאַן פון 10מם).

לייזונג 2: 0.1MK₂HPO₄לייזונג:

וואָג 22.8 ג ק₂HPO₄.3ה₂אָ צו 1 ל פון דייאָניזעד וואַסער צו צעלאָזן.

לייזונג 3: 1M הקל לייזונג

צעלאָזן 8.3 מל קאַנסאַנטרייטאַד הידראָטשלאָריק זויער מיט דייאָניזעד וואַסער צו 100 מל.

לייזונג 4:1M NaOH לייזונג

צעלאָזן 4 ג נאַאָה מיט 100 מל דעיאָניזעד וואַסער.

לייזונג 5: עקסטראַקטיאָן לייזונג:

צעפירן 2 × קאַנסאַנטרייטאַד יקסטראַקשאַן לייזונג מיט דייאַנייזד וואַסער אין די באַנד פאַרהעלטעניש פון 1: 1.די לייזונג קענען זיין קאַנסערווד פֿאַר 1 חודש ביי 4 ℃, וואָס וועט זיין געוויינט צו עקסטראַקט סאַמפּאַלז.

לייזונג 6: וואַש לייזונג:

צעפירן די 20 × קאַנסאַנטרייטאַד וואַש לייזונג מיט דייאָניזעד וואַסער אין אַ באַנד פון 1:19, וואָס וועט זיין געוויינט צו וואַשן די פּלאַטעס.די דיילוטאַד לייזונג קענען זיין קאַנסערווד פֿאַר 1 חודש ביי 4 ℃.

1. 8.מוסטער פּרעפּעריישאַנז

8.1נאָטיץ און פּריקאָשאַנז איידער אָפּעראַציע:

אַ) ביטע נוצן איין-אַוועק עצות אין דער עקספּערימענט, און טוישן די עצות ווען אַבזאָרבינג פאַרשידענע רייידזשאַנט.

ב) מאַכן זיכער אַז אַלע יקספּערמענאַל ינסטראַמאַנץ זענען ריין.

c) דער דעריוואַט רייידזשאַנט קענען זיין קאַנסערווד ביי 2-8 ℃ פֿאַר דריי חדשים;

ד) די הקל לייזונג קענען זיין קאַנסערווד אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 3 חדשים;

e) די נאַאָה לייזונג קענען זיין קאַנסערווד פֿאַר 3 חדשים אין צימער טעמפּעראַטור;

f) האַלטן אַנטריטיד סאַמפּאַלז אין פרירן (-20 ℃);

ג) באהאנדלט סאַמפּאַלז קענען זיין קאַנסערווד פֿאַר 24 שעה ביי 2-8 ℃ אין פינצטערניש.

8.2 כייַע געוועב און לעבער סאַמפּאַלז:

---- האָמאָגעניזע די סאַמפּאַלז מיט האָמאָגעניזער;

---- וואָג 1.0 ± 0.05 ג פון די כאָומאַדזשאַנייזד געוועב מוסטער אין 50 מל פּאַליסטיירין סענטריפוגע רער.לייג 4 מל דעיאָניזעד וואַסער, 0.5 מל 1 ם הקל לייזונג און 100 UL דעריוואַט רייידזשאַנט (זען לייזונג 1).שאָקלען עס פֿאַר 2 מינוט.

---- ינקובאַטע ביי 37 ℃ יבערנאַכטיק (וועגן 16 ה);

---- לייג 5 מל 0.1מק₂HPO₄ (לייזונג2), 0.4 מל 1 ם נאַאָה (לייזונג4) און 5 מל עטאַל אַסאַטייט.שאָקלען פירסעלי פֿאַר 30 ס;

---- סענטריפיוזש אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃) פֿאַר 10 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג;

---- נעמען 2.5 מל פון די סופּערנאַטאַנט אָרגאַניק פאַסע אין אַ 10 מל ריין גלאז רער, טרוקן מיט 50-60 ℃ ניטראָגען גאַז אָדער דריי יוואַפּערייטער;

---- צעלאָזן די טרוקן לעפטאָוווער מיט 1 מל n-העקסאַן (אָדער n-העפּטיין), וואָרטעקס פֿאַר 30 ס, לייגן 1 מל יקסטראַקשאַן לייזונג (לייזונג5), וואָרטעקס 1 מין, מישן גאָר.

---- סענטריפיודזש אין צימער טעמפּעראַטור (20-25^oC) פֿאַר 5 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג;

---- אַראָפּנעמען די סופּערנאַנטאַנט אָרגאַניק פאַסע;נעמען 50 μל פון די סאַבסטרייט וואַסער פאַסע פֿאַר אַסיינמאַנט.

8.4 האָניק

---- וועגן 1.0 ± 0.05 ג פון די כאָומאַדזשאַנייזד האָניק מוסטער אין אַ 50 מל פּאַליסטיירין סענטריפודזש רער;

---- לייג 4 מל דעיאָניזעד וואַסער, 0.5 מל 1 ם הקל (לייזונג3) און 100μל דעריוואַט רייידזשאַנט (לייזונג1);שאָקלען גאָר פֿאַר 2 מינוט;

---- ינקובאַטע ביי 37 ℃ יבערנאַכטיק (וועגן 16 ה);

---- לייג 5 מל 0.1MK₂HPO₄ (לייזונג2), 0.4 מל 1 ם נאַאָה (לייזונג4) און 5 מל עטאַל אַסאַטייט, שאָקלען פירסלי פֿאַר 30 ס;

---- סענטריפיוזש אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃) פֿאַר 10 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג;

---- נעמען 2.5 מל פון די סופּערנאַטאַנט אָרגאַניק פאַסע אין אַ 10 מל ריין גלאז רער, טרוקן מיט 50-60 ℃ ניטראָגען גאַז אָדער דריי יוואַפּערייטער;

---- צעלאָזן די טרוקן לעפטאָוווער מיט 1 מל n-העקסאַן (אָדער n-העפּטיין), וואָרטעקס פֿאַר 30 ס, לייגן 1 מל יקסטראַקשאַן לייזונג (לייזונג5), וואָרטעקס 1 מין, מישן גאָר.

---- סענטריפיודזש אין צימער טעמפּעראַטור (20-25^oC) פֿאַר 10 מינוט, בייַ מינדסטער 3000 ג;

---- אַראָפּנעמען די סופּערנאַנטאַנט אָרגאַניק פאַסע;נעמען 50 μל פון די סאַבסטרייט וואַסער פאַסע פֿאַר אַסיינמאַנט.

1. 9.אַסעסמאַנט פּראָצעס

9.1באַמערקן איידער אַסיי

9.1.1 מאַכן זיכער אַז אַלע רייידזשאַנץ און מיקראָוועלז זענען אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃).

9.1.2 צוריקקומען אַלע די מנוחה רייידזשאַנץ צו 2-8 ℃ מיד נאָך נוצן.

9.1.3 וואַשינג די מיקראָוועלז ריכטיק איז אַ וויכטיק שריט אין דעם פּראָצעס פון אַסייַ;דאָס איז דער וויטאַל פאַקטאָר פֿאַר די רעפּראָדוסיביליטי פון די ELISA אַנאַליסיס.

9.1.4 ויסמיידן די ליכט און דעקן די מיקראָוועלז בעשאַס ינגקיוביישאַן.

9.2 אַסאַס סטעפּס

9.2.1 נעמען אַלע רייידזשאַנץ אויס אין צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃) פֿאַר מער ווי 30 מינוט, כאָומאַדזשאַנייז איידער נוצן.

9.2.2 באַקומען די נויטיק מיקראָוועללס און צוריקקומען די מנוחה אין די פאַרשלעסלען-שלאָס זעקל גלייך ביי 2-8 ℃.

9.2.3 די קאַנסאַנטרייטאַד וואַש לייזונג און קאַנסאַנטרייטאַד יקסטראַקשאַן לייזונג זאָל זיין ריוואָרמד צו זיין אין צימער טעמפּעראַטור איידער נוצן.

9.2.4נומער:געציילט יעדער מיקראָוועל שטעלעס און אַלע סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז זאָל זיין לויפן אין דופּליקאַט.רעקאָרדירן די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז שטעלעס.

9.2.5דיילושאַן פון קאַנסאַנטרייטאַד אַנטיבאָדי לייזונג: צעפירן די קאַנסאַנטרייטאַד ענזיים לייזונג מיט ענזיים קאָנדזשוגאַטע דילואַנץ אין אַ פאַרהעלטעניש פון 1:10 (1 פאָל קאַנסאַנטרייטאַד ענזיים לייזונג: 10 פאָולדז ענזיים קאָנדזשוגאַטע דילואַנץ).

9.2.6לייג נאָרמאַל לייזונג / מוסטער און ענזיים קאָנדזשוגאַטע לייזונג: לייגן 50 μל נאָרמאַל לייזונג אָדער צוגעגרייט מוסטער צו קאָראַספּאַנדינג וועלז, לייגן 50 μל ענזיים קאָנדזשוגאַטע לייזונג.מישן דזשענטלי דורך שאַקינג די טעלער מאַניואַלי און ינגקיובייט פֿאַר 30 מינוט בייַ 25 ℃ מיט דעקן.

9.2.7וואַשן: אַראָפּנעמען די דעקן דזשענטלי און גיסן די פליסיק אויס פון די וועלז און שווענקען די מיקראָוועלז מיט 250 μל דיילוטאַד וואַש לייזונג (לייזונג6) מיט אַ מעהאַלעך פון 10 ס פֿאַר 4-5 מאל.אַרייַנציען די ריזידזשואַל וואַסער מיט אַבזאָרבאַנט פּאַפּיר (די מנוחה לופט בלאָז קענען זיין ילימאַנייטאַד מיט אַניוזד שפּיץ).

9.2.8קאָלאָראַטיאָן: לייג 50 μל סאַבסטרייט לייזונג א און 50 ul סאַבסטרייט לייזונג ב צו יעדער געזונט.מישן דזשענטלי דורך ראַקינג די טעלער מאַניואַלי און ינגקיובייט פֿאַר 15 מינוט בייַ 25 ℃ מיט דעקן (זען 12.8).

9.2.11מעסטן: לייג 50 μל די האַלטן לייזונג צו יעדער געזונט.מישן דזשענטלי דורך ראַקינג די טעלער מאַניואַלי און מעסטן די אַבזאָרבאַנס ביי 450 נם (עס סאַגדזשעסטיד מאָס מיט די צווייענדיק ווייוולענגט פון 450/630 נם. לייענען די רעזולטאַט ין 5 מינוט נאָך אַדישאַן פון האַלטן לייזונג.)

10 רעזולטאַטן

10.1פּראָצענט אַבזאָרבאַנס

די דורכשניטלעך וואַלועס פון די אַבזאָרבאַנס וואַלועס באקומען פֿאַר די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז זענען צעטיילט דורך די אַבזאָרבאַנס ווערט פון דער ערשטער נאָרמאַל (נול נאָרמאַל) און געמערט מיט 100%.דער נול נאָרמאַל איז אַזוי געמאכט גלייַך צו 100% און די אַבזאָרבאַנס וואַלועס זענען ציטירטן אין פּערסענטידזשיז.

=

ב ——אַבזאָרבאַנס נאָרמאַל (אָדער מוסטער)

B0 ——אַבזאָרבאַנס נול נאָרמאַל

10.2נאָרמאַל קורווע

---- צו ציען אַ נאָרמאַל ויסבייג: נעמען די אַבזאָרבאַנס ווערט פון סטאַנדאַרדס ווי י-אַקס, האַלב לאָגאַריטהמיק קאַנסאַנטריישאַן פון די AOZ נאָרמאַל לייזונג (פּפּב) ווי X-אַקס.

---- די AOZ קאַנסאַנטריישאַן פון יעדער מוסטער (פּפּב), וואָס קענען זיין לייענען פֿון די קאַלאַבריישאַן ויסבייג, איז געמערט מיט די קאָראַספּאַנדינג דיילושאַן פאַקטאָר פון יעדער מוסטער נאכגעגאנגען, און די פאַקטיש קאַנסאַנטריישאַן פון מוסטער איז באקומען.

ביטע באַמערקן:

ספּעציעלע ווייכווארג איז דעוועלאָפּעד פֿאַר אַלע דאַטן רעדוקציע, וואָס קענען זיין צוגעשטעלט אויף בעטן.

דילוטיאָן פאַקטאָר………………………………………………………2

10 .סענסיטיוויטי, אַקיעראַסי און פּינטלעכקייַט

סענסיטיוויטי: 0.025 פּפּב

דעטעקשאַן שיעור:

געוועב (מוסקל, לעבער) …………………………0.1ppb

האָניק----------------------------------------- -0.1 פּפּב

אַקיעראַסי:

כייַע געוועב (מוסקל און לעבער) …………………………100±20%

האָניק ………………………………………………………… 100±20%

פּינטלעכקייט:CV פון די ELISA קיט איז ווייניקער ווי 10%.

11 .נאָטיץ

12.1 די דורכשניטלעך וואַלועס פון די אַבזאָרבאַנס וואַלועס באקומען פֿאַר די סטאַנדאַרדס און סאַמפּאַלז וועט זיין רידוסט אויב די רייידזשאַנץ און סאַמפּאַלז זענען נישט רעגיאַלייטאַד צו צימער טעמפּעראַטור (20-25 ℃).

12.2 דו זאלסט נישט לאָזן מיקראָוועלז צו טרוקן צווישן סטעפּס צו ויסמיידן ניט געראָטן רעפּראָדוסיביליטי און אַרבעטן די ווייַטער שריט מיד נאָך צאַפּן די מיקראָוועלס האָלדער.

12.3 שאָקלען יעדער רייידזשאַנט דזשענטלי איידער נוצן.

12.4 האַלטן דיין הויט אַוועק פון די האַלטן לייזונג פֿאַר עס איז די 0.5 מה₂SO₄לייזונג.

12.5 דו זאלסט נישט נוצן די קיץ פון די לעצטע טאָג.דו זאלסט נישט בייַטן די רייידזשאַנץ פון פאַרשידענע באַטשאַז, אָדער אַנדערש עס וועט פאַלן די סענסיטיוויטי.

12.6 סטאָרידזש צושטאַנד: האַלטן די עליסאַ קיץ בייַ 2-8 ℃, טאָן ניט פרירן.פּלאָמבע מנוחה מיקראָוועל פּלאַטעס, ויסמיידן גלייַך זונשייַן בעשאַס אַלע ינגקיוביישאַנז.עס איז רעקאַמענדיד צו דעקן די מיקראָטיטער פּלאַטעס.

12.7 סאַבסטרייט לייזונג זאָל זיין פארלאזן אויב עס טורנס פארבן.די רייידזשאַנץ קען זיין דיטיריערייטיד אויב די אַבזאָרבאַנס ווערט (450/630 נם) פון די נול נאָרמאַל איז ווייניקער ווי 0.5 (A450nm <0.5).

12.8 די קאָליר אָפּרוף דאַרף 15 מינוט נאָך די אַדישאַן פון סאַבסטרייט לייזונג;איר קענען פאַרלענגערן די ינגקיוביישאַן צייַט צו 20מין אָדער מער אויב די קאָליר איז אויך ליכט צו זיין באשלאסן., קיינמאָל יקסיד 25מין. אויף די פאַרקערט, פאַרקירצן די ינגקיוביישאַן צייט רעכט.

12.9 די אָפּטימאַל אָפּרוף טעמפּעראַטור איז 25 ℃.העכער אָדער נידעריקער טעמפּעראַטור וועט פירן צו די ענדערונגען פון סענסיטיוויטי און אַבזאָרבאַנס וואַלועס.

12 .סטאָרידזש צושטאַנד און סטאָרידזש צייַט

סטאָרידזש צושטאַנד: 2-8℃.

סטאָרידזש צייַט: 12 חדשים.