ထုတ်ကုန်

Flumequine ၏ Quantitative analysis အတွက် ယှဉ်ပြိုင်နိုင်သော Enzyme Immunoassay Kit

အတိုချုံးဖော်ပြချက်-

Flumequine သည် ၎င်း၏ကျယ်ပြန့်သောရောင်စဉ်၊ စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားမှု၊ အဆိပ်သင့်မှုနည်းပါးပြီး ပြင်းထန်သောတစ်ရှူးထိုးဖောက်မှုများအတွက် ကုသရေးကုသရေးနှင့် ရေနေထုတ်ကုန်များတွင် အလွန်အရေးကြီးသော ရောဂါပိုးဆန့်ကျင်ရေးတစ်ခုအဖြစ် အသုံးပြုသည့် quinolone ဆန့်ကျင်ဘက်တီးရီးယား၏အဖွဲ့ဝင်ဖြစ်သည်။ရောဂါကုထုံး၊ ကာကွယ်ခြင်းနှင့် ကြီးထွားမှုမြှင့်တင်ရေးတို့အတွက်လည်း အသုံးပြုသည်။၎င်းသည် ဆေးယဉ်ပါးမှုနှင့် ကင်ဆာဖြစ်နိုင်ချေကို ဦးတည်စေနိုင်သောကြောင့်၊ အီးယူတွင် တိရစ္ဆာန်တစ်သျှူးအတွင်း သတ်မှတ်ထားသော ကန့်သတ်ချက်မြင့်မားသော ကန့်သတ်ချက်မှာ ဂျပန်နိုင်ငံ (အီးယူတွင် 100ppb) ဖြစ်သည်။

လက်ရှိတွင်၊ spectrofluorometer၊ ELISA နှင့် HPLC တို့သည် flumequine အကြွင်းအကျန်ကိုရှာဖွေရန် အဓိကနည်းလမ်းများဖြစ်ကြပြီး ELISA သည် မြင့်မားသောအာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် လွယ်ကူသောလုပ်ဆောင်ချက်အတွက် ပုံမှန်နည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။


ထုတ်ကုန်အသေးစိတ်

ထုတ်ကုန်အမှတ်အသား

စာမေးပွဲမူလ

ဤကိရိယာသည် သွယ်ဝိုက်ယှဉ်ပြိုင်နိုင်သော ELISA နည်းပညာကို အခြေခံထားသည်။microtiter ရေတွင်းများကို coupling antigen ဖြင့် ဖုံးအုပ်ထားသည်။Flumequineနမူနာရှိ အကြွင်းအကျန်သည် ပဋိပစ္စည်းအတွက် microtiter plate ပေါ်ရှိ antigen နှင့် ယှဉ်ပြိုင်သည်။Anti-antibody တံဆိပ်တပ်ထားသော အင်ဇိုင်းကို ပေါင်းထည့်ပြီးနောက်၊ အရောင်ကိုပြသရန် TMB အလွှာကို အသုံးပြုသည်။နမူနာ၏ စုပ်ယူမှုသည် ၎င်းတွင်ရှိသော tetracycline နှင့် အနုတ်လက္ခဏာဆောင်သော ဆက်စပ်နေပါသည်။ Standard Curve နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ ပျော့ပြောင်းမှုများစွာဖြင့် မြှောက်ပါက၊ နမူနာရှိ Flumequine အကြွင်းအကျန်ပမာဏကို တွက်ချက်နိုင်ပါသည်။

လျှောက်လွှာများ

ဤကိရိယာကို ပျားရည်တွင် flumequine အကြွင်းအကျန်များ၏ အရေအတွက်နှင့် အရည်အသွေးပိုင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အသုံးပြုနိုင်သည်။

အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများ

Flumequine …………………..………………………… 100%

 

လိုအပ်သောပစ္စည်းများ

ပစ္စည်းတွေ

┅┅မိုက်ခရိုတီတာပြား စပီကာဓာတ်ပုံမီတာ (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer သို့မဟုတ် အစာအိမ်ဆေး

┅┅ Shaker

┅┅Vortex ရောနှောစက်

┅┅ အာရုံစူးစိုက်မှု

┅┅ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာလက်ကျန် (inductance: 0.01g)

┅┅ Graduated pipette: 15ml

┅┅ ရော်ဘာပိုက်လိုင်း မီးသီး

┅┅Polystyrene Centrifuge tube: 15ml၊ 50ml

┅┅မှန်စမ်းသပ်ပြွန်: 10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml၊ 100ml -10000ml၊

250ml -multipipette

ဓာတ်ပစ္စည်းများ

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅ Deionized ရေ

----- စုစည်းထားသော ဟိုက်ဒရိုကလိုရစ်အက်ဆစ် (AR)

 

Kit အစိတ်အပိုင်းများ

● အန်တီဂျင်ဖြင့် ဖုံးအုပ်ထားသော ရေတွင်း 96 တွင်းပါရှိသော Microtiter ပန်းကန်

● ပုံမှန်ဖြေရှင်းချက် (၆ ပုလင်း × ၁ မီလီလီတာ/ပုလင်း)

0ppb၊ 0.3ppb၊ 1.2ppb၊ 4.8ppb၊ 19.2ppb၊ 76.8ppb

● မြင့်မားသောအာရုံစူးစိုက်မှုစံထိန်းချုပ်မှု-(1ml/ပုလင်း)

…………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml ……………………….. အနီရောင်ထုပ်

● Antibody solution 7ml …………..……..….. အစိမ်းထုပ်

● ဖြေရှင်းချက် A 7ml……..…………………..………..အဖြူထုပ်

● Solution B 7ml …………….…………..………… အနီထုပ်

● Stop solution 7ml …………………………..……… အဝါရောင်ထုပ်

● 20XConcentrated wash solution 40ml

…………………………………………….. အကြည်ထုပ်

●2X ထုတ်ယူမှုဖြေရှင်းချက် 50ml ………………..… အပြာရောင်ထုပ်

 

ဓါတ်ကူပစ္စည်း အဘိတ်

7.1 ပျားရည်နမူနာ

ဖြေရှင်းချက် 1 : 0.2 M Hydrochloric acid ဖြေရှင်းချက်

အလေးချိန် 41.5 မီလီလီတာ စုစည်းထားသော ဟိုက်ဒရိုကလိုရစ်အက်ဆစ်၊ 500 မီလီလီတာသို့ ဒိုင်းယွန်ထုတ်ထားသောရေဖြင့် ရောမွှေပါ။

ဖြေရှင်းချက် 2: ရေဆေးပါ။

ပန်းကန်ပြားများကို ဆေးကြောရာတွင် အသုံးပြုမည့် ထုထည်အချိုးအစား 1:19 တွင် စုစည်းထားသော လက်ဆေးရည်ကို ဒိုင်းယွန်ရှင်းရေဖြင့် ရောမွှေပါ။ဖျော်ရည်ကို 4 ℃ တွင် 1 လ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။

ဖြေရှင်းချက်3: ထုတ်ယူဖြေရှင်းချက်

နမူနာထုတ်ယူရန်အတွက် အသုံးပြုမည့် ပမာဏ 1:1 (သို့မဟုတ် လိုအပ်ချက်ပေါ်မူတည်၍) 2× ပြင်းအားရှိသော ထုတ်ယူသည့်အဖြေကို deionized water ဖြင့် အအေးခံပါ။ဤအရည်ကို 4 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် 1 လကြာထိန်းသိမ်းထားနိုင်သည်။

နမူနာပြင်ဆင်မှုများ

8.1 လုပ်ငန်းမစမီ သုံးစွဲသူများအတွက် သတိပေးချက်နှင့် ကြိုတင်ကာကွယ်မှုများ

(က) စမ်းသပ်မှု လုပ်ငန်းစဉ်တွင် တစ်ကြိမ်တည်း အကြံပြုချက်များကို အသုံးပြုကာ မတူညီသော ဓာတ်ပစ္စည်းများကို စုပ်ယူသည့်အခါ အကြံပြုချက်များကို ပြောင်းလဲပါ။

(ခ) စမ်းသပ်ကိရိယာအားလုံး သန့်ရှင်းကြောင်း သေချာစေပါ၊ သို့မဟုတ်ပါက ၎င်းသည် စစ်ဆေးမှုရလဒ်ကို အကျိုးသက်ရောက်စေမည်ဖြစ်သည်။

၈.၂ပျားရည် နမူနာ

----- အလေးချိန် 2g±0.05g ပျားရည်နမူနာကို 50ml polystyrene centrifuge ပြွန်ထဲသို့ အလေးချိန်၊

----- 2ml 0.2 M Hydrochloric acid ဖြေရှင်းချက် (ဖြေရှင်းချက် 1) ၊ vortex ကို လုံးလုံးရောမွှေပြီး 8ml methylene chloride ထည့်ပြီး လုံးလုံးပျော်သွားအောင် shaker နဲ့ လှုပ်ခါပြီး 5 မိနစ်၊

----- အခန်းအပူချိန် (20-25 ℃) တွင် အနည်းဆုံး 3000 ဂရမ်၊

----- supernatant အဆင့်ကို ဖယ်ရှားပြီး 2 ml ကို 10 ml ဖန်ပြွန်တစ်ခုထဲသို့ ယူ၍ နိုက်ထရိုဂျင် စီးဆင်းမှု၏ ရေချိုးခန်းအောက်ရှိ အောက်ခံအလွှာကို အခြောက်ခံပါ (50-60 ℃)

----- 1 ml n-hexane၊ vortex ကို 30 နှစ်ကြာအောင်ထည့်ပါ၊ ထို့နောက် 1ml extraction solution (ဖြေရှင်းချက် 3) ၊ vortex ကို 1 မိနစ်ထပ်ထည့်ပါ။အခန်းအပူချိန် (20-25 ℃) တွင် 5 မိနစ်၊ အနည်းဆုံး 3000g၊

----- လွန်ကဲအဆင့်ကို ဖယ်ရှားပြီး စစ်ဆေးမှုအတွက် 50ml သောက်ပါ။

9. ဆန်းစစ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်

9.1 မစစ်ဆေးမီသတိပေးချက်

9.1.1 ဓာတ်ပစ္စည်းများနှင့် မိုက်ခရိုဝဲလ်များအားလုံးကို အခန်းအပူချိန် (20-25 ℃) တွင် သေချာပါစေ။

9.1.2 အသုံးပြုပြီးပါက ကျန်ရှိသော ဓာတ်ပစ္စည်းများအားလုံးကို 2-8 ℃ သို့ ချက်ချင်းပြန်ပေးပါ။

9.1.3 မိုက်ခရိုဝဲလ်များကို မှန်ကန်စွာဆေးကြောခြင်းသည် စစ်ဆေးမှုလုပ်ငန်းစဉ်တွင် အရေးကြီးသောအဆင့်တစ်ခုဖြစ်သည်။၎င်းသည် ELISA ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ ထပ်တလဲလဲဖြစ်နိုင်မှုအတွက် မရှိမဖြစ်အရေးပါသောအချက်ဖြစ်သည်။

9.1.4 ပေါက်ဖွားစဉ်အတွင်း အလင်းရောင်ကို ရှောင်ကြဉ်ပြီး မိုက်ခရိုဝဲလ်များကို ဖုံးအုပ်ပါ။

9.2 စစ်ဆေးမှုအဆင့်များ

9.2.1 မိနစ် 30 ကျော်ကြာ အခန်းအပူချိန် (20-25 ℃) တွင် ဓါတ်ကူပစ္စည်းအားလုံးကို ဖယ်ထုတ်ပြီး အသုံးမပြုမီ တစ်သားတည်းဖြစ်စေပါ။

9.2.2 လိုအပ်သော မိုက်ခရိုဝဲလ်များကိုထုတ်ယူပြီး ကျန်ကြွင်းသောအရာများကို ဇစ်သော့အိတ်ထဲသို့ 2-8 ℃ ချက်ခြင်းပြန်ပေးပါ။

9.2.3 အသုံးမပြုမီ အခန်းအပူချိန်တွင် အရောအနှောရှိသော လက်ဆေးရည်ကို ပြန်လည်နွေးသင့်သည်။

၉.၂.၄နံပါတ်-microwell အနေအထားတိုင်းကို နံပါတ်ပေးပြီး စံနှုန်းများနှင့် နမူနာများအားလုံးကို ပွားနေရပါမည်။စံချိန်စံညွှန်းများနှင့် နမူနာရာထူးများကို မှတ်တမ်းတင်ပါ။

၉.၂.၅စံဖြေရှင်းချက်/နမူနာ ထည့်ပါ-50 µl စံဖြေရှင်းချက် သို့မဟုတ် ပြင်ဆင်ထားသောနမူနာကို သက်ဆိုင်ရာရေတွင်းများသို့ ထည့်ပါ။50µl ပဋိပစ္စည်းဖြေရှင်းချက်ထည့်ပါ။ပန်းကန်ပြားကို လက်ဖြင့်လှုပ်ခြင်းဖြင့် ညင်သာစွာရောမွှေပြီး 25 ℃ တွင် မိနစ် 30 ကြာ အဖုံးအုပ်ထားပါ။

၉.၂.၆ရေဆေး-အဖုံးကို ညင်သာစွာဖယ်ရှားပြီး ရေတွင်းထဲကအရည်တွေကို သန့်စင်ပြီး 250µl diluted wash solution (ဖြေရှင်းချက် 2) နဲ့ microwells တွေကို 10s မှ 4-5 ကြိမ်လောက်ကြာအောင် ဆေးပါ။ကျန်ရှိသောရေကို စုပ်စက္ကူဖြင့် စုပ်ယူပါ (ကျန်သောလေပူဖောင်းများကို အသုံးမပြုသော ထိပ်ဖျားဖြင့် ဖယ်ရှားနိုင်သည်)။

၉.၂.၈။အင်ဇိုင်းပေါင်းစပ်-အင်ဇိုင်းပေါင်းတင်ရည် 100ml ကို ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင်ထည့်ပါ၊ ပန်းကန်ပြားကို ကိုယ်တိုင်လှုပ်ခါပြီး ညင်သာစွာ ရောမွှေကာ အဖုံးဖြင့် 25 ℃ တွင် 30 မိနစ်ကြာ မီးဖုတ်ပါ။ရေဆေးတဲ့အဆင့်ကို နောက်တစ်ကြိမ်ထပ်လုပ်ပါ။

၉.၂.၈အရောင်ခြယ်မှု-ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင် 50µl ဖြေရှင်းချက် A နှင့် 50µl အဖြေ B ကို ထည့်ပါ။ပန်းကန်ပြားကို လက်ဖြင့်လှုပ်ခြင်းဖြင့် ညင်သာစွာရောမွှေပြီး အဖုံးဖုံးဖြင့် 25 ℃ တွင် 15 မိနစ်ကြာ မီးဖုတ်ပါ (12.8 ကိုကြည့်ပါ)။

၉.၂.၉အတိုင်းအတာ-ရေတွင်းတစ်ခုစီတွင် ရပ်တန့်ဖြေရှင်းချက် 50µl ကိုထည့်ပါ။ပန်းကန်ပြားကို လက်ဖြင့်လှုပ်ခြင်းဖြင့် ညင်သာစွာရောစပ်ပြီး လေဗလာနှင့် 450nm တွင် စုပ်ယူမှုကို တိုင်းတာခြင်း (၎င်းကို လှိုင်းအလျား 450/630nm ၏ dual-wavelength ဖြင့် အကြံပြုထားသည်။ stop solution ပေါင်းထည့်ပြီးနောက် 5 မိနစ်အတွင်း ရလဒ်ကို ဖတ်ပါ။) (ကျွန်ုပ်တို့လည်း အမြင်အားဖြင့် တိုင်းတာနိုင်ပါသည်။ ELIASA တူရိယာ၏ပျက်ကွက်မှုဖြေရှင်းချက်မရပ်ဘဲ)

ရလဒ်များ

စုပ်ယူမှု 10.1 ရာခိုင်နှုန်း

စံနှုန်းများအတွက် ရရှိသော စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးများ၏ ပျမ်းမျှတန်ဖိုးများနှင့် နမူနာများကို ပထမစံနှုန်း (သုညစံ) ၏ စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးဖြင့် ပိုင်းခြားပြီး 100% ဖြင့် မြှောက်ထားသည်။ထို့ကြောင့် သုညစံနှုန်းကို 100% နှင့် ညီစေပြီး စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးများကို ရာခိုင်နှုန်းများဖြင့် ကိုးကားထားသည်။

စုပ်ယူမှု (%) = B/B0 × 100%

B —စုပ်ယူမှုစံနှုန်း (သို့မဟုတ်နမူနာ)

B0 — စုပ်ယူမှု သုညစံ

10.2 Standard Curve

စံမျဉ်းကွေးတစ်ခုဆွဲရန်- y-ဝင်ရိုးအဖြစ် စံနှုန်းများ၏ စုပ်ယူမှုတန်ဖိုး၊ flumequine စံနှုန်းဖြေရှင်းချက် (ppb) ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု၏ တစ်ပိုင်းလော့ဂရစ်သမ်ကို x-ဝင်ရိုးအဖြစ် ယူပါ။

--- အဲflumequineနမူနာတစ်ခုစီ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု (ppb) ကို ချိန်ညှိမျဉ်းကွေးမှ ဖတ်နိုင်သော အာရုံစူးစိုက်မှုသည် နမူနာတစ်ခုစီ၏ သက်ဆိုင်ရာ dilution multiples ဖြင့် မြှောက်ပြီး နမူနာ၏ အမှန်တကယ် စူးစိုက်မှုကို ရရှိသည်။

ELISA kits များ၏ ဒေတာလျှော့ချမှုအတွက်၊ တောင်းဆိုမှုအရ ပံ့ပိုးပေးနိုင်သည့် အထူးဆော့ဖ်ဝဲကို တီထွင်ထားပါသည်။

11. အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ တိကျမှုနှင့် တိကျမှု

စမ်းသပ်မှု အာရုံခံနိုင်စွမ်း:0.3ppb

ပျားရည်နမူနာ ပျော့ပြောင်းမှုအချက်- ၂

ကန့်သတ်ချက်

ပျားရည် နမူနာ ------------------------------------------------ -1ppb

တိကျမှု

ပျားရည်နမူနာ ------------------------------------------------ 90±20 %

တိကျမှု

ELISA အစုံ၏ ပြောင်းလဲခြင်းကိန်းဂဏန်းသည် 10% ထက်နည်းသည်။

12. သတိထားပါ။

12.1 စံချိန်စံညွှန်းများအတွက် ရရှိသော စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးများနှင့် နမူနာများကို အခန်းအပူချိန် (20-25 ℃) တွင် ဓါတ်ပြုခြင်းနှင့် နမူနာများကို ထိန်းညှိခြင်းမပြုပါက ပျမ်းမျှတန်ဖိုးများ လျော့ကျသွားမည်ဖြစ်သည်။

12.2 မအောင်မြင်သော ထပ်တလဲလဲဖြစ်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန် ခြေလှမ်းများကြားတွင် မိုက်ခရိုဝဲလ်များကို ခြောက်အောင် ခွင့်မပြုပါနှင့် microwells ကိုင်ဆောင်ထားသူကို နှိပ်ပြီးနောက် နောက်တစ်ဆင့်ကို ချက်ချင်းလုပ်ဆောင်ပါ။

၁၂.၃။အသုံးမပြုမီ ဓာတ်ပစ္စည်းတစ်ခုစီကို တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ပါ။

၁၂.၄။၎င်းသည် 2M H ဖြစ်သောကြောင့် သင့်အရေပြားကို ရပ်တန့်ဖြေရှင်းချက်မှ ဝေးဝေးထားပါ။2SO4ဖြေရှင်းချက်။

12.5 ကိရိယာအစုံအလင်ကို ခေတ်မမီပါနှင့်။မတူညီသောအသုတ်များ၏ ဓာတ်ပစ္စည်းများကို မလဲလှယ်ပါနှင့်၊ ၎င်းသည် sensitivity ကျဆင်းသွားမည်ဖြစ်သည်။

12.6 သိုလှောင်မှုအခြေအနေ-

ELISA အစုံအလင်ကို 2-8 ℃ တွင် ထားပါ၊ အေးခဲမနေပါနှင့်။အလုံပိတ် မိုက်ခရိုဝဲလ်ပြားများ ပေါက်ဖွားစဉ်အတွင်း တည့်တည့်နေရောင်ခြည်ကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။မိုက်ခရိုတီတာပြားများကို ဖုံးအုပ်ရန် အကြံပြုထားသည်။

12.7 ဓါတ်ကူပစ္စည်းများ ဆိုးရွားသွားခြင်းအတွက် ညွှန်ပြချက်များ-

ဆပ်ပြာရည်သည် အရောင်ပြောင်းပါက စွန့်ပစ်သင့်သည်။

သုညစံနှုန်း၏ စုပ်ယူမှုတန်ဖိုး (450/630nm) သည် 0.5 (A450nm<0.5) ထက်နည်းပါက ဓာတ်ပစ္စည်းများသည် ဆိုးရွားသွားနိုင်သည်။

12.8 Solution A နှင့် Solution B တို့ကို ပေါင်းထည့်ပြီးနောက် ရောင်ခြယ်တုံ့ပြန်မှုသည် 15 မိနစ် လိုအပ်သည်။ ထို့နောက် အရောင်ဖျော့လွန်းပါက ပေါက်ဖွားချိန်ကို မိနစ် 20 မှ ပိုရှည်စေနိုင်သည်။25 မိနစ်ထက်မပိုပါစေနှင့်၊ ဆန့်ကျင်ဘက်တွင်၊ ပေါက်ဖွားချိန်ကို မှန်ကန်စွာ တိုစေပါ။

12.9 အကောင်းဆုံးတုံ့ပြန်မှုအပူချိန် 25 ℃။မြင့်မားသော သို့မဟုတ် နိမ့်သော အပူချိန်သည် အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် စုပ်ယူမှုတန်ဖိုးများ အပြောင်းအလဲများဆီသို့ ဦးတည်သွားမည်ဖြစ်သည်။

13. သိုလှောင်မှု

သိုလှောင်မှုအခြေအနေ: 2-8 ℃။

သိုလှောင်မှုကာလ: 12 လ။


  • ယခင်-
  • နောက်တစ်ခု:

  • သင့်စာကို ဤနေရာတွင် ရေးပြီး ကျွန်ုပ်တို့ထံ ပေးပို့ပါ။