прадукт

Набор для канкурэнтнага імунаферментнага аналізу для колькаснага аналізу флумехіну

Кароткае апісанне:

Флумеквін з'яўляецца членам антыбактэрыйнага прэпарата хіналонаў, які выкарыстоўваецца ў якасці вельмі важнага супрацьінфекцыйнага сродку ў клінічнай ветэрынарыі і водных прадуктах дзякуючы яго шырокаму спектру дзеяння, высокай эфектыўнасці, нізкай таксічнасці і моцнаму пранікненню ў тканіны.Ён таксама выкарыстоўваецца для лячэння захворванняў, прафілактыкі і стымулявання росту.Таму што гэта можа прывесці да ўстойлівасці да лекаў і патэнцыйнай канцэрагеннасці, высокая мяжа якой у тканінах жывёл была прадпісана ў ЕС, Японіі (высокая мяжа складае 100 частак на мільярд у ЕС).

У цяперашні час спектрафлюорометр, ELISA і HPLC з'яўляюцца асноўнымі метадамі выяўлення рэшткаў флумехіну, а ELISA з'яўляецца звычайным метадам з-за высокай адчувальнасці і прастаты ў выкарыстанні.


Дэталь прадукту

Тэгі прадукту

Прынцып тэсту

Гэты набор заснаваны на тэхналогіі непрамога канкурэнтнага ІФА.Лункі мікратытратара пакрытыя спалучальным антыгенам.Флумехінастатак ва ўзоры канкуруе з антыгенам, пакрытым на мікратытрацыйнай пласціне, за антыцелы.Пасля дадання пазначаных ферментам анты-антыцелаў для адлюстравання колеру выкарыстоўваецца субстрат TMB.Паглынанне ўзору адмоўна звязана з утрыманнем у ім тэтрацыкліну. Пасля параўнання са стандартнай крывой, памножанай на кратнае развядзенне, можна вылічыць колькасць рэшткаў флумехіна ў пробе.

Прыкладанні

Гэты набор можна выкарыстоўваць для колькаснага і якаснага аналізу рэшткаў флумехіну ў мёдзе.

Крыжаваныя рэакцыі

Флумеквін …………………..……………………… 100%

 

Неабходныя матэрыялы

Абсталяванне

┅┅Спектрафатометр мікратытрацыйнай пласціны (450 нм/630 нм)

┅┅Гамагенізатар або стомахер

┅┅Шэйкер

┅┅Віхравы міксер

┅┅Цэнтрыфуга

┅┅Аналітычныя вагі (індуктыўнасць: 0,01 г)

┅┅Градуяваная піпетка: 15 мл

┅┅Гумовая піпетка

┅┅Прабірка для цэнтрыфугі з полістыролу: 15 мл, 50 мл

┅┅Шкляная прабірка: 10 мл

┅┅Мікрапіпеткі: 20-200 мл, 100-10000 мл,

250 мл - мультипипетка

Рэагенты

┅┅н-гексан (AR)

┅┅Метыленхларыд (AR)

┅┅Ацэтанітрыл (AR)

┅┅Дэіянізаваная вада

----- Канцэнтраваная саляная кіслата (AR)

 

Камплектуючыя

● Планшэт для мікратытрацыі з 96 лункамі, пакрытым антыгенам

● Стандартныя растворы (6 бутэлек × 1 мл/бутэлька)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Стандартны кантроль высокай канцэнтрацыі: (1 мл/бутэлька)

…………………………………………………......100 частак на мільярд

● Ферментны кан'югат 12 мл………………………... чырвоны каўпачок

● Раствор антыцелаў 7 мл …………..……..….…..зялёны каўпачок

● Раствор А 7 мл………………………..………..белы каўпачок

● Раствор B 7 мл …………….…………..………… чырвоны каўпачок

● Стоп-раствор 7 мл ……………………..………жоўты каўпачок

● 20X Канцэнтраваны раствор для мыцця 40 мл

………………………………………..…..празрысты каўпак

● Раствор для экстракцыі 2X 50 мл…………………… сіняя вечка

 

Падрыхтоўка рэагентаў

7.1 Проба мёду

Раствор 1: 0,2 М раствор салянай кіслаты

Вага 41,5 мл. Канцэнтраваная саляная кіслата, разбавіць дэіянізаванай вадой да 500 мл.

Рашэнне 2: раствор для прамывання

Развядзіце канцэнтраваны раствор для прамывання дэіянізаванай вадой у аб'ёмных суадносінах 1:19, які будзе выкарыстоўвацца для прамывання пласцін.разведзены раствор можна захоўваць пры тэмпературы 4 ℃ на працягу 1 месяца.

Рашэнне3: раствор экстракцыі

Развядзіце 2× канцэнтраваны экстракцыйны раствор дэіянізаванай вадой у аб'ёмным суадносінах 1:1 (або ў залежнасці ад патрабаванняў), які будзе выкарыстоўвацца для экстракцыі ўзору.Гэты разведзены раствор можна захоўваць на працягу 1 месяца пры тэмпературы 4 ℃.

Падрыхтоўка ўзораў

8.1 Заўвага і меры засцярогі для карыстальнікаў перад эксплуатацыяй

(a) Калі ласка, выкарыстоўвайце аднаразовыя наканечнікі ў працэсе эксперыменту і змяняйце наканечнікі, калі паглынаеце іншы рэагент.

(b) Пераканайцеся, што ўсе эксперыментальныя інструменты чыстыя, інакш гэта паўплывае на вынік аналізу.

8.2Проба мёду

----- Узважце 2 г ± 0,05 г пробы мёду ў 50-мл полістырольную цэнтрыфужную прабірку,

-----Дадайце 2 мл 0,2 М раствора салянай кіслаты (Раствор 1), змяшайце, каб цалкам змяшаць, затым дадайце 8 мл хларыду метылену, падтрасіце шейкерам на працягу 5 хвілін для поўнага растварэння;

----- Цэнтрыфуга на працягу 10 хвілін, не менш за 3000 г пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃);

-----Выдаліце ​​надосадочную фазу, набярыце 2 мл арганічнага раствора субстрата ў шкляную прабірку на 10 мл. Высушыце субстрат на вадзяной лазні з патокам азоту (50-60 ℃)

-----Дадаць 1 мл н-гексана, змяшаць на вортексе на працягу 30 секунд, затым дадаць 1 мл раствора для экстракцыі (раствор 3), зноў змяшаць на вортэксе на працягу 1 хвіліны.Цэнтрыфуга на працягу 5 хвілін, не менш за 3000 г пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃);

-----Выдаліце ​​​​фазу надосадочнай вадкасці, вазьміце 50 мл для аналізу;

9. Працэс аналізу

9.1 Заўвага перад аналізам

9.1.1 Пераканайцеся, што ўсе рэагенты і мікралункі маюць пакаёвую тэмпературу (20-25 ℃).

9.1.2 Вярніце ўсе астатнія рэагенты да 2-8 ℃ адразу пасля выкарыстання.

9.1.3 Правільнае прамыванне мікралунак з'яўляецца важным этапам у працэсе аналізу;гэта з'яўляецца жыццёва важным фактарам паўторнасці аналізу ELISA.

9.1.4 Пазбягайце святла і накрывайце мікралункі падчас інкубацыі.

9.2 Этапы аналізу

9.2.1 Дастаньце ўсе рэагенты пры пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃) больш чым на 30 хвілін, перад выкарыстаннем гамагенізуйце.

9.2.2 Дастаньце неабходныя мікралункі і неадкладна вярніце астатнія ў пакет на маланкі пры тэмпературы 2-8 ℃.

9.2.3. Перад выкарыстаннем разведзены раствор для прамывання трэба нагрэць да пакаёвай тэмпературы.

9.2.4нумар:Пранумаруйце кожную пазіцыю мікралункі, і ўсе стандарты і ўзоры павінны быць праведзены ў двух экземплярах.Запішыце пазіцыі стандартаў і ўзораў.

9.2.5Дадаць стандартны раствор/узор:Дадайце 50 мкл стандартнага раствора або падрыхтаванага ўзору ў адпаведныя лункі.Дадайце 50 мкл раствора антыцелаў.Акуратна змяшайце, падтрасаючы пласціну ўручную, і інкубуйце 30 хвілін пры 25 ℃ пад вечкам.

9.2.6мыць:Акуратна зніміце вечка, ачысціце вадкасць з лунак і прамыйце мікралункі 250 мкл разведзенага прамыўнога раствора (раствор 2) з інтэрвалам у 10 секунд 4-5 разоў.Убярыце рэшткі вады ўбіраючай паперай (астатнія бурбалкі паветра можна выдаліць нявыкарыстаным наканечнікам).

9.2.8.Кан'югат фермента:Дадайце 100 мл раствора ферментнага кан'югата ў кожную лунку, асцярожна змяшайце, падтрасаючы пласціну ўручную, і інкубуйце 30 хвілін пры 25 ℃ пад вечкам.Паўтарыце этап мыцця яшчэ раз.

9.2.8Афарбоўка:Дадайце 50 мкл раствора A і 50 мкл раствора B у кожную лунку.Акуратна змяшайце, падтрасаючы пласціну ўручную, і інкубуйце 15 хвілін пры 25 ℃ пад вечкам (гл. 12.8).

9.2.9Мера:Дадайце 50 мкл стоп-раствора ў кожную лунку.Асцярожна змяшайце, падтрасаючы пласціну ўручную, і вымерайце паглынанне пры 450 нм у параўнанні з пустым паветрам (рэкамендуецца вымяраць з падвойнай даўжынёй хвалі 450/630 нм. Прачытайце вынік на працягу 5 хвілін пасля дадання стоп-раствора. ) (Мы таксама можам вымераць зрокам без прыпынку, коратка прыбора ELIASA)

Вынікі

10.1 Працэнтнае паглынанне

Сярэднія значэнні значэнняў абсорбцыі, атрыманыя для стандартаў і ўзораў, дзеляць на значэнне абсорбцыі першага стандарту (нулявога стандарту) і памнажаюць на 100%.Такім чынам, нулявы стандарт робіцца роўным 100%, а значэнні абсорбцыі прыведзены ў працэнтах.

Абсорбцыя (%) = B/B0 × 100%

B ——стандарт паглынання (або ўзор)

B0 ——нулявы стандарт абсорбцыі

10.2 Стандартная крывая

Каб пабудаваць стандартную крывую: па восі y адкладзіце значэнне паглынання стандартаў, а па восі х - паўлагарыфмічную канцэнтрацыю стандартнага раствора флумехіну (ppb).

---флумехінканцэнтрацыя кожнага ўзору (ppb), якую можна прачытаць з калібравальнай крывой, памнажаецца на адпаведнае кратнае развядзенне кожнага наступнага ўзору, і атрымліваецца фактычная канцэнтрацыя ўзору.

Для апрацоўкі дадзеных набораў ІФА распрацавана спецыяльнае праграмнае забеспячэнне, якое можа быць прадастаўлена па запыце.

11. Чуласць, дакладнасць і дакладнасць

Тэст на адчувальнасць:0,3 частак на мільярд

Каэфіцыент развядзення пробы мёду: 2

Мяжа выяўлення

Проба мёду ------------------------------------------------- -1ppb

Дакладнасць

Проба мёду -------------------------------------------------- 90±20 %

Дакладнасць

Каэфіцыент варыяцыі набору ІФА менш за 10%.

12. Заўвага

12.1 Сярэднія значэнні значэнняў абсорбцыі, атрыманыя для стандартаў і ўзораў, будуць зніжаны, калі рэагенты і ўзоры не былі даведзены да пакаёвай тэмпературы (20-25 ℃).

12.2 Не дазваляйце мікралункам высыхаць паміж крокамі, каб пазбегнуць няўдалага паўтарэння, і выконвайце наступны крок адразу пасля таго, як пастукаеце па трымальніку мікралунак.

12.3.Гамагенізуйце кожны рэагент перад выкарыстаннем.

12.4.Трымайце скуру далей ад стоп-раствора, бо гэта 2M H2SO4рашэнне.

12.5 Не выкарыстоўвайце састарэлыя наборы.Не мяняйце рэагенты розных партый, бо гэта прывядзе да зніжэння адчувальнасці.

12.6 Умовы захоўвання:

Захоўвайце наборы ІФА пры тэмпературы 2-8 ℃, не замарожвайце.Запячатайце пласціны з мікралункамі. Пазбягайце прамых сонечных прамянёў падчас усіх інкубацый.Рэкамендуецца накрываць мікратытрацыйныя пласціны.

12.7 Прыкметы таго, што рэагенты сапсуюцца:

Ад раствора субстрата варта адмовіцца, калі ён афарбуецца.

Рэагенты могуць сапсавацца, калі значэнне паглынання (450/630 нм) нулявога стандарту менш за 0,5 (A450 нм <0,5).

12.8 Рэакцыі афарбоўвання патрабуецца 15 хвілін пасля дадання раствора А і раствора В. Вы можаце падоўжыць час інкубацыі ад 20 хвілін да больш, калі колер занадта светлы для вызначэння.Ніколі не перавышайце 25 хвілін, Наадварот, скараціце час інкубацыі належным чынам.

12.9 Аптымальная тэмпература рэакцыі - 25 ℃.Больш высокая або больш нізкая тэмпература прывядзе да змены значэнняў адчувальнасці і паглынання.

13. Захоўванне

Умовы захоўвання: 2-8 ℃.

Тэрмін захоўвання: 12 месяцаў.


  • Папярэдняя:
  • далей:

  • Напішыце тут сваё паведамленне і адпраўце яго нам