продукт

Test Principle

Бул комплект кыйыр атаандаштык ELISA технологиясына негизделген.Микротитр скважиналары бириктирүүчү антиген менен капталган.Flumequineүлгүдөгү калдык антитело үчүн микротитр пластинкасында капталган антиген менен атаандашат.Антитело менен белгиленген энзим кошулгандан кийин, түстү көрсөтүү үчүн TMB субстраты колдонулат.Үлгүнүн абсорбциясы андагы тетрациклинге терс байланыштуу, Стандарттык ийри сызыгы менен салыштырып, суюлтулган эсеге көбөйтүлгөндөн кийин, үлгүдөгү флюмекин калдыктарынын санын эсептөөгө болот.

Тиркемелер

Бул комплект балдагы флумекин калдыктарынын сандык жана сапаттык анализинде колдонулушу мүмкүн.

Кайчылаш реакциялар

Flumequine ……………………………………………… 100%

Талап кылынган материалдар

Жабдуулар

┅┅Микротитр плитасы спектрофотометри (450нм/630нм)

┅┅Гомогенизатор же ашказан

┅┅Шайкер

┅┅Vortex аралаштыргыч

┅┅Центрифуга

┅┅Аналитикалык баланс (индуктивдүүлүк: 0,01г)

┅┅Бүтүргөн пипетка: 15мл

┅┅Резина пипетка лампочкасы

┅┅Полистиролдук центрифуга түтүгү: 15мл, 50мл

┅┅Айнек пробирка: 10мл

┅┅Микропипеттер: 20мл-200мл, 100мл -10000мл,

250 мл - мультипипетка

Реагенттер

┅┅n-гексан(AR)

┅┅метилен хлориди (AR)

┅┅Ацетонитрил (AR)

┅┅Деионизацияланган суу

----- Концентрленген туз кислотасы (AR)

Комплекттин компоненттери

● Антиген менен капталган 96 көзөнөктүү микротитрлик плита

● Стандарттык эритмелер (6 бөтөлкө×1 мл/бөтөлкө)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Жогорку концентрациядагы стандарттык башкаруу:(1мл/бөтөлкө)

……………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml……………………… кызыл капкак

● Антитело эритмеси 7мл …………..………….…..жашыл капкак

● Эритме А 7мл………………………..………..ак капкак

● Б эритмеси 7мл …………….…………..………… кызыл калпак

● Токтотуу эритмеси 7мл ……………………………………сары капкак

● 20XКонцентрленген жуу эритмеси 40мл

……………………………………………..тунук капкак

●2X Экстракция эритмеси 50мл…………………… көк капкак

Реагенттерди даярдоо

7.1 Балдын үлгүсү

1-чечим: 0,2 М туз кислотасы эритмеси

Салмагы 41,5 мл Концентрленген туз кислотасы, 500 мл чейин деионизацияланган суу менен суюлтулган.

Чечим 2: Эритме жуу

Концентрленген жуугуч эритмени 1:19 көлөмдүк катышта деионизацияланган суу менен суюлтуңуз, ал плиталарды жуу үчүн колдонулат.суюлтулган эритмени 4°С температурада 1 ай сактаса болот.

Чечим3: экстракция чечими

2 × концентрацияланган экстракция эритмени деионизацияланган суу менен 1:1 көлөмдөгү (же талапка жараша) суюлтуңуз, ал үлгү алуу үчүн колдонулат.Бул суюлтулган эритмени 4℃ температурада 1 ай сактаса болот.

Үлгү даярдоо

8.1 Пайдалануучулар үчүн эскертүүлөр жана алдын алуу чаралары

(a) Сураныч, эксперимент процессинде бир жолку кеңештерди колдонуңуз жана башка реагентти сиңиргенде учтарды өзгөртүңүз.

(b) Бардык эксперименталдык аспаптардын таза экенин текшериңиз, антпесе ал анализдин натыйжасына таасирин тийгизет.

8.2Бал үлгүсү

----- 2 г ± 0,05 г бал үлгүсүн 50 мл полистирол центрифугасынын түтүкчөсүнө таразалаңыз,

----- 2мл 0,2 М туз кислотасынын эритмесин (1-эритинди) кошуп, аны толугу менен аралаштыруу үчүн куюп, андан кийин 8мл метилен хлоридди кошуп, толук эриши үчүн 5мин чайкап чайкаңыз;

----- 10 мүнөт центрифугада, бөлмө температурасында (20-25℃) жок дегенде 3000г;

----- Супернатантты алып салыңыз, 10 мл айнек түтүккө 2 мл субстрат органикалык эритмесин алыңыз. субстанцияны азот агымынын (50-60 ℃) суу ваннасында кургатыңыз.

----- 1 мл н-гексан кошуп, 30 секунд куюп, андан кийин 1 мл экстракция эритмесин (3 эритме) кошуп, 1 мүнөткө кайра айлантыңыз.5 мүнөт центрифугалоо, бөлмө температурасында (20-25℃) жок дегенде 3000г;

----- Supernatant фазасын алып салыңыз, анализ үчүн 50мл алыңыз;

9. Анализ процесси

9.1 Талдоодон мурун эскертүү

9.1.1 Бардык реагенттер жана микроуюктар бөлмө температурасында (20-25℃) болушун текшериңиз.

9.1.2 Калган реагенттерди колдонгондон кийин дароо 2-8 ℃ чейин кайтарыңыз.

9.1.3 Микрокудуктарды туура жуу - анализдөө процессиндеги маанилүү кадам;бул ELISA анализинин кайталануусунун маанилүү фактору.

9.1.4 Инкубация учурунда жарыктан алыс болуңуз жана микроуюктарды жаап коюңуз.

9.2 Талдоо кадамдары

9.2.1 Бардык реагенттерди бөлмө температурасында (20-25℃) 30 мүнөттөн ашык убакытка чыгарыңыз, колдонуудан мурун гомогенизациялаңыз.

9.2.2 Керектүү микро кудуктарды алып чыгып, калганын дароо 2-8℃ температурада сыдырма баштыкка салып коюңуз.

9.2.3 Суюлтулган жуугуч эритмени колдонуудан мурун бөлмө температурасында кайра жылытуу керек.

9.2.4Номер:Ар бир микрокудуктун абалын номерлөө жана бардык стандарттар жана үлгүлөр эки нускада иштетилиши керек.Стандарттарды жана үлгүлөрдү позицияларды жазыңыз.

9.2.5Стандарттык чечимди/үлгүнү кошуу:Тиешелүү скважиналарга 50 мкл стандарттуу эритмени же даярдалган үлгүнү кошуңуз.50мл антитело эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана капкагы менен 25 ℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз.

9.2.6Жуу:Капкакты акырын алып салыңыз жана скважиналардан суюктукту тазалаңыз жана микро тешиктерди 250 мкл суюлтулган жуу эритмеси (2-эритме) менен 10 секунд аралыкта 4-5 жолу чайкаңыз.Калган сууну соргуч кагаз менен сиңирип алыңыз (калган аба көбүкчөсүн пайдаланылбаган учу менен жок кылууга болот).

9.2.8.Фермент конъюгаты:Ар бир кудукка 100 мл ферменттин конъюгат эритмесин кошуп, пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана капкагы менен 25 ℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз.Жуу кадамын дагы бир жолу кайталаңыз.

9.2.8Түс:Ар бир кудукка 50мкл А эритмесин жана 50мл Б эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап акырын аралаштырыңыз жана капкагын жаап 25℃ температурада 15 мүнөт инкубациялаңыз (12.8 караңыз).

9.2.9Өлчөм:Ар бир скважинага 50 мкл токтотуу эритмесин кошуңуз.Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана аба бланкына карата 450нм абсорбенцияны өлчөңүз (Бул 450/630нм кош толкун узундугу менен өлчөө сунушталат. Токтотуу эритмеси кошулгандан кийин 5 мүнөттүн ичинде натыйжаны окуңуз. ) (Биз көрүү аркылуу да өлчөй алабыз. ELIASA инструментинин кыскача токтоосуз чечими)

Жыйынтыктар

10,1 пайыздык абсорбент

Стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбциялык маанилердин орточо маанилери биринчи эталондун (нөлдүк эталон) абсорбциялык маанисине бөлүнөт жана 100% көбөйтүлөт.Ошентип, нөлдүк стандарт 100% га барабар түзүлөт жана абсорбенттик маанилер пайыздар менен келтирилет.

Абсорбция (%) = B/B0 ×100%

B —— абсорбция стандарты (же үлгү)

В0 ——абсорбциянын нөл стандарты

10.2 Стандарттык ийри сызык

Стандарттык ийри сызыкты чийүү үчүн: Стандарттардын абсорбциялык маанисин y огу катары, флумекин эталондор эритмесинин (ppb) концентрациясынын жарым логарифмдик x огу катары алыңыз.

--- Theфлумекинкалибрлөө ийри сызыгынан окууга мүмкүн болгон ар бир үлгүнүн концентрациясы (ppb) ар бир кийинки үлгүнүн тиешелүү суюлтууга эселенген санына көбөйтүлөт жана үлгүнүн иш жүзүндөгү концентрациясы алынат.

ELISA комплекттеринин маалыматтарын кыскартуу үчүн атайын программалык камсыздоо иштелип чыккан, ал суроо боюнча берилиши мүмкүн.

11. Сезимталдуулук, тактык жана тактык

Сыноо сезгичтиги:0.3ppb

Бал үлгүсүн суюлтуу фактору: 2

Аныктоо чеги

Бал үлгүсү------------------------------------------------ -1ppb

Тактык

Бал үлгүсү --------------------------------------------- 90±20 %

Тактык

ELISA комплектинин вариация коэффициенти 10% дан аз.

12. Эскертүү

12.1 Эгерде реагенттер жана үлгүлөр бөлмө температурасына (20-25 ℃) чейин жөнгө салынбаса, стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбенттин орточо маанилери төмөндөйт.

12.2 Ийгиликсиз кайталанууга жол бербөө үчүн микро уячалардын кадамдардын ортосунда кургап кетишине жол бербеңиз жана микро кудук кармагычты таптагандан кийин дароо кийинки кадамды иштетиңиз.

12.3.Колдонуудан мурун ар бир реагентти гомогендөө.

12.4.Териңизди токтотуучу эритмеден алыс кармаңыз, анткени ал 2M H₂SO₄чечим.

12.5 Эскирген комплекттерди колдонбоңуз.Ар кандай партиялардагы реагенттерди алмаштырбаңыз, анткени ал сезгичтикти төмөндөтөт.

12.6 Сактоо абалы:

ELISA комплекттерин 2-8℃ температурада кармаңыз, тоңдурбаңыз.Микрокудуктун пластинкаларын мөөр басып, бардык инкубация учурунда күн нурунан сактаныңыз.Микротитрлик плиталарды жабуу сунушталат.

12.7 Реагенттердин начарлашына көрсөткүчтөр:

Субстрат эритмеси түстөрдү өзгөртсө, андан баш тартуу керек.

Эгерде нөлдүк стандарттын абсорбциялык мааниси (450/630нм) 0,5тен (A450nm＜0,5) аз болсо, реагенттер начар болушу мүмкүн.

12.8 А жана В эритмеси кошулгандан кийин түстүү реакцияга 15 мүнөт керектелет. Эгерде түс өтө ачык болсо, инкубациялоо убактысын 20 мүнөттөн көбүрөөк узарта аласыз.Эч качан 25 мүнөттөн ашпаңыз, тескерисинче, инкубация убактысын туура кыскартыңыз.

12.9 Оптималдуу реакция температурасы 25℃.Жогорку же төмөн температура сезгичтиктин жана абсорбенттик маанилердин өзгөрүшүнө алып келет.

13. Сактоо

Сактоо шарты: 2-8℃.

Сактоо мөөнөтү: 12 ай.