produit

Principe d'essai

Ce kit est basé sur la technologie ELISA indirecte compétitive.Les puits de microtitration sont recouverts d'antigène de couplage.Fluméquinele résidu dans l'échantillon entre en compétition avec l'antigène déposé sur la plaque de microtitration pour l'anticorps.Après l'ajout de l'anti-anticorps marqué par une enzyme, le substrat TMB est utilisé pour montrer la couleur.L'absorbance de l'échantillon est négativement liée à la tétracycline qu'il contient, après comparaison avec la courbe standard, multipliée par le multiple de dilution, la quantité de résidus de fluméquine dans l'échantillon peut être calculée.

Applications

Ce kit peut être utilisé dans l'analyse quantitative et qualitative des résidus de fluméquine dans le miel.

Réactions croisées

Fluméquine …………………..……………………………… 100%

Matériaux nécessaires

Équipements

┅┅Spectrophotomètre à plaque de microtitration (450nm/630nm)

┅┅Homogénéisateur ou estomac

┅┅ Agitateur

┅┅Mélangeur vortex

┅┅Centrifugeuse

┅┅Balance analytique (inductance : 0.01g)

┅┅Pipette graduée : 15ml

┅┅ Poire de pipette en caoutchouc

┅┅ Tube à centrifuger en polystyrène : 15 ml, 50 ml

┅┅ Tube à essai en verre : 10 ml

┅┅Micropipettes : 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Réactifs

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Chlorure de méthylène(AR)

┅┅Acétonitrile(AR)

┅┅Eau déminéralisée

----- Acide chlorhydrique concentré (AR)

Composants du kit

● Plaque de microtitration à 96 puits revêtus d'antigène

● Solutions standard (6 bouteilles × 1 ml/bouteille)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Contrôle standard à haute concentration : (1 ml/bouteille)

…………………………………………………………......100ppb

● Conjugué enzymatique 12ml………………………... bouchon rouge

● Solution d'anticorps 7ml …………..……..….…..bouchon vert

● Solution A 7ml……..…………………..………..bouchon blanc

● Solution B 7ml …………….…………..………… bouchon rouge

● Solution d'arrêt 7ml ……………………..………bouchon jaune

● 20X Solution de lavage concentrée 40 ml

………………………………………..…..bouchon transparent

●2X Solution d'extraction 50ml………………...… bouchon bleu

Préparation des réactifs

7.1 Échantillon de miel

Solution 1 : solution d'acide chlorhydrique 0,2 M

Poids 41,5 ml Acide chlorhydrique concentré, diluer avec de l'eau déminéralisée à 500 ml.

Solution 2 : solution de lavage

Diluer la solution de lavage concentrée avec de l'eau déionisée dans un rapport volumique de 1:19, qui sera utilisée pour laver les plaques.la solution diluée peut être stockée à 4℃ pendant 1 mois.

La solution3 : solution d'extraction

Diluer la solution d'extraction concentrée 2 × avec de l'eau déminéralisée dans le rapport volumique de 1:1 (ou selon les besoins), qui sera utilisée pour l'extraction de l'échantillon.Cette solution diluée se conserve 1 mois à 4℃.

Préparations d'échantillons

8.1 Avis et précautions pour les utilisateurs avant utilisation

(a) Veuillez utiliser des embouts uniques dans le processus d'expérience et changer les embouts lorsque vous absorbez un réactif différent.

(b) Assurez-vous que tous les instruments expérimentaux sont propres, sinon cela affectera le résultat du test.

8.2Échantillon de miel

----- Peser 2 g ± 0,05 g d'échantillon de miel dans un tube à centrifuger en polystyrène de 50 ml,

-----Ajouter 2 ml de solution d'acide chlorhydrique 0,2 M (Solution 1), vortexer pour mélanger complètement, puis ajouter 8 ml de chlorure de méthylène, agiter avec un agitateur pendant 5 minutes pour dissoudre complètement ;

-----Centrifuger pendant 10 min, au moins 3000g à température ambiante (20-25℃);

----- Retirez la phase surnageante, prenez 2 ml de la solution organique de substrat dans un tube en verre de 10 ml.

----- Ajouter 1 ml de n-hexane, vortexer pendant 30 secondes, puis ajouter 1 ml de solution d'extraction (solution 3), vortexer à nouveau pendant 1 min.Centrifuger pendant 5min, au moins 3000g à température ambiante (20-25℃);

-----Retirez la phase surnageante, prélevez 50 ml pour le dosage ;

9. Processus de dosage

9.1 Avis avant dosage

9.1.1 Assurez-vous que tous les réactifs et micropuits sont tous à température ambiante (20-25℃).

9.1.2 Remettez tous les autres réactifs à 2-8℃ immédiatement après utilisation.

9.1.3 Le lavage correct des micropuits est une étape importante du processus de dosage ;c'est le facteur essentiel de la répétitivité de l'analyse ELISA.

9.1.4 Eviter la lumière et couvrir les micropuits pendant l'incubation.

9.2 Étapes du dosage

9.2.1 Retirez tous les réactifs à température ambiante (20-25℃) pendant plus de 30 minutes, homogénéisez avant utilisation.

9.2.2 Sortez les micropuits nécessaires et remettez le reste dans le sac à fermeture éclair à 2-8℃ immédiatement.

9.2.3 La solution de lavage diluée doit être réchauffée à température ambiante avant utilisation.

9.2.4Nombre:Numérotez chaque position de micropuits et tous les étalons et échantillons doivent être analysés en double.Enregistrez les positions des étalons et des échantillons.

9.2.5Ajouter la solution standard/l'échantillon :Ajouter 50 µl de solution étalon ou d'échantillon préparé dans les puits correspondants.Ajouter 50 µl de solution d'anticorps.Mélangez doucement en secouant la plaque manuellement et incubez pendant 30 min à 25℃ avec couvercle.

9.2.6Laver:Retirez délicatement le couvercle et purifiez le liquide des puits et rincez les micropuits avec 250 µl de solution de lavage diluée (solution 2) à intervalle de 10 s pendant 4 à 5 fois.Absorbez l'eau résiduelle avec du papier absorbant (la bulle d'air restante peut être éliminée avec un embout non utilisé).

9.2.8.Conjugué enzymatique :Ajouter 100 ml de solution de conjugué enzymatique dans chaque puits, mélanger doucement en secouant la plaque manuellement et incuber pendant 30 minutes à 25 ℃ avec couvercle.Répétez l'étape de lavage à nouveau.

9.2.8Coloration:Ajouter 50 µl de solution A et 50 µl de solution B dans chaque puits.Mélanger doucement en secouant la plaque manuellement et incuber pendant 15 min à 25℃ avec couvercle (voir 12.8).

9.2.9Mesure:Ajouter 50 µl de solution d'arrêt dans chaque puits.Mélangez doucement en secouant la plaque manuellement et mesurez l'absorbance à 450 nm contre un blanc d'air (il est suggéré de mesurer avec la double longueur d'onde de 450/630 nm. Lisez le résultat dans les 5 minutes après l'ajout de la solution d'arrêt. ) (Nous pouvons également mesurer à vue sans solution d'arrêt en bref de l'instrument ELASA)

Résultats

10.1 Pourcentage d'absorbance

Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance obtenues pour les étalons et les échantillons sont divisées par la valeur d'absorbance du premier étalon (étalon zéro) et multipliées par 100 %.L'étalon zéro est ainsi rendu égal à 100 % et les valeurs d'absorbance sont indiquées en pourcentages.

Absorbance (%) = B/B0 ×100%

B ——étalon d'absorbance (ou échantillon)

B0 ——étalon zéro d'absorbance

10.2 Courbe standard

Pour tracer une courbe étalon : Prendre la valeur d'absorbance des étalons en axe y, semi-logarithmique de la concentration de la solution étalon de fluméquine (ppb) en axe x.

--- Lefluméquinela concentration de chaque échantillon (ppb), qui peut être lue à partir de la courbe d'étalonnage, est multipliée par le multiple de dilution correspondant de chaque échantillon suivi, et la concentration réelle de l'échantillon est obtenue.

Pour la réduction des données des kits ELISA, un logiciel spécial a été développé, qui peut être fourni sur demande.

11. Sensibilité, exactitude et précision

Sensibilité du test：0,3 ppb

Miel Facteur de dilution de l'échantillon : 2

Limite de détection

Échantillon de miel ------------------------------------------------ -1ppb

Précision

Échantillon de miel --------------------------------------------- 90±20 %

Précision

Le coefficient de variation du kit ELISA est inférieur à 10 %.

12. Avis

12.1 Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance obtenues pour les standards et les échantillons seront réduites si les réactifs et les échantillons n'ont pas été régulés à température ambiante (20-25℃).

12.2 Ne laissez pas les micropuits sécher entre les étapes pour éviter une répétition infructueuse et effectuez l'étape suivante immédiatement après avoir tapoté le support de micropuits.

12.3.Homogénéiser chaque réactif avant utilisation.

12.4.Gardez votre peau loin de la solution d'arrêt car c'est le 2M H₂SO₄la solution.

12.5 Ne pas utiliser les kits périmés.N'échangez pas les réactifs de différents lots, car cela diminuerait la sensibilité.

12.6 Conditions de stockage :

Gardez les kits ELISA à 2-8℃, ne pas congeler.Sceller les plaques de micropuits de repos Éviter la lumière directe du soleil pendant toutes les incubations.Il est recommandé de couvrir les plaques de microtitration.

12.7 Indications pour les réactifs qui se détériorent :

La solution de substrat doit être abandonnée si elle change de couleur.

Les réactifs peuvent devenir mauvais si la valeur d'absorbance (450/630nm) de l'étalon zéro est inférieure à 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 La réaction de coloration nécessite 15 minutes après l'ajout de la solution A et de la solution B. Et vous pouvez prolonger les plages de temps d'incubation de 20 minutes à plus si la couleur est trop claire pour être déterminée.Ne jamais dépasser 25min, au contraire raccourcir correctement le temps d'incubation.

12.9 La température de réaction optimale est de 25℃.Une température plus élevée ou plus basse entraînera des modifications des valeurs de sensibilité et d'absorbance.

13. Stockage

Condition de stockage : 2-8℃.

Durée de conservation : 12 mois.