produs

Principiul testului

Acest kit se bazează pe tehnologia ELISA indirect-competitivă.Godeurile de microtitrare sunt acoperite cu antigen de cuplare.Flumechinăreziduul din probă concurează cu antigenul acoperit pe placa de microtitrare pentru anticorp.După adăugarea de anticorpi marcați cu enzimă, substratul TMB este utilizat pentru a arăta culoarea.Absorbanța probei este legată negativ de reziduul de tetraciclină din ea, după compararea cu curba standard, înmulțită cu multiplu de diluție, se poate calcula cantitatea de reziduuri de flumechină din probă.

Aplicații

Acest kit poate fi utilizat în analiza cantitativă și calitativă a reziduurilor de flumechină din miere.

Reacții încrucișate

Flumechină …………………..……………………… 100%

Materiale necesare

Echipamente

┅┅Spectrofotometru cu placă de microtitrare (450nm/630nm)

┅┅Omogenizator sau stomacher

┅┅Agitator

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifugă

┅┅Balanta analitica (inductanta: 0,01g)

┅┅Pipetă gradată: 15ml

┅┅Bec pipetă din cauciuc

┅┅Tut de centrifuga din polistiren: 15ml, 50ml

┅┅Eprubetă din sticlă: 10ml

┅┅Micropipete: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multippette

Reactivi

┅┅n-hexan(AR)

┅┅Clorura de metilen (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Apă deionizată

-----Acid clorhidric concentrat (AR)

Componente kit

● Placă de microtitrare cu 96 de godeuri acoperite cu antigen

● Soluții standard (6 sticle × 1 ml/sticlă)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Control standard de concentrație ridicată: (1 ml/sticlă)

……………………………………………………………100 ppb

● Conjugat enzimatic 12ml……………... capac roșu

● Soluție de anticorpi 7ml …………..……..….…..capac verde

● Soluție A 7ml……..…………………..………..capac alb

● Soluție B 7ml …………….…………..………… capac roșu

● Soluție stop 7ml ……………………..………capac galben

● 20XSolutie de spalare concentrata 40ml

………………………………………..…..capac transparent

●2X Soluție de extracție 50ml……………………………… capac albastru

Prepararea Reactivilor

7.1 Probă de miere

Soluție 1 : soluție de acid clorhidric 0,2 M

Greutate 41,5 ml Acid clorhidric concentrat, diluat cu apă deionizată la 500 ml.

Soluția 2: Soluția de spălare

Se diluează soluția de spălare concentrată cu apă deionizată în raport de volum de 1:19, care va fi folosită pentru spălarea plăcilor.soluția diluată poate fi păstrată la 4℃ timp de 1 lună.

Soluţie3: soluție de extracție

Se diluează soluția de extracție concentrată 2x cu apă deionizată în raportul de volum de 1:1 (sau în funcție de cerință), care va fi utilizat pentru extracția probei.Această soluție diluată poate fi conservată timp de 1 lună la 4℃.

Prepararea probelor

8.1 Notă și precauții pentru utilizatori înainte de exploatare

(a) Vă rugăm să utilizați vârfuri unice în procesul de experiment și să schimbați vârfurile atunci când absorbiți reactiv diferit.

(b) Asigurați-vă că toate instrumentele experimentale sunt curate, altfel va afecta rezultatul testului.

8.2Mostra de miere

----- Se cântărește 2 g ± 0,05 g eșantion de miere într-un tub de centrifugă din polistiren de 50 ml,

----- Adăugați 2 ml soluție de acid clorhidric 0,2 M (Soluția 1), amestecați complet, apoi adăugați 8 ml clorură de metilen, agitați cu agitatorul timp de 5 minute pentru a se dizolva complet;

-----Centrifugați timp de 10 min, cel puțin 3000g la temperatura camerei (20-25℃);

-----Se îndepărtează faza de supernatant, se iau 2 ml de soluție organică substrat într-un tub de sticlă de 10 ml. Se usucă substarea sub baia de apă a fluxului de azot (50-60℃)

----- Adăugați 1 ml n-hexan, agitați timp de 30 de secunde, apoi adăugați 1 ml soluție de extracție (soluția 3), agitați din nou timp de 1 min.Se centrifugă timp de 5 minute, cel puțin 3000g la temperatura camerei (20-25℃);

-----Se îndepărtează faza de supernatant, se iau 50 ml pentru analiză;

9. Procesul de testare

9.1 Notificare înainte de analiză

9.1.1 Asigurați-vă că toți reactivii și microgodeurile sunt toate la temperatura camerei (20-25℃).

9.1.2 Readuceți toți restul reactivilor la 2-8℃ imediat după utilizare.

9.1.3 Spălarea corectă a microgodeurilor este un pas important în procesul de analiză;este factorul vital pentru repetitivitatea analizei ELISA.

9.1.4 Evitați lumina și acoperiți microgodeurile în timpul incubației.

9.2 Etape de testare

9.2.1 Scoateți toți reactivii la temperatura camerei (20-25℃) pentru mai mult de 30 de minute, omogenizați înainte de utilizare.

9.2.2 Scoateți microgodeurile necesare și returnați restul în punga cu fermoar la 2-8℃ imediat.

9.2.3 Soluția de spălare diluată trebuie reîncălzită pentru a fi la temperatura camerei înainte de utilizare.

9.2.4Număr:Numărați fiecare poziție a microgodeilor și toate standardele și probele ar trebui să fie executate în dublu exemplar.Înregistrați standardele și pozițiile mostrelor.

9.2.5Adăugați soluție/probă standard:Adăugați 50 µl de soluție standard sau de probă preparată în godeurile corespunzătoare.Adăugați 50 µl soluție de anticorpi.Se amestecă ușor agitând placa manual și se incubează timp de 30 de minute la 25℃ cu capac.

9.2.6Spalare:Îndepărtați capacul ușor și curățați lichidul din godeuri și clătiți microgodeurile cu 250 µl soluție de spălare diluată (soluția 2) la interval de 10 secunde de 4-5 ori.Se absoarbe apa reziduală cu hârtie absorbantă (bulla de aer rămasă poate fi eliminată cu vârful nefolosit).

9.2.8.Conjugat enzimatic:Adăugați 100 ml soluție de conjugat enzimatic în fiecare godeu, amestecați ușor agitând placa manual și incubați timp de 30 de minute la 25 ℃ cu capac.Repetați etapa de spălare din nou.

9.2.8Colorare:Se adaugă 50 µl soluție A și 50 µl soluție B în fiecare godeu.Se amestecă ușor agitând placa manual și se incubează timp de 15 minute la 25℃ cu capac (vezi 12.8).

9.2.9Măsura:Adăugați 50 µl de soluție stop în fiecare godeu.Se amestecă ușor agitând placa manual și se măsoară absorbanța la 450 nm față de un semifabricat de aer (se sugerează măsurarea cu lungimea de undă dublă de 450/630 nm. Citiți rezultatul în 5 minute după adăugarea soluției de oprire.) (Putem măsura și vizual. fără soluție de oprire în scurt timp cu instrumentul ELIASA)

Rezultate

10.1 Absorbanță procentuală

Valorile medii ale valorilor absorbanței obținute pentru standarde și probe se împart la valoarea absorbanței primului standard (standard zero) și se înmulțesc cu 100%.Standardul zero se face astfel egal cu 100% iar valorile absorbanței sunt exprimate în procente.

Absorbanța (%) = B/B0 × 100%

B ——standard de absorbție (sau eșantion)

B0 ——absorbanță zero standard

10.2 Curba standard

Pentru a trasa o curbă standard: Luați valoarea absorbanței standardelor ca axa y, semi-logaritmică a concentrației soluției standard de flumechină (ppb) ca axa x.

--- Celflumechinăconcentrația fiecărei probe (ppb), care poate fi citită din curba de calibrare, este înmulțită cu multiplu de diluție corespunzător fiecărei probe urmate și se obține concentrația reală a probei.

Pentru reducerea datelor din trusele ELISA, a fost dezvoltat un software special, care poate fi furnizat la cerere.

11. Sensibilitate, acuratețe și precizie

Testați sensibilitatea：0,3 ppb

Factor de diluare a probei de miere: 2

Limita detectiei

Mostra de miere------------------------------------------------ -1ppb

Precizie

Probă de miere -------------------------------------------- 90±20 %

Precizie

Coeficientul de variație al trusei ELISA este mai mic de 10%.

12. Observare

12.1 Valorile medii ale valorilor absorbantei obtinute pentru standarde si probe vor fi reduse daca reactivii si probele nu au fost reglate la temperatura camerei (20-25℃).

12.2 Nu lăsați microgodeurile să se usuce între pași pentru a evita repetitivitatea nereușită și operați următorul pas imediat după ce atingeți suportul pentru microgodeuri.

12.3.Omogenizați fiecare reactiv înainte de utilizare.

12.4.Țineți-vă pielea departe de soluția stop, deoarece este 2M H₂SO₄soluţie.

12.5 Nu utilizați kiturile învechite.Nu schimbați reactivii din diferite loturi, deoarece va scădea sensibilitatea.

12.6 Condiții de depozitare:

Păstrați kiturile ELISA la 2-8℃, nu le înghețați.Sigilați plăcile cu microgodeuri în repaus. Evitați lumina directă a soarelui în timpul tuturor incubațiilor.Se recomandă acoperirea plăcilor de microtitrare.

12.7 Indicații pentru deteriorarea reactivilor:

Soluția de substrat ar trebui abandonată dacă își schimbă culoarea.

Reactivii se pot înrăutăți dacă valoarea absorbanței (450/630nm) a standardului zero este mai mică de 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 Reacția de colorare are nevoie de 15 minute după adăugarea Soluției A și a Soluției B. Și puteți prelungi intervalul de timp de incubare de la 20 minute la mai mult dacă culoarea este prea deschisă pentru a fi determinată.Nu depășiți niciodată 25 de minute, Dimpotrivă, scurtați timpul de incubare în mod corespunzător.

12.9 Temperatura optimă de reacție este de 25℃.Temperatura mai mare sau mai scăzută va duce la modificări ale valorilor de sensibilitate și absorbanță.

13. Depozitare

Condiții de depozitare: 2-8℃.

Perioada de depozitare: 12 luni.