tuote

Testin periaate

Tämä sarja perustuu epäsuoraan kilpailevaan ELISA-tekniikkaan.Mikrotiitterikuopat on päällystetty kytkentäantigeenillä.Flumequinenäytteessä oleva jäännös kilpailee mikrotiitterilevylle päällystetyn antigeenin kanssa vasta-aineesta.Entsyymileimatun anti-vasta-aineen lisäämisen jälkeen TMB-substraattia käytetään värin näyttämiseen.Näytteen absorbanssi on negatiivisesti suhteessa siinä olevaan tetrasykliinijäännökseen, ja sen jälkeen, kun sitä on verrattu standardikäyrään, kerrottuna laimennuskertoimella, Flumequine-jäämän määrä näytteessä voidaan laskea.

Sovellukset

Tätä sarjaa voidaan käyttää hunajan flumekiinijäämien kvantitatiivisessa ja laadullisessa analyysissä.

Ristireaktiot

Flumequine ……………………………………………… 100 %

Tarvittavat materiaalit

Varusteet

┅┅Mikrotiitterilevyspektrofotometri (450nm/630nm)

┅┅Homogenisaattori tai Stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortex-sekoitin

┅┅Sentrifugi

┅┅Analyyttinen vaaka (induktanssi: 0,01g)

┅┅Astepipetti: 15 ml

┅┅Kumipipetin lamppu

┅┅Polystyreenisentrifugiputki: 15 ml, 50 ml

┅┅Lasinen koeputki: 10ml

┅┅Mikropipetit: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - monipipetti

Reagenssit

┅┅n-heksaani (AR)

┅┅metyleenikloridi (AR)

┅┅Asetonitriili (AR)

┅┅Deionisoitua vettä

----- Väkevä suolahappo (AR)

Sarjan komponentit

● Mikrotiitterilevy, jossa on 96 kuoppaa, päällystetty antigeenillä

● Vakioliuokset (6 pulloa × 1 ml/pullo)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Korkean pitoisuuden standardikontrolli: (1 ml/pullo)

………………………………………………………100 ppb

● Entsyymikonjugaatti 12 ml…………………………... punainen korkki

● Vasta-aineliuos 7 ml …………..……..….…..vihreä korkki

● Liuos A 7 ml…………………………..………..valkoinen korkki

● Liuos B 7 ml …………….…………..………… punainen korkki

● Pysäytysliuos 7 ml ………………………..………keltainen korkki

● 20X Konsentroitu pesuliuos 40ml

…………………………………………..…..läpinäkyvä korkki

●2X Uuttoliuos 50ml……………………… sininen korkki

Reagenssien valmistus

7.1 Hunajanäyte

Liuos 1: 0,2 M kloorivetyhappoliuos

Paino 41,5 ml Väkevä suolahappo, laimennetaan deionisoidulla vedellä 500 ml:ksi.

Ratkaisu 2: Pese liuos

Laimenna konsentroitu pesuliuos deionisoidulla vedellä tilavuussuhteessa 1:19, jota käytetään levyjen pesuun.laimennettua liuosta voidaan säilyttää 4 ℃:ssa 1 kuukauden ajan.

Ratkaisu3: uuttoliuos

Laimenna 2 × väkevä uuttoliuos deionisoidulla vedellä tilavuussuhteessa 1:1 (tai tarpeen mukaan), jota käytetään näytteen uuttamiseen.Tätä laimennettua liuosta voidaan säilyttää 1 kuukauden ajan 4 ℃:ssa.

Näytevalmisteet

8.1 Huomautus ja varotoimet käyttäjille ennen käyttöä

(a) Käytä kokeessa yksittäisiä kärkiä ja vaihda kärjet, kun imee eri reagenssia.

(b) Varmista, että kaikki koevälineet ovat puhtaita, muuten se vaikuttaa määritystulokseen.

8.2Hunaja näyte

----- Punnitaan 2 g ± 0,05 g hunajanäyte 50 ml:n polystyreenisentrifugiputkeen,

-----Lisää 2 ml 0,2 M suolahappoliuosta (liuos 1), sekoita vorteksilla, jotta se sekoittuu kokonaan, lisää sitten 8 ml metyleenikloridia, ravista ravistimella 5 minuuttia, jotta se liukenee kokonaan;

-----Sentrifugoi 10 minuuttia, vähintään 3000 g huoneenlämpötilassa (20-25 ℃);

-----Poista supernatanttifaasi, ota 2 ml substraatin orgaanista liuosta 10 ml:n lasiputkeen. kuivaa substaatti typpivirtauksen vesihauteessa (50-60 ℃)

-----Lisää 1 ml n-heksaania, vorteksoi 30 sekuntia, lisää sitten 1 ml uuttoliuosta (liuos 3) ja vorteksoi uudelleen 1 minuutin ajan.Sentrifugoi 5 minuuttia, vähintään 3000 g huoneenlämpötilassa (20-25 ℃);

-----Poista supernatanttifaasi, ota 50 ml määritystä varten;

9. Määritysprosessi

9.1 Huomautus ennen määritystä

9.1.1 Varmista, että kaikki reagenssit ja mikrokuopat ovat kaikki huoneenlämpöisiä (20-25 ℃).

9.1.2 Palauta kaikki loput reagenssit 2-8 ℃:seen välittömästi käytön jälkeen.

9.1.3 Mikrokuoppien oikea pesu on tärkeä vaihe määritysprosessissa.se on elintärkeä tekijä ELISA-analyysin toistuvuuden kannalta.

9.1.4 Vältä valoa ja peitä mikrokuopat inkuboinnin aikana.

9.2 Määritysvaiheet

9.2.1 Ota kaikki reagenssit pois huoneenlämmössä (20-25 ℃) yli 30 minuutin ajaksi, homogenisoi ennen käyttöä.

9.2.2 Ota tarvittavat mikrokuopat ulos ja palauta loput välittömästi vetoketjulliseen pussiin 2-8℃ lämpötilaan.

9.2.3 Laimennettu pesuliuos tulee lämmittää huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.

9.2.4Määrä:Numeroi jokainen mikrokuoppakohta ja kaikki standardit ja näytteet tulee suorittaa kahtena kappaleena.Kirjaa muistiin standardit ja näytepaikat.

9.2.5Lisää standardiliuos/näyte:Lisää 50 µl standardiliuosta tai valmistettua näytettä vastaaviin kuoppiin.Lisää 50 µl vasta-aineliuosta.Sekoita varovasti ravistamalla levyä käsin ja inkuboi 30 minuuttia 25 ℃:ssa kannen kanssa.

9.2.6Pestä:Poista kansi varovasti ja puhdista neste pois kuopista ja huuhtele mikrokuopat 250 µl:lla laimennettua pesuliuosta (liuos 2) 10 sekunnin välein 4-5 kertaa.Imeytä jäännösvesi imukykyisellä paperilla (jäljellä oleva ilmakupla voidaan poistaa käyttämättömällä kärjellä).

9.2.8.Entsyymikonjugaatti:Lisää 100 ml entsyymikonjugaattiliuosta jokaiseen kuoppaan, sekoita varovasti ravistamalla levyä käsin ja inkuboi 30 minuuttia 25 ℃:ssa kannen kanssa.Toista pesuvaihe uudelleen.

9.2.8Väri:Lisää 50 µl liuosta A ja 50 µl liuosta B kuhunkin kuoppaan.Sekoita varovasti ravistamalla levyä käsin ja inkuboi 15 minuuttia 25 ℃:ssa kannen kanssa (katso 12.8).

9.2.9Mitata:Lisää 50 µl pysäytysliuosta kuhunkin kuoppaan.Sekoita varovasti ravistamalla levyä manuaalisesti ja mittaa absorbanssi aallonpituudella 450 nm ilmaa vasten (suositus on mitata kaksoisaallonpituudella 450/630 nm. Lue tulos 5 minuutin kuluessa pysäytysliuoksen lisäämisestä.) (Voimme mitata myös näkökyvyn avulla. ilman pysäytysratkaisua ELIASA-laitteen lyhentämiseksi)

Tulokset

10.1 Absorbanssin prosenttiosuus

Standardeille ja näytteille saatujen absorbanssiarvojen keskiarvot jaetaan ensimmäisen standardin absorbanssiarvolla (nollastandardi) ja kerrotaan 100 %:lla.Nollastandardiksi tehdään näin ollen 100 % ja absorbanssiarvot ilmoitetaan prosentteina.

Absorbanssi (%) = B/B0 × 100 %

B - absorbanssistandardi (tai näyte)

B0 ——absorbanssin nollastandardi

10.2 Vakiokäyrä

Standardikäyrän piirtäminen: Otetaan standardien absorbanssiarvo y-akseliksi ja puolilogaritminen fluekviinistandardiliuoksen pitoisuuden (ppb) x-akseliksi.

--- Theflumequinekunkin näytteen konsentraatio (ppb), joka voidaan lukea kalibrointikäyrästä, kerrotaan kunkin seurattavan näytteen vastaavalla laimennuskertoimella, ja saadaan näytteen todellinen pitoisuus.

ELISA-sarjojen tietojen vähentämiseen on kehitetty erityinen ohjelmisto, joka voidaan toimittaa pyynnöstä.

11. Herkkyys, tarkkuus ja tarkkuus

Testaa herkkyyttä：0,3 ppb

Hunaja Näytteen laimennuskerroin: 2

Havaintoraja

Hunajanäyte------------------------------------------------- -1 ppb

Tarkkuus

Hunajanäyte --------------------------------------------- 90±20 %

Tarkkuus

ELISA-sarjan variaatiokerroin on alle 10 %.

12. Huomaa

12.1 Standardeille ja näytteille saatujen absorbanssiarvojen keskiarvot pienenevät, jos reagensseja ja näytteitä ei ole säädetty huoneenlämpötilaan (20-25℃).

12.2 Älä anna mikrokuoppien kuivua vaiheiden välillä epäonnistuneen toistumisen välttämiseksi ja käytä seuraavaa vaihetta välittömästi mikrokuoppien pidikkeen napautuksen jälkeen.

12.3.Homogenoi jokainen reagenssi ennen käyttöä.

12.4.Pidä ihosi poissa pysäytysliuoksesta, sillä se on 2M H₂SO₄ratkaisu.

12.5 Älä käytä vanhentuneita sarjoja.Älä vaihda eri erien reagensseja, sillä herkkyys laskee.

12.6 Säilytystila:

Säilytä ELISA-sarjat 2-8 ℃:ssa, älä jäädytä.Sulje mikrokuoppalevyt Vältä suoraa auringonvaloa kaikkien inkubaatioiden aikana.Mikrotiitterilevyjen peittämistä suositellaan.

12.7 Ohjeet reagenssien huonontumisesta:

Substraattiliuos tulee jättää käyttämättä, jos se värjäytyy.

Reagenssit voivat muuttua huonoiksi, jos nollastandardin absorbanssiarvo (450/630nm) on alle 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Väritysreaktio vaatii 15 minuuttia liuoksen A ja liuoksen B lisäämisen jälkeen. Voit myös pidentää inkubointiaikaa 20 minuutista pidemmälle, jos väri on liian vaalea määritettäväksi.Älä koskaan ylitä 25 minuuttia, päinvastoin, lyhennä inkubaatioaikaa kunnolla.

12.9 Optimaalinen reaktiolämpötila on 25 ℃.Korkeampi tai matalampi lämpötila johtaa herkkyys- ja absorbanssiarvojen muutoksiin.

13. Varastointi

Säilytystila: 2-8℃.

Varastointiaika: 12 kuukautta.