produkt

Testprincip

Detta kit är baserat på indirekt konkurrenskraftig ELISA-teknologi.Mikrotiterbrunnarna är belagda med kopplingsantigen.Flumequinerester i provet konkurrerar med antigenet belagt på mikrotiterplattan om antikroppen.Efter tillsats av enzymmärkt anti-antikropp används TMB-substrat för att visa färgen.Absorbansen av provet är negativt relaterat till det tetracyklin som finns i det, efter jämförelse med standardkurvan, multiplicerat med utspädningsmultipeln, kan restmängden Flumequine i provet beräknas.

Ansökningar

Detta kit kan användas i kvantitativ och kvalitativ analys av flumekinrester i honung.

Korsreaktioner

Flumequine …………………..……………………… 100 %

Material som krävs

Utrustning

┅┅Mikrotiterplattspektrofotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenisator eller stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Analytisk balans (induktans: 0,01g)

┅┅ Graderad pipett: 15 ml

┅┅Gummipipettlampa

┅┅Polystyrencentrifugrör: 15ml, 50ml

┅┅Provrör i glas：10ml

┅┅Mikropipetter: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipett

Reagenser

┅┅n-hexan(AR)

┅┅Metylenklorid (AR)

┅┅Acetonitril(AR)

┅┅Avjoniserat vatten

-----Koncentrerad saltsyra (AR)

Kitkomponenter

● Mikrotiterplatta med 96 brunnar belagd med antigen

● Standardlösningar (6 flaskor×1 ml/flaska)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Standardkontroll med hög koncentration: (1 ml/flaska)

…………………………………………………………………100 ppb

● Enzymkonjugat 12ml………………………... röd lock

● Antikroppslösning 7ml …………..……..….…..grönt lock

● Lösning A 7ml……..………………………………………..vitt lock

● Lösning B 7ml ………………….…………..………… röd lock

● Stopplösning 7ml …………………………..………gult lock

● 20XKoncentrerad tvättlösning 40ml

………………………………………………..…..transparent lock

●2X extraktionslösning 50ml………………………… blått lock

Reagensberedning

7.1 Honungsprov

Lösning 1: 0,2 M saltsyralösning

Vikt 41,5 ml Koncentrerad saltsyra, späd med avjoniserat vatten till 500 ml.

Lösning 2: Tvättlösning

Späd den koncentrerade tvättlösningen med avjoniserat vatten i volymförhållandet 1:19, som kommer att användas för att tvätta plattorna.den utspädda lösningen kan förvaras vid 4 ℃ i 1 månad.

Lösning3: extraktionslösning

Späd ut den 2xkoncentrerade extraktionslösningen med avjoniserat vatten i volymförhållandet 1:1 (eller beroende på behov), som kommer att användas för provextraktion.Denna utspädda lösning kan bevaras i 1 månad vid 4 ℃.

Provförberedelser

8.1 Meddelande och försiktighetsåtgärder för användarna före användning

(a) Använd engångsspetsar i experimentprocessen och byt spetsarna när du absorberar olika reagens.

(b) Se till att alla experimentella instrument är rena, annars kommer det att påverka analysresultatet.

8.2Honungsprov

-----Väg upp 2g±0,05g honungsprov i ett 50ml polystyrencentrifugrör,

-----Tillsätt 2 ml 0,2 M saltsyralösning (lösning 1), vortexa för att blanda det helt, tillsätt sedan 8 ml metylenklorid, skaka med skakapparat i 5 minuter för att lösas upp helt;

-----Centrifugera i 10 minuter, minst 3000 g vid rumstemperatur (20-25 ℃);

-----Ta bort supernatantfasen, ta 2 ml av substratets organiska lösning till ett 10 ml glasrör. Torka substaten under vattenbad av kväveflöde (50-60 ℃)

-----Tillsätt 1 ml n-hexan, vortexa i 30 sekunder, tillsätt sedan 1 ml extraktionslösning (lösning 3), vortexa igen i 1 min.Centrifugera i 5 minuter, minst 3000 g vid rumstemperatur (20-25 ℃);

-----Ta bort supernatantfasen, ta 50 ml för analys;

9. Analysprocess

9.1 Meddelande före analys

9.1.1 Se till att alla reagenser och mikrobrunnar har rumstemperatur (20-25 ℃).

9.1.2 Återställ alla övriga reagenser till 2-8 ℃ omedelbart efter användning.

9.1.3 Att tvätta mikrobrunnarna korrekt är ett viktigt steg i analysprocessen;det är den avgörande faktorn för repetitiviteten av ELISA-analysen.

9.1.4 Undvik ljuset och täck över mikrobrunnarna under inkubationen.

9.2 Analyssteg

9.2.1 Ta ut alla reagenser vid rumstemperatur (20-25 ℃) i mer än 30 minuter, homogenisera före användning.

9.2.2 Ta ut de mikrobrunnar som behövs och lägg tillbaka resten i zip-lock-påsen vid 2-8 ℃ omedelbart.

9.2.3 Den utspädda tvättlösningen bör återuppvärmas till rumstemperatur före användning.

9.2.4Siffra:Numrera varje mikrobrunnsposition och alla standarder och prover bör köras i duplikat.Anteckna standarder och provpositioner.

9.2.5Lägg till standardlösning/prov:Tillsätt 50 µl standardlösning eller preparerat prov till motsvarande brunnar.Tillsätt 50 µl antikroppslösning.Blanda försiktigt genom att skaka plattan manuellt och inkubera i 30 minuter vid 25 ℃ med lock.

9.2.6Tvätta:Ta försiktigt bort locket och rengör vätskan ur brunnarna och skölj mikrobrunnarna med 250 µl utspädd tvättlösning (lösning 2) med 10s intervall i 4-5 gånger.Absorbera restvattnet med absorberande papper (resten luftbubbla kan elimineras med oanvänd spets).

9.2.8.Enzymkonjugat:Tillsätt enzymkonjugatlösning 100 ml till varje brunn, blanda försiktigt genom att skaka plattan manuellt och inkubera i 30 minuter vid 25 ℃ med lock.Upprepa tvättsteget igen.

9.2.8Färgsättning:Tillsätt 50 µl lösning A och 50 µl lösning B till varje brunn.Blanda försiktigt genom att skaka plattan manuellt och inkubera i 15 minuter vid 25 ℃ med lock (se 12.8).

9.2.9Mäta:Tillsätt 50 µl stopplösningen till varje brunn.Blanda försiktigt genom att skaka plattan manuellt och mät absorbansen vid 450 nm mot ett luftblindmaterial (Det rekommenderas att mäta med den dubbla våglängden 450/630 nm. Läs resultatet inom 5 minuter efter tillsats av stopplösning. ) (Vi kan också mäta genom synen. utan stopplösning kortare än ELIASA-instrumentet)

Resultat

10.1 Procentuell absorbans

Medelvärdena för absorbansvärdena som erhållits för standarderna och proverna divideras med absorbansvärdet för den första standarden (nollstandard) och multipliceras med 100 %.Nollstandarden görs således lika med 100 % och absorbansvärdena anges i procent.

Absorbans (%) = B/B0 ×100 %

B ——absorbansstandard (eller prov)

B0 ——absorbans noll standard

10.2 Standardkurva

För att rita en standardkurva: Ta absorbansvärdet för standarder som y-axel, semilogaritmisk av koncentrationen av flumequine standardlösning (ppb) som x-axel.

--- Denflumequinekoncentrationen av varje prov (ppb), som kan avläsas från kalibreringskurvan, multipliceras med motsvarande utspädningsmultipel för varje prov som följs, och den faktiska koncentrationen av provet erhålls.

För datareduktion av ELISA-kiten har speciell programvara utvecklats, som kan tillhandahållas på begäran.

11. Känslighet, noggrannhet och precision

Testa känslighet:0,3 ppb

Honungsprovs utspädningsfaktor: 2

Detektionsgräns

Honungsprov ---------------------------------------------------- -1 ppb

Noggrannhet

Honungsprov ---------------------------------------------------- 90±20 %

Precision

Variationskoefficienten för ELISA-kitet är mindre än 10 %.

12. Meddelande

12.1 Medelvärdena för absorbansvärdena som erhållits för standarderna och proverna kommer att reduceras om reagenserna och proverna inte har reglerats till rumstemperatur (20-25 ℃).

12.2 Låt inte mikrobrunnar torka mellan stegen för att undvika misslyckade upprepningar och kör nästa steg omedelbart efter att ha knackat på mikrobrunnshållaren.

12.3.Homogenisera varje reagens före användning.

12.4.Håll din hud borta från stopplösningen för det är 2M H₂SO₄lösning.

12.5 Använd inte kiten föråldrade.Byt inte ut reagenserna från olika partier, för det kommer att minska känsligheten.

12.6 Lagringsskick:

Förvara ELISA-kiten vid 2-8 ℃, frys inte.Försegla vila mikrobrunnsplattor Undvik rakt solljus under alla inkubationer.Det rekommenderas att täcka mikrotiterplattorna.

12.7 Indikationer på att reagenserna blir dåliga:

Substratlösning bör överges om den blir färgad.

Reagenserna kan bli dåliga om absorbansvärdet (450/630nm) för nollstandarden är mindre än 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Färgningsreaktionen behöver 15 minuter efter tillsats av lösning A och lösning B. Och du kan förlänga inkubationstiden från 20 minuter till mer om färgen är för ljus för att kunna bestämmas.Överskrid aldrig 25min, tvärtom, förkorta inkubationstiden ordentligt.

12.9 Den optimala reaktionstemperaturen är 25℃.Högre eller lägre temperatur kommer att leda till förändringar av känslighets- och absorbansvärden.

13. Förvaring

Lagringsskick: 2-8℃.

Lagringstid: 12 månader.