produkt

Testprinsipp

Dette settet er basert på indirekte konkurrerende ELISA-teknologi.Mikrotiterbrønnene er belagt med koblingsantigen.Flumequinerester i prøven konkurrerer med antigenet belagt på mikrotiterplaten om antistoffet.Etter tilsetning av enzymmerket anti-antistoff, brukes TMB-substrat for å vise fargen.Absorbansen til prøven er negativt relatert til tetracyklinet i den, etter sammenligning med standardkurven, multiplisert med fortynningsmultiplen, kan restmengden av Flumequine i prøven beregnes.

applikasjoner

Dette settet kan brukes i kvantitativ og kvalitativ analyse av flumekinrester i honning.

Kryssreaksjoner

Flumequine …………………..……………………………… 100 %

Materialer som kreves

Utstyr

┅┅Mikrotiterplatespektrofotometer (450nm/630nm)

┅┅ Homogenisator eller magemiddel

┅┅Shaker

┅┅Vortex mikser

┅┅Sentrifuger

┅┅Analytisk balanse (induktans: 0,01g)

┅┅Dosert pipette: 15ml

┅┅Gummipipettepære

┅┅Polystyrensentrifugerør: 15ml, 50ml

┅┅Reagensrør i glass：10ml

┅┅Mikropipetter: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Reagenser

┅┅n-heksan (AR)

┅┅Metylenklorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Avionisert vann

-----Konsentrert saltsyre (AR)

Kitkomponenter

● Mikrotiterplate med 96 brønner belagt med antigen

● Standardløsninger (6 flasker×1 ml/flaske)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Standardkontroll med høy konsentrasjon: (1 ml/flaske)

…………………………………………………………………100 ppb

● Enzymkonjugat 12ml………………………... rød hette

● Antistoffløsning 7ml …………..……..….…..grønn hette

● Løsning A 7ml……..………………………………………..hvit hette

● Løsning B 7ml ………………….…………..………… rød hette

● Stoppløsning 7ml …………………………..………gul kork

● 20XKonsentrert vaskeløsning 40ml

………………………………………..…..gjennomsiktig hette

●2X ekstraksjonsløsning 50ml………………………… blå hette

Forberedelse av reagenser

7.1 Honningprøve

Løsning 1 : 0,2 M saltsyreløsning

Vekt 41,5 ml Konsentrert saltsyre, fortynn med avionisert vann til 500 ml.

Løsning 2: Vaskeløsning

Fortynn den konsentrerte vaskeløsningen med avionisert vann i volumforholdet 1:19, som skal brukes til å vaske platene.den fortynnede løsningen kan lagres ved 4 ℃ i 1 måned.

Løsning3: ekstraksjonsløsning

Fortynn den 2×konsentrerte ekstraksjonsløsningen med avionisert vann i volumforholdet 1:1 (eller avhengig av behov), som vil bli brukt til prøveekstraksjon.Denne fortynnede løsningen kan lagres i 1 måned ved 4 ℃.

Prøveforberedelser

8.1 Merknad og forholdsregler for brukerne før bruk

(a) Vennligst bruk engangsspisser under eksperimentet, og bytt spissene når du absorberer forskjellige reagenser.

(b) Sørg for at alle eksperimentelle instrumenter er rene, ellers vil det påvirke analyseresultatet.

8.2Honningprøve

-----Vei 2g±0,05g honningprøve inn i et 50ml polystyren sentrifugerør,

-----Tilsett 2 ml 0,2 M saltsyreløsning (løsning 1), vortex for å blande det fullstendig, tilsett deretter 8 ml metylenklorid, rist med shaker i 5 minutter for å oppløses fullstendig;

----- Sentrifuger i 10 minutter, minst 3000 g ved romtemperatur (20-25 ℃);

-----Fjern supernatantfasen, ta 2 ml av den organiske substratløsningen til et 10 ml glassrør. tørk substaten under vannbad med nitrogenstrøm (50-60 ℃)

-----Tilsett 1 ml n-heksan, vortex i 30 sekunder, tilsett deretter 1 ml ekstraksjonsløsning (løsning 3), vortex igjen i 1 min.Sentrifuger i 5 minutter, minst 3000 g ved romtemperatur (20-25 ℃);

-----Fjern supernatantfasen, ta 50 ml for analyse;

9. Analyseprosess

9.1 Merknad før analyse

9.1.1 Sørg for at alle reagenser og mikrobrønner er i romtemperatur (20-25 ℃).

9.1.2 Sett alle de resterende reagensene tilbake til 2-8 ℃ umiddelbart etter bruk.

9.1.3 Å vaske mikrobrønnene riktig er et viktig trinn i analysen;det er den avgjørende faktoren for gjentakelsen av ELISA-analysen.

9.1.4 Unngå lyset og dekk til mikrobrønnene under inkubasjonen.

9.2 Analysetrinn

9.2.1 Ta ut alle reagenser ved romtemperatur (20-25 ℃) i mer enn 30 minutter, homogeniser før bruk.

9.2.2 Få ut de nødvendige mikrobrønnene og legg resten tilbake i zip-lock-posen ved 2-8 ℃ umiddelbart.

9.2.3 Den fortynnede vaskeløsningen bør varmes opp igjen til romtemperatur før bruk.

9.2.4Antall:Nummer hver mikrobrønnposisjon og alle standarder og prøver skal kjøres i duplikat.Registrer standardene og prøveposisjonene.

9.2.5Legg til standard løsning/prøve:Tilsett 50 µl standardløsning eller forberedt prøve til tilsvarende brønner.Tilsett 50 µl antistoffløsning.Bland forsiktig ved å riste platen manuelt og inkuber i 30 minutter ved 25 ℃ med lokk.

9.2.6Vask:Fjern dekselet forsiktig og rens væsken ut av brønnene og skyll mikrobrønnene med 250 µl fortynnet vaskeløsning (løsning 2) med intervaller på 10 sekunder i 4-5 ganger.Absorber gjenværende vann med absorberende papir (resten luftboble kan elimineres med ubrukt spiss).

9.2.8.Enzymkonjugat:Tilsett enzymkonjugatløsning 100 ml til hver brønn, bland forsiktig ved å riste platen manuelt og inkuber i 30 minutter ved 25 ℃ med lokk.Gjenta vasketrinnet igjen.

9.2.8Farge:Tilsett 50 µl løsning A og 50 µl løsning B til hver brønn.Bland forsiktig ved å riste platen manuelt og inkuber i 15 minutter ved 25 ℃ med deksel (se 12.8).

9.2.9Måle:Tilsett 50 µl stoppløsningen til hver brønn.Bland forsiktig ved å riste platen manuelt og mål absorbansen ved 450 nm mot et luftemne (Det er foreslått mål med dobbel bølgelengde på 450/630 nm. Les resultatet innen 5 minutter etter tilsetning av stoppløsning. ) (Vi kan også måle ved synet. uten stoppløsning med unntak av ELIASA-instrumentet)

Resultater

10.1 Prosentvis absorbans

Gjennomsnittsverdiene for absorbansverdiene oppnådd for standardene og prøvene er delt på absorbansverdien til den første standarden (nullstandard) og multiplisert med 100 %.Nullstandarden er dermed lik 100 % og absorbansverdiene er oppgitt i prosent.

Absorbans (%) = B/B0 ×100 %

B ——absorbansstandard (eller prøve)

B0 ——absorbans null standard

10.2 Standardkurve

For å tegne en standardkurve: Ta absorbansverdien til standarder som y-akse, semilogaritmisk av konsentrasjonen av flumequine-standardløsningen (ppb) som x-akse.

--- Denflumequinekonsentrasjonen av hver prøve (ppb), som kan leses fra kalibreringskurven, multipliseres med tilsvarende fortynningsmultippel for hver prøve som følges, og den faktiske konsentrasjonen av prøven oppnås.

For datareduksjon av ELISA-settene er det utviklet spesiell programvare som kan leveres på forespørsel.

11. Følsomhet, nøyaktighet og presisjon

Test følsomhet:0,3 ppb

Honningprøvefortynningsfaktor: 2

Deteksjonsgrense

Honningprøve------------------------------------------------- -1 ppb

Nøyaktighet

Honningprøve ---------------------------------------------------- 90±20 %

Presisjon

Variasjonskoeffisienten til ELISA-settet er mindre enn 10 %.

12. Merknad

12.1 Gjennomsnittsverdiene for absorbansverdiene oppnådd for standardene og prøvene vil bli redusert dersom reagensene og prøvene ikke er regulert til romtemperatur (20-25 ℃).

12.2 Ikke la mikrobrønnene tørke mellom trinnene for å unngå mislykkede repetisjoner og utfør neste trinn umiddelbart etter at du har banket på mikrobrønnholderen.

12.3.Homogeniser hver reagens før bruk.

12.4.Hold huden unna stoppløsningen, for det er 2M H₂SO₄løsning.

12.5 Ikke bruk settene utdatert.Ikke bytt ut reagensene til forskjellige partier, for det vil redusere følsomheten.

12.6 Lagringstilstand:

Hold ELISA-settene ved 2-8 ℃, ikke frys.Forsegl hvilemikrobrønnplater Unngå direkte sollys under alle inkubasjoner.Det anbefales å dekke til mikrotiterplatene.

12.7 Indikasjoner på at reagensene blir dårlige:

Substratløsningen bør forlates hvis den får farger.

Reagensene kan bli dårlige hvis absorbansverdien (450/630nm) for nullstandarden er mindre enn 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Fargingsreaksjonen trenger 15 minutter etter tilsetning av løsning A og løsning B. Og du kan forlenge inkubasjonstiden fra 20 minutter til mer hvis fargen er for lys til å kunne bestemmes.Overskrid aldri 25 minutter, tvert imot, forkort inkubasjonstiden skikkelig.

12.9 Den optimale reaksjonstemperaturen er 25 ℃.Høyere eller lavere temperatur vil føre til endringer i følsomhets- og absorbansverdier.

13. Oppbevaring

Lagringstilstand: 2-8 ℃.

Lagringstid: 12 måneder.