prodott

Prinċipju tat-Test

Dan il-kit huwa bbażat fuq teknoloġija ELISA kompetittiva indiretta.Il-bjar tal-mikrotiter huma miksija bl-antiġen tal-igganċjar.Flumequineresidwu fil-kampjun jikkompeti mal-antiġen miksi fuq il-pjanċa tal-mikrotiter għall-antikorp.Wara ż-żieda ta 'anti-antikorp immarkat b'enzima, is-sottostrat TMB jintuża biex juri l-kulur.L-assorbiment tal-kampjun huwa relatat b'mod negattiv mat-tetracycline li jirrisjedi fih, wara li jitqabbel mal-Kurva Standard, immultiplikat bil-multipli ta 'dilwizzjoni, il-kwantità tar-residwu ta' Flumequine fil-kampjun tista 'tiġi kkalkulata.

Applikazzjonijiet

Dan il-kit jista 'jintuża f'analiżi kwantitattiva u kwalitattiva tar-residwu tal-flumequine fl-għasel.

Reazzjonijiet inkroċjati

Flumequine …………………..……………………… 100%

Materjali Meħtieġa

Tagħmir

┅┅Spettrofotometru tal-pjanċa tal-mikrotiter (450nm/630nm)

┅┅Omoġenizzatur jew stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortex mixer

┅┅Centrifuge

┅┅Bilanċ analitiku (inductance: 0.01g)

┅┅Pipetta gradwata: 15ml

┅┅Bozza tal-pipetta tal-gomma

┅┅Tubu taċ-ċentrifuga tal-Polystyrene: 15ml, 50ml

┅┅Tubu tat-test tal-ħġieġ: 10ml

┅┅Mikropipetti: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Reaġenti

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Klorur tal-metilin (AR)

┅┅Aċetonitrile (AR)

┅┅Ilma dejonizzat

----- Aċidu idrokloriku kkonċentrat (AR)

Komponenti tal-Kit

● Pjanċa ta 'mikrotiter b'96 ħofra miksija bl-antiġen

● Soluzzjonijiet standard (6 fliexken × 1ml/flixkun)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Kontroll standard ta 'konċentrazzjoni għolja: (1ml/flixkun)

……………………………………………………………100ppb

● Konjugat ta' l-enżimi 12ml……………... għatu aħmar

● Soluzzjoni ta' antikorp 7ml …………..……..….…..tapp aħdar

● Soluzzjoni A 7ml……..…………………..………..tapp abjad

● Soluzzjoni B 7ml …………….…………..………… għatu aħmar

● Soluzzjoni ta' waqfien 7ml ……………………..………tapp isfar

● Soluzzjoni tal-ħasil 20XConcentrated 40ml

………………………………………..…..tapp trasparenti

●2X Soluzzjoni ta 'estrazzjoni 50ml……………………………… għatu blu

Preparazzjoni tar-reaġenti

7.1 Kampjun tal-għasel

Soluzzjoni 1: Soluzzjoni ta' aċidu idrokloriku 0.2 M

Piż 41.5ml Aċidu idrokloriku kkonċentrat, iddilwixxi b'ilma dejonizzat sa 500 ml.

Soluzzjoni 2: Soluzzjoni tal-ħasil

Iddilwa s-soluzzjoni tal-ħasil konċentrata b'ilma dejonizzat fil-proporzjon tal-volum ta '1:19, li se jintuża għall-ħasil tal-pjanċi.is-soluzzjoni dilwita tista 'tinħażen f'4℃ għal xahar.

Soluzzjoni3: soluzzjoni ta 'estrazzjoni

Iddilwa s-soluzzjoni ta 'estrazzjoni 2 × konċentrata b'ilma dejonizzat fir-razzjon tal-volum ta' 1:1 (jew jiddependi fuq il-ħtieġa), li se jintuża għall-estrazzjoni tal-kampjun.Din is-soluzzjoni dilwita tista 'tiġi kkonservata għal xahar f'4℃.

Preparazzjonijiet tal-Kampjuni

8.1 Avviż u prekawzjonijiet għall-utenti qabel l-operazzjoni

(a) Jekk jogħġbok uża ponot ta 'darba fil-proċess tal-esperiment, u ibdel il-ponot meta jassorbi reaġent differenti.

(b) Kun żgur li l-istrumenti sperimentali kollha huma nodfa, inkella jaffettwa r-riżultat tal-assaġġ.

8.2Kampjun tal-għasel

----- Iżen kampjun ta 'għasel 2g±0.05g f'tubu ċentrifugu tal-polistirene ta' 50ml,

-----Żid 2ml 0.2 M soluzzjoni ta 'aċidu idrokloriku (Soluzzjoni 1), vortex biex tħallat kompletament, imbagħad żid 8ml methylene chloride, ħawwad bi shaker għal 5min biex tinħall kompletament;

----- Iċċentrifuga għal 10 min, mill-inqas 3000g f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃);

----- Neħħi l-fażi supernatant, ħu 2 ml tas-soluzzjoni organika tas-sottostrat għal tubu tal-ħġieġ ta '10 ml. nixxef is-substate taħt banju ta' l-ilma ta 'fluss ta' Nitroġenu (50-60 ℃)

----- Żid 1 ml n-hexane, vortex għal 30s, imbagħad żid 1ml soluzzjoni ta 'estrazzjoni (soluzzjoni 3), vortex għal darb'oħra għal 1min.Iċċentrifuga għal 5min, mill-inqas 3000g f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃);

----- Neħħi l-fażi supernatant, ħu 50ml għall-assaġġ;

9. Proċess ta 'assaġġ

9.1 Avviż qabel l-assaġġ

9.1.1 Kun żgur li r-reaġenti u l-mikrowells kollha jkunu kollha f'temperatura tal-kamra (20-25℃).

9.1.2 Irritorna r-reaġenti kollha tal-bqija għal 2-8℃ immedjatament wara li jintuża.

9.1.3 Il-ħasil tal-mikrowells b'mod korrett huwa pass importanti fil-proċess tal-assaġġ;huwa l-fattur vitali għar-ripetittività tal-analiżi ELISA.

9.1.4 Evita d-dawl u għatti l-microwells waqt l-inkubazzjoni.

9.2 Passi tal-Assaġġ

9.2.1 Oħroġ ir-reaġenti kollha f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃) għal aktar minn 30min, omoġenizza qabel l-użu.

9.2.2 Oħroġ il-microwells meħtieġa u rritorna l-bqija fil-borża zip-lock f'2-8℃ immedjatament.

9.2.3 Is-soluzzjoni tal-ħasil dilwita għandha tissaħħan mill-ġdid biex tkun f'temperatura ambjentali qabel l-użu.

9.2.4Numru:Innumera kull pożizzjoni tal-mikrowell u l-istandards u l-kampjuni kollha għandhom jitħaddmu f'żewġ kopji.Irreġistra l-istandards u l-pożizzjonijiet tal-kampjuni.

9.2.5Żid soluzzjoni/kampjun standard:Żid 50 µl ta' soluzzjoni standard jew kampjun ippreparat fil-bjar korrispondenti.Żid 50µl soluzzjoni ta' antikorp.Ħallat bil-mod billi tħawwad il-pjanċa manwalment u inkuba għal 30min f'25℃ b'għatu.

9.2.6Aħsel:Neħħi l-għatu bil-mod u purifika l-likwidu mill-bjar u laħlaħ il-microwells b'250µl soluzzjoni tal-ħasil dilwita (soluzzjoni 2) f'intervall ta' 10s għal 4-5 darbiet.Assorbi l-ilma residwu b'karta assorbenti (il-bużżieqa ta 'l-arja tal-bqija tista' tiġi eliminata bil-ponta mhux użata).

9.2.8.Konjugat tal-enzimi:Żid soluzzjoni tal-konjugat tal-enżima 100ml għal kull bir, Ħallat bil-mod billi tħawwad il-pjanċa manwalment u inkuba għal 30min f'25℃ b'għatu.Irrepeti l-pass tal-ħasil mill-ġdid.

9.2.8Kulur:Żid 50µl soluzzjoni A u 50µl soluzzjoni B ma' kull bir.Ħallat bil-mod billi tħawwad il-pjanċa manwalment u inkuba għal 15-il minuta f'25℃ b'għatu (ara 12.8).

9.2.9Miżura:Żid 50µl is-soluzzjoni ta' waqfien f'kull bir.Ħallat bil-mod billi tħawwad il-pjanċa manwalment u kejjel l-assorbiment f'450nm kontra vojt ta 'l-arja (Huwa ssuġġerit miżura bil-tul ta' mewġ doppju ta '450/630nm. Aqra r-riżultat fi żmien 5min wara ż-żieda ta' soluzzjoni ta 'waqfien. ) (Nistgħu nkejlu wkoll bil-vista). mingħajr soluzzjoni ta' waqfien fil-qosor tal-istrument ELIASA)

Riżultati

10.1 Assorbenza perċentwali

Il-valuri medji tal-valuri ta' assorbiment miksuba għall-istandards u l-kampjuni huma diviżi bil-valur ta' assorbiment ta' l-ewwel standard (standard żero) u mmultiplikati b'100%.L-istandard żero għalhekk isir ugwali għal 100% u l-valuri ta' assorbiment huma kkwotati f'perċentwali.

Assorbenza (%) = B/B0 × 100%

B ——standard ta' assorbiment (jew kampjun)

B0 ——assorbenza żero standard

10.2 Kurva Standard

Biex tfassal kurva standard: Ħu l-valur tal-assorbenza tal-istandards bħala assi y, semi-logaritmiku tal-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tal-istandards flumequine (ppb) bħala assi x.

--- Il-flumequinekonċentrazzjoni ta 'kull kampjun (ppb), li tista' tinqara mill-kurva tal-kalibrazzjoni, hija mmultiplikata bil-multiplu ta 'dilwizzjoni korrispondenti ta' kull kampjun segwit, u tinkiseb il-konċentrazzjoni attwali tal-kampjun.

Għat-tnaqqis tad-dejta tal-kits ELISA, ġie żviluppat softwer speċjali, li jista' jiġi pprovdut fuq talba.

11. Sensittività, preċiżjoni u preċiżjoni

Sensittività tat-test：0.3ppb

Fattur tad-dilwizzjoni tal-Kampjun tal-Għasel: 2

Limitu ta' skoperta

Kampjun tal-għasel------------------------------------------------ -1ppb

Eżattezza

Kampjun tal-għasel -------------------------------------------- 90±20 %

Preċiżjoni

Il-koeffiċjent tal-varjazzjoni tal-kit ELISA huwa inqas minn 10%.

12. Avviż

12.1 Il-valuri medji tal-valuri tal-assorbiment miksuba għall-istandards u l-kampjuni jitnaqqsu jekk ir-reaġenti u l-kampjuni ma jkunux ġew irregolati għat-temperatura tal-kamra (20-25 ℃).

12.2 Tħallix microwells jinxef bejn il-passi biex tevita ripetittività bla suċċess u ħaddem il-pass li jmiss immedjatament wara ttektek il-holder tal-microwells.

12.3.Omoġenizza kull reaġent qabel tuża.

12.4.Żomm il-ġilda tiegħek 'il bogħod mis-soluzzjoni ta' waqfien għax hija 2M H₂SO₄soluzzjoni.

12.5 Tużax il-kits skaduti.Tiskambjax ir-reaġenti ta 'lottijiet differenti, għax se twaqqa' s-sensittività.

12.6 Kundizzjoni tal-ħażna:

Żomm il-kits ELISA f'2-8℃, tiffriżax.Issiġilla pjanċi tal-mikrowell tal-mistrieħ Evita dawl tax-xemx dritt waqt l-inkubazzjonijiet kollha.Il-kisi tal-pjanċi tal-mikrotiter huwa rakkomandat.

12.7 Indikazzjonijiet għar-reaġenti li jmorru ħażin:

Is-soluzzjoni tas-sottostrat għandha tiġi abbandunata jekk idawwar il-kuluri.

Ir-reaġenti jistgħu jduru ħażin jekk il-valur tal-assorbiment (450/630nm) tal-istandard żero huwa inqas minn 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 Ir-reazzjoni tal-kulur teħtieġ 15-il minuta wara li żżid Soluzzjoni A u Soluzzjoni B. U tista 'ttawwal il-ħin ta' inkubazzjoni jvarja minn 20min għal aktar jekk il-kulur ikun ħafif wisq biex jiġi determinat.Qatt taqbeż 25min, Għall-kuntrarju, tqassar il-ħin ta 'inkubazzjoni kif suppost.

12.9 L-aħjar temperatura ta 'reazzjoni hija 25℃.Temperatura ogħla jew aktar baxxa twassal għal bidliet fil-valuri tas-sensittività u l-assorbiment.

13. Ħażna

Kondizzjoni tal-ħażna: 2-8℃.

Perjodu ta 'ħażna: 12-il xahar.