товар

Принцип тестирования

Этот набор основан на технологии непрямого конкурентного ИФА.Лунки микротитровального аппарата покрыты связывающим антигеном.ФлумхайнОстаток в образце конкурирует с антигеном, нанесенным на планшет для микротитрования, за антитело.После добавления меченого ферментом анти-антитела для проявления цвета используют субстрат ТМБ.Абсорбция образца отрицательно связана с содержанием в нем тетрациклина. После сравнения со стандартной кривой, умноженной на кратное разведение, можно рассчитать количество остатка флумехина в образце.

Приложения

Этот набор может быть использован для количественного и качественного анализа остатков флумехина в меде.

перекрестные реакции

Флумехин …………………..……………………… 100%

Требуемые материалы

Оборудование

┅┅Спектрофотометр для микропланшета (450 нм/630 нм)

┅┅Гомогенизатор или гастер

┅┅Шейкер

┅┅Вихревой смеситель

┅┅Центрифуга

┅┅Аналитические весы (индуктивность: 0,01 г)

┅┅Градуированная пипетка: 15 мл

┅┅Резиновая груша для пипетки

┅┅Полистироловая центрифужная пробирка: 15 мл, 50 мл

┅┅Стеклянная пробирка: 10 мл

┅┅Микропипетки: 20–200 мл, 100–10000 мл,

250 мл - мультипипетка

Реагенты

┅┅н-гексан(AR)

┅┅Метиленхлорид (АР)

┅┅Ацетонитрил (АР)

┅┅Деионизированная вода

----- Концентрированная соляная кислота (AR)

Компоненты комплекта

● Планшет для микротитрования с 96 лунками, покрытыми антигеном

● Стандартные растворы (6 флаконов×1 мл/бутылка)

0 частей на миллиард, 0,3 частей на миллиард, 1,2 частей на миллиард, 4,8 частей на миллиард, 19,2 частей на миллиард, 76,8 частей на миллиард

● Стандартный контроль высокой концентрации: (1 мл/бутылка)

……………………………………………………......100ppb

● Ферментный конъюгат 12мл………………………... красная крышка

● Раствор антител 7 мл …………..……..….…..зеленая крышка

● Раствор A 7 мл……..…………………..………..белый колпачок

● Раствор B 7 мл …………….…………..………… красная крышка

● Стоп-раствор 7 мл ……………………..………желтая крышка

● 20XКонцентрированный моющий раствор 40 мл

…………………………………………..…..прозрачная крышка

●2X Экстракционный раствор 50 мл …………………… синяя крышка

Подготовка реагентов

7.1 Образец меда

Раствор 1 : 0,2 М раствор соляной кислоты

Масса 41,5 мл Концентрированная соляная кислота, разбавленная деионизированной водой до 500 мл.

Решение 2: Промывочный раствор

Разбавьте концентрированный промывочный раствор деионизированной водой в объемном соотношении 1:19, которая будет использоваться для промывки планшетов.разбавленный раствор можно хранить при температуре 4 ℃ в течение 1 месяца.

Решение3: экстракционный раствор

Разбавьте 2-кратный концентрированный экстракционный раствор деионизированной водой в объемном соотношении 1:1 (или в зависимости от требований), которая будет использоваться для экстракции образца.Этот разбавленный раствор можно хранить в течение 1 месяца при температуре 4℃.

Подготовка проб

8.1 Уведомления и меры предосторожности для пользователей перед эксплуатацией

(a) Пожалуйста, используйте одноразовые наконечники в процессе эксперимента и меняйте наконечники при абсорбции другого реагента.

(b) Убедитесь, что все экспериментальные инструменты чистые, иначе это повлияет на результат анализа.

8.2Образец меда

----- Взвесьте образец меда 2 г ± 0,05 г в центрифужную пробирку из полистирола объемом 50 мл,

----- Добавьте 2 мл 0,2 М раствора соляной кислоты (раствор 1), встряхните, чтобы полностью перемешать, затем добавьте 8 мл метиленхлорида, встряхните шейкером в течение 5 минут до полного растворения;

----- Центрифуга в течение 10 мин, не менее 3000 г при комнатной температуре (20-25 ℃);

----- Удалите надосадочную фазу, перенесите 2 мл органического раствора субстрата в стеклянную пробирку на 10 мл. Высушите субстрат в водяной бане с потоком азота (50-60 ℃)

----- Добавьте 1 мл н-гексана, встряхивайте в течение 30 с, затем добавьте 1 мл экстракционного раствора (раствор 3), снова встряхивайте в течение 1 мин.Центрифуга в течение 5 мин, не менее 3000 г при комнатной температуре (20-25 ℃);

----- Удалите супернатантную фазу, возьмите 50 мл для анализа;

9. Процесс анализа

9.1 Уведомление перед анализом

9.1.1 Убедитесь, что все реагенты и микролунки имеют комнатную температуру (20–25 ℃).

9.1.2 Верните все остальные реагенты к температуре 2-8℃ сразу после использования.

9.1.3 Правильная промывка микролунок является важным этапом в процессе анализа;это жизненно важный фактор повторяемости анализа ELISA.

9.1.4 Избегайте света и накрывайте микролунки во время инкубации.

9.2 Этапы анализа

9.2.1 Выдержать все реагенты при комнатной температуре (20-25°С) более 30 минут, гомогенизировать перед использованием.

9.2.2 Достаньте необходимые микролунки и немедленно положите остальные в пакет с застежкой-молнией при температуре 2-8℃.

9.2.3 Перед использованием разбавленный промывочный раствор следует подогреть до комнатной температуры.

9.2.4Число:Пронумеруйте каждое положение микролунки, а также все стандарты и образцы должны быть проанализированы в двух экземплярах.Запишите положения стандартов и образцов.

9.2.5Добавить стандартный раствор/образец:Добавьте 50 мкл стандартного раствора или подготовленного образца в соответствующие лунки.Добавьте 50 мкл раствора антител.Аккуратно перемешайте, встряхивая планшет вручную, и инкубируйте в течение 30 минут при 25 ℃ под крышкой.

9.2.6Стирать:Аккуратно снимите крышку и вылейте жидкость из лунок и промойте микролунки 250 мкл разбавленного промывочного раствора (раствор 2) с интервалом 10 с 4-5 раз.Соберите оставшуюся воду впитывающей бумагой (остатки пузырьков воздуха можно удалить с помощью неиспользованного наконечника).

9.2.8.Ферментный конъюгат:Добавьте 100 мл раствора конъюгата фермента в каждую лунку, осторожно перемешайте, встряхивая планшет вручную, и инкубируйте в течение 30 минут при 25 ℃ под крышкой.Повторите этап стирки еще раз.

9.2.8Цвет:Добавьте в каждую лунку по 50 мкл раствора А и 50 мкл раствора Б.Аккуратно перемешайте, встряхивая планшет вручную, и инкубируйте в течение 15 мин при 25°С под крышкой (см. 12.8).

9.2.9Мера:Добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора.Аккуратно перемешайте, встряхивая планшет вручную, и измерьте оптическую плотность при 450 нм на воздушном бланке (рекомендуется измерять с двойной длиной волны 450/630 нм. Прочитайте результат в течение 5 минут после добавления стоп-раствора.) (Мы также можем измерить визуально без стоп-раствора, за исключением прибора ELIASA)

Результаты

10.1 Процент поглощения

Средние значения значений абсорбции, полученные для стандартов и образцов, делят на значение абсорбции первого стандарта (нулевого стандарта) и умножают на 100%.Таким образом, нулевой стандарт принимается равным 100%, а значения абсорбции приводятся в процентах.

Поглощение (%) = B/B0 × 100%

B — стандарт поглощения (или образец)

B0 — нулевой стандарт поглощения

10.2 Стандартная кривая

Чтобы нарисовать стандартную кривую: Возьмите значение поглощения стандартов по оси ординат, полулогарифм концентрации раствора стандартов флумехина (млрд) по оси абсцисс.

---флумхайнконцентрация каждого образца (частей на миллиард), которая может быть считана из калибровочной кривой, умножается на соответствующее кратное разбавление каждого последующего образца, и получается фактическая концентрация образца.

Для обработки данных наборов ИФА разработано специальное программное обеспечение, которое может быть предоставлено по запросу.

11. Чувствительность, точность и прецизионность

Чувствительность теста：0,3 частей на миллиард

Коэффициент разбавления пробы меда: 2

Предел обнаружения

Образец меда------------------------------------------------ -1ppb

Точность

Проба меда ------------------------------------------------------------ 90±20 %

Точность

Коэффициент вариации набора ИФА менее 10%.

12. Уведомление

12.1 Средние значения коэффициентов поглощения, полученные для стандартов и образцов, будут снижены, если реагенты и образцы не были отрегулированы до комнатной температуры (20-25°С).

12.2 Не допускайте высыхания микролунок между этапами во избежание неудачного повторения и переходите к следующему этапу сразу же после постукивания по держателю микропланшетов.

12.3.Гомогенизируйте каждый реагент перед использованием.

12.4.Держите кожу подальше от стоп-раствора, так как это 2M H.₂SO₄решение.

12.5 Не используйте просроченные комплекты.Не меняйте реагенты разных партий, иначе чувствительность снизится.

12.6 Условия хранения:

Храните наборы ELISA при температуре 2-8 ℃, не замораживайте.Закройте микролуночные планшеты. Избегайте попадания прямых солнечных лучей во время всех инкубаций.Рекомендуется накрывать планшеты для микротитрования.

12.7 Признаки порчи реагентов:

От раствора субстрата следует отказаться, если он меняет цвет.

Реагенты могут испортиться, если значение поглощения (450/630 нм) нулевого стандарта меньше 0,5 (A450 нм < 0,5).

12.8 Реакция окрашивания требует 15 минут после добавления раствора А и раствора Б. И вы можете продлить время инкубации в диапазоне от 20 минут до более, если цвет слишком светлый, чтобы его можно было определить.Никогда не превышайте 25 минут, наоборот, сократите время инкубации должным образом.

12.9 Оптимальная температура реакции составляет 25℃.Более высокая или более низкая температура приведет к изменению значений чувствительности и оптической плотности.

13. Хранение

Условия хранения: 2-8℃.

Срок хранения: 12 месяцев.