izdelek

Testno načelo

Ta komplet temelji na posredno-konkurenčni tehnologiji ELISA.Mikrotitrske vdolbinice so prekrite s sklopitvenim antigenom.Flumequineostanek v vzorcu tekmuje z antigenom, prevlečenim na mikrotitrski plošči, za protitelo.Po dodatku encimsko označenega protitelesa se za prikaz barve uporabi substrat TMB.Absorbanca vzorca je negativno povezana z vsebnostjo tetraciklina v njem; po primerjavi s standardno krivuljo, pomnoženo z večkratnikom redčenja, je mogoče izračunati količino ostanka Flumequina v vzorcu.

Aplikacije

Ta komplet se lahko uporablja pri kvantitativni in kvalitativni analizi ostankov flumequina v medu.

Navzkrižne reakcije

Flumequine …………………..……………………… 100 %

Potrebni materiali

Oprema

┅┅Spektrofotometer za mikrotitrsko ploščo (450nm/630nm)

┅┅Homogenizator ali želodec

┅┅Shaker

┅┅Vortex mešalnik

┅┅Centrifuga

┅┅Analitična tehtnica (induktivnost: 0,01g)

┅┅Graduirana pipeta: 15 ml

┅┅Gumijasta pipeta

┅┅Centrifugalna epruveta iz polistirena: 15 ml, 50 ml

┅┅Steklena epruveta: 10 ml

┅┅Mikropipete: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipeta

Reagenti

┅┅n-heksan (AR)

┅┅Metilen klorid (AR)

┅┅acetonitril (AR)

┅┅Deionizirana voda

-----Koncentrirana klorovodikova kislina (AR)

Komponente kompleta

● Mikrotiterska plošča s 96 jamicami, prevlečenimi z antigenom

● Standardne raztopine (6 stekleničk × 1 ml/plastenko)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Standardna kontrola visoke koncentracije: (1 ml/stekleničko)

…………………………………………………......100 ppb

● Encimski konjugat 12 ml………………………... rdeč pokrov

● Raztopina protiteles 7 ml …………..……..….…..zeleni pokrovček

● Raztopina A 7 ml……..…………………..………..beli pokrovček

● Raztopina B 7 ml …………….…………..………… rdeči pokrovček

● Stop raztopina 7 ml ……………………..………rumena kapica

● 20X Koncentrirana raztopina za pranje 40 ml

………………………………………..…..prozoren pokrovček

●2X raztopina za ekstrakcijo 50 ml………………...… modri pokrovček

Priprava reagentov

7.1 Vzorec medu

Raztopina 1: 0,2 M raztopina klorovodikove kisline

Teža 41,5 ml Koncentrirana klorovodikova kislina, razredčena z deionizirano vodo do 500 ml.

Rešitev 2: Raztopina za pranje

Koncentrirano raztopino za pranje razredčite z deionizirano vodo v volumskem razmerju 1:19, ki jo boste uporabili za pranje plošč.razredčeno raztopino lahko hranite pri 4 ℃ 1 mesec.

rešitev3: ekstrakcijska raztopina

2× koncentrirano ekstrakcijsko raztopino razredčite z deionizirano vodo v volumskem razmerju 1:1 (oz. odvisno od zahteve), ki jo boste uporabili za ekstrakcijo vzorca.To razredčeno raztopino lahko shranite 1 mesec pri 4 ℃.

Priprave vzorcev

8.1 Obvestilo in previdnostni ukrepi za uporabnike pred uporabo

(a) Med poskusom uporabite enkratne konice in jih zamenjajte, ko absorbirate drugačen reagent.

(b) Prepričajte se, da so vsi eksperimentalni instrumenti čisti, sicer bo to vplivalo na rezultat testa.

8.2Vzorec medu

----- Odtehtajte 2 g±0,05 g vzorca medu v 50 ml polistirensko epruveto za centrifugo,

-----Dodajte 2 ml 0,2 M raztopine klorovodikove kisline (raztopina 1), premešajte, da se popolnoma premeša, nato dodajte 8 ml metilen klorida, stresajte s stresalnikom 5 minut, da se popolnoma raztopi;

-----Centrifugirajte 10 minut, vsaj 3000 g pri sobni temperaturi (20-25 ℃);

-----Odstranite fazo supernatanta, vzemite 2 ml organske raztopine substrata v 10 ml stekleno cevko. Substate posušite v vodni kopeli s pretokom dušika (50-60 ℃)

-----Dodajte 1 ml n-heksana, vrtinčite 30 s, nato dodajte 1 ml ekstrakcijske raztopine (raztopina 3), ponovno vrtinčite 1 minuto.Centrifugirajte 5 minut, vsaj 3000 g pri sobni temperaturi (20-25 ℃);

-----Odstranite fazo supernatanta, vzemite 50 ml za analizo;

9. Postopek testiranja

9.1 Opozorilo pred analizo

9.1.1 Prepričajte se, da so vsi reagenti in mikrovdolbinice na sobni temperaturi (20–25 ℃).

9.1.2 Vse preostale reagente vrnite na 2-8 ℃ takoj po uporabi.

9.1.3 Pravilno pranje mikrovdolbinic je pomemben korak v procesu analize;je ključni dejavnik za ponovljivost analize ELISA.

9.1.4 Med inkubacijo se izogibajte svetlobi in pokrijte mikrovdolbinice.

9.2 Koraki preizkusa

9.2.1 Vse reagente vzemite ven pri sobni temperaturi (20-25 ℃) za več kot 30 minut, pred uporabo jih homogenizirajte.

9.2.2 Vzemite potrebne mikrovdolbinice in takoj vrnite preostanek v vrečko z zadrgo pri 2–8 ℃.

9.2.3 Razredčeno raztopino za izpiranje je treba pred uporabo ponovno segreti na sobno temperaturo.

9.2.4številka:Oštevilčite vsako mesto mikrovdolbinice in vse standarde in vzorce je treba izvesti v dvojniku.Zabeležite položaje standardov in vzorcev.

9.2.5Dodajte standardno raztopino/vzorec:Dodajte 50 µl standardne raztopine ali pripravljenega vzorca v ustrezne vdolbinice.Dodajte 50 µl raztopine protiteles.Nežno premešajte z ročnim stresanjem plošče in inkubirajte 30 minut pri 25 ℃ s pokrovom.

9.2.6pranje:Nežno odstranite pokrov in očistite tekočino iz vdolbinic ter izperite mikrovdolbinice z 250 µl razredčene raztopine za izpiranje (raztopina 2) v intervalu 10 s 4-5 krat.Preostalo vodo popivnajte z vpojnim papirjem (ostali zračni mehurček lahko odstranite z neuporabljeno konico).

9.2.8.Encimski konjugat:Dodajte 100 ml raztopine encimskega konjugata v vsako vdolbinico, nežno premešajte z ročnim stresanjem plošče in inkubirajte 30 minut pri 25 °C s pokrovom.Ponovno ponovite korak pranja.

9.2.8Obarvanost:V vsako vdolbinico dodajte 50 µl raztopine A in 50 µl raztopine B.Nežno premešajte z ročnim stresanjem plošče in inkubirajte 15 minut pri 25 °C s pokrovom (glejte 12.8).

9.2.9Ukrep:V vsako vdolbinico dodajte 50 µl stop raztopine.Nežno premešajte z ročnim stresanjem plošče in izmerite absorbanco pri 450 nm proti slepemu zraku (priporočljivo je merjenje z dvojno valovno dolžino 450/630 nm. Odčitajte rezultat v 5 minutah po dodatku stop raztopine. ) (Merimo lahko tudi z vidom brez rešitve za zaustavitev, skratka instrumenta ELIASA)

Rezultati

10.1 Odstotek absorbance

Srednje vrednosti vrednosti absorbance, dobljene za standarde in vzorce, se delijo z vrednostjo absorbance prvega standarda (ničelni standard) in pomnožijo s 100 %.Ničelni standard je tako enak 100 %, vrednosti absorbance pa so navedene v odstotkih.

Absorbanca (%) = B/B0 × 100 %

B ——standard absorpcije (ali vzorec)

B0 ——standard absorpcije nič

10.2 Standardna krivulja

Za risanje standardne krivulje: Vzemite vrednost absorbance standardov kot os y, pollogaritemsko koncentracijo standardne raztopine flumekvina (ppb) kot os x.

--- Theflumekinkoncentracija vsakega vzorca (ppb), ki jo je mogoče prebrati iz umeritvene krivulje, se pomnoži z ustreznim večkratnikom razredčitve vsakega vzorca, ki mu sledi, in dobi se dejanska koncentracija vzorca.

Za zmanjšanje podatkov kompletov ELISA je bila razvita posebna programska oprema, ki se lahko zagotovi na zahtevo.

11. Občutljivost, točnost in natančnost

Test občutljivosti:0,3 ppb

Faktor razredčitve vzorca medu: 2

Meja zaznavanja

Vzorec medu------------------------------------------------ -1ppb

Natančnost

Vzorec medu -------------------------------------------------- 90±20 %

Natančnost

Koeficient variacije kompleta ELISA je manjši od 10 %.

12. Obvestilo

12.1 Srednje vrednosti vrednosti absorbance, dobljene za standarde in vzorce, bodo zmanjšane, če reagenti in vzorci niso bili uravnani na sobno temperaturo (20-25 ℃).

12.2 Ne dovolite, da se mikrovdolbinice posušijo med koraki, da se izognete neuspešnemu ponavljanju, in izvedite naslednji korak takoj po udarcu po držalu mikrovdolbinic.

12.3.Vsak reagent pred uporabo homogenizirajte.

12.4.Držite svojo kožo stran od stop raztopine, ker je 2M H₂SO₄rešitev.

12.5 Ne uporabljajte zastarelih kompletov.Ne menjajte reagentov iz različnih serij, saj bo to zmanjšalo občutljivost.

12.6 Pogoji skladiščenja:

Komplete ELISA hranite pri 2-8 ℃, ne zamrzujte.Plošče z mikrovdolbinicami zaprite. Med vsemi inkubacijami se izogibajte neposredni sončni svetlobi.Priporočljivo je, da mikrotitrske plošče pokrijete.

12.7 Indikacije, da se reagenti pokvarijo:

Raztopino substrata je treba opustiti, če se obarva.

Reagenti so lahko slabi, če je vrednost absorbance (450/630 nm) ničelnega standarda manjša od 0,5 (A450 nm <0,5).

12.8 Reakcija obarvanja potrebuje 15 minut po dodajanju raztopine A in raztopine B. Inkubacijski čas lahko podaljšate od 20 minut do več, če je barva presvetla, da bi jo bilo mogoče določiti.Nikoli ne prekoračite 25 minut, nasprotno, ustrezno skrajšajte čas inkubacije.

12.9 Optimalna reakcijska temperatura je 25 ℃.Višja ali nižja temperatura bo povzročila spremembe vrednosti občutljivosti in absorbance.

13. Shranjevanje

Pogoji shranjevanja: 2-8 ℃.

Rok skladiščenja: 12 mesecev.