toode

Testi põhimõte

See komplekt põhineb kaudselt konkureerival ELISA tehnoloogial.Mikrotiitri süvendid on kaetud sidestusantigeeniga.Flumequineproovis olev jääk konkureerib mikrotiiterplaadile kaetud antigeeniga antikeha pärast.Pärast ensüümiga märgistatud anti-antikeha lisamist kasutatakse värvi näitamiseks TMB substraati.Proovi neeldumine on negatiivselt seotud selles sisalduva tetratsükliini jäägiga, pärast võrdlust standardkõveraga, mis on korrutatud lahjenduskordajaga, saab arvutada Flumequine jäägi koguse proovis.

Rakendused

Seda komplekti saab kasutada mee fluekviini jääkide kvantitatiivseks ja kvalitatiivseks analüüsiks.

Ristreaktsioonid

Flumequine ……………………………………………… 100%

Vajalikud materjalid

Varustus

┅┅Mikrotiiterplaadi spektrofotomeeter (450nm/630nm)

┅┅Homogenisaator ehk Stomacher

┅┅Šaiker

┅┅Vortex segisti

┅┅ Tsentrifuugi

┅┅Analüütiline kaal (induktiivsus: 0,01g)

┅┅ Gradueeritud pipett: 15ml

┅┅Kummist pipeti pirn

┅┅Polüstüreenist tsentrifuugitoru: 15ml, 50ml

┅┅Klaasist katseklaas: 10ml

┅┅Mikropipetid: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipett

Reaktiivid

┅┅n-heksaan (AR)

┅┅metüleenkloriid (AR)

┅┅Atsetonitriil (AR)

┅┅Deioniseeritud vesi

----- Kontsentreeritud vesinikkloriidhape (AR)

Komplekti komponendid

● 96 süvendiga mikrotiiterplaat, mis on kaetud antigeeniga

● Standardlahused (6 pudelit × 1 ml pudeli kohta)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Kõrge kontsentratsiooniga standardkontroll: (1 ml/pudel)

………………………………………………………100 ppb

● Ensüümi konjugaat 12 ml…………………………... punane kork

● Antikehalahus 7ml …………..……..………..roheline kork

● Lahus A 7 ml…………………………..………..valge kork

● Lahus B 7 ml …………….…………..………… punane kork

● Stop-lahus 7 ml ………………………..………kollane kork

● 20X Kontsentreeritud pesulahus 40ml

…………………………………………..…..läbipaistev kork

●2X ekstraktsioonilahus 50ml……………………… sinine kork

Reaktiivide ettevalmistamine

7.1 Meeproov

Lahus 1: 0,2 M vesinikkloriidhappe lahus

Kaal 41,5 ml Kontsentreeritud vesinikkloriidhape, lahjendada deioniseeritud veega 500 ml-ni.

Lahendus 2: pesulahus

Lahjendage kontsentreeritud pesulahus deioniseeritud veega mahusuhtes 1:19, mida kasutatakse plaatide pesemiseks.lahjendatud lahust võib hoida temperatuuril 4 ℃ 1 kuu.

Lahendus3: ekstraheerimislahus

Lahjendage 2x kontsentreeritud ekstraktsioonilahus deioniseeritud veega vahekorras 1:1 (või olenevalt vajadusest), mida kasutatakse proovi ekstraheerimiseks.Seda lahjendatud lahust võib säilitada 1 kuu temperatuuril 4 ℃.

Näidiste ettevalmistused

8.1 Märkus ja ettevaatusabinõud kasutajatele enne kasutamist

(a) Palun kasutage katse käigus ühekordseid otsikuid ja vahetage otsikuid, kui neelavad erinevat reaktiivi.

(b) Veenduge, et kõik katseinstrumendid on puhtad, vastasel juhul mõjutab see analüüsi tulemust.

8.2Mee proov

----- Kaaluge 2 g ± 0,05 g meeproovi 50 ml polüstüreenist tsentrifuugi katsutisse,

----- Lisage 2 ml 0,2 M vesinikkloriidhappe lahust (lahus 1), segage vorteksiga, et see täielikult seguneks, seejärel lisage 8 ml metüleenkloriidi, loksutage loksuti abil 5 minutit, et täielikult lahustuda;

-----Tsentrifuugige 10 min, vähemalt 3000g toatemperatuuril (20-25 ℃);

-----Eemaldage supernatandi faas, viige 2 ml substraadi orgaanilist lahust 10 ml klaastorusse. kuivatage substraadi vesivannis lämmastiku voolu all (50-60 ℃)

----- Lisage 1 ml n-heksaani, segage 30 sekundit, seejärel lisage 1 ml ekstraheerimislahust (lahus 3) ja segage uuesti 1 minut.Tsentrifuugige 5 minutit, vähemalt 3000 g toatemperatuuril (20-25 ℃);

-----Eemaldage supernatandi faas, võtke analüüsiks 50 ml;

9. Analüüsi protsess

9.1 Märkus enne analüüsi

9.1.1 Veenduge, et kõik reaktiivid ja mikrosüvendid oleksid toatemperatuuril (20-25 ℃).

9.1.2 Viige kõik ülejäänud reaktiivid kohe pärast kasutamist tagasi temperatuurini 2–8 ℃.

9.1.3 Mikrosüvendite õige pesemine on analüüsiprotsessi oluline etapp;see on ELISA analüüsi korduvuse oluline tegur.

9.1.4 Vältige valgust ja katke mikrosüvendid inkubeerimise ajal.

9.2 Testi etapid

9.2.1 Võtke kõik reaktiivid välja toatemperatuuril (20-25 ℃) kauemaks kui 30 minutiks, homogeniseerige enne kasutamist.

9.2.2 Võtke vajalikud mikrosüvendid välja ja pange ülejäänud kohe tagasi lukuga kotti temperatuuril 2–8 ℃.

9.2.3 Lahjendatud pesulahust tuleb enne kasutamist soojendada toatemperatuurini.

9.2.4Number:Nummerdage iga mikrosüvendi asukoht ning kõiki standardeid ja proove tuleks kasutada kahes eksemplaris.Salvestage standardid ja näidiste asukohad.

9.2.5Lisage standardlahus/proov:Lisage vastavatesse süvenditesse 50 µl standardlahust või ettevalmistatud proovi.Lisage 50 µl antikeha lahust.Segage õrnalt plaati käsitsi loksutades ja inkubeerige kaanega 30 minutit temperatuuril 25 ℃.

9.2.6Pese:Eemaldage õrnalt kate ja puhastage vedelik süvenditest ning loputage mikrosüvendeid 250 µl lahjendatud pesulahusega (lahus 2) intervalliga 10 s 4-5 korda.Absorbeerige jääkvesi imava paberiga (ülejäänud õhumulli saab eemaldada kasutamata otsikuga).

9.2.8.Ensüümi konjugaat:Lisage igasse süvendisse 100 ml ensüümi konjugaadi lahust, segage õrnalt plaati käsitsi loksutades ja inkubeerige kaanega 30 minutit temperatuuril 25 ℃.Korrake pesemisetappi uuesti.

9.2.8Värvimine:Lisage igasse süvendisse 50 µl lahust A ja 50 µl lahust B.Segage õrnalt plaati käsitsi loksutades ja inkubeerige kaanega 15 minutit temperatuuril 25 ℃ (vt 12.8).

9.2.9Mõõt:Lisage igasse süvendisse 50 µl stopplahust.Segage õrnalt, raputades plaati käsitsi, ja mõõtke neelduvus 450 nm juures õhuga tühja katsega (soovitatav on mõõta topeltlainepikkusega 450/630 nm. Lugege tulemust 5 minuti jooksul pärast stopplahuse lisamist.) (Saame mõõta ka nägemise teel. ilma peatumislahenduseta ELIASA instrumendi puudumisel)

Tulemused

10.1 Neeldumise protsent

Standardite ja proovide jaoks saadud neeldumisväärtuste keskmised väärtused jagatakse esimese standardi (nullstandardi) neeldumisväärtusega ja korrutatakse 100%.Seega muudetakse nullstandardiks 100% ja neeldumisväärtused on esitatud protsentides.

Neelduvus (%) = B/B0 × 100%

B — neeldumisstandard (või proov)

B0 — — neeldumise nullstandard

10.2 Standardkõver

Standardkõvera joonistamine: võtke y-teljeks standardite neeldumisväärtus, x-teljeks flumekviini standardlahuse kontsentratsiooni poollogaritmiline väärtus (ppb).

--- Theflumequineiga proovi kontsentratsioon (ppb), mida saab lugeda kalibreerimiskõveralt, korrutatakse iga järgneva proovi vastava lahjenduskordsega ja saadakse proovi tegelik kontsentratsioon.

ELISA komplektide andmete vähendamiseks on välja töötatud spetsiaalne tarkvara, mida saab soovi korral pakkuda.

11. Tundlikkus, täpsus ja täpsus

Testi tundlikkust:0,3 ppb

Mesi Proovi lahjendustegur: 2

Tuvastamispiir

Meeproov------------------------------------------------ -1 ppb

Täpsus

Meeproov --------------------------------------------- 90±20 %

Täpsus

ELISA komplekti variatsioonikoefitsient on alla 10%.

12. Märkus

12.1 Standardite ja proovide jaoks saadud neeldumisväärtuste keskmisi väärtusi vähendatakse, kui reaktiive ja proove ei ole reguleeritud toatemperatuurile (20-25 ℃).

12.2 Ärge laske mikrosüvenditel etappide vahel kuivada, et vältida ebaõnnestunud korduvust ja tehke järgmist sammu kohe pärast mikrosüvendite hoidiku koputamist.

12.3.Enne kasutamist homogeniseerige iga reaktiiv.

12.4.Hoidke oma nahk stopplahusest eemal, sest see on 2M H₂SO₄lahendus.

12.5 Ärge kasutage aegunud komplekte.Ärge vahetage erinevate partiide reaktiive, kuna see vähendab tundlikkust.

12.6 Säilitustingimused:

Hoidke ELISA komplekte temperatuuril 2–8 ℃, ärge külmutage.Sulgege mikrosüvendi plaadid. Vältige otsest päikesevalgust kõigi inkubatsioonide ajal.Mikrotiiterplaadid on soovitatav katta.

12.7 Näidustused reaktiivide riknemise kohta:

Substraadi lahusest tuleks loobuda, kui see värvub.

Reaktiivid võivad muutuda halvaks, kui nullstandardi neeldumisväärtus (450/630 nm) on väiksem kui 0,5 (A450 nm＜ 0,5).

12.8 Värvimisreaktsioon vajab 15 minutit pärast lahuse A ja lahuse B lisamist. Kui värvus on määramiseks liiga hele, saate inkubatsiooniaega pikendada 20 minutilt rohkemale.Ärge kunagi ületage 25 minutit, vastupidi, lühendage inkubatsiooniaega korralikult.

12.9 Optimaalne reaktsioonitemperatuur on 25 ℃.Kõrgem või madalam temperatuur põhjustab tundlikkuse ja neeldumise väärtuste muutusi.

13. Ladustamine

Säilitustingimused: 2-8℃.

Säilitamisaeg: 12 kuud.