produk

Toets Beginsel

Hierdie stel is gebaseer op indirekte mededingende ELISA-tegnologie.Die mikrotiterputte is bedek met koppelantigeen.Flumequineoorskot in die monster kompeteer met die antigeen wat op die mikrotiterplaat bedek is vir die teenliggaam.Na die byvoeging van ensiem-gemerkte anti-teenliggaampies, word TMB-substraat gebruik om die kleur te wys.Absorbansie van die monster is negatief verwant aan die tetrasiklien daarin, na vergelyking met die Standaardkurwe, vermenigvuldig met die verdunningsveelvoud, kan Flumequine-residue in die monster bereken word.

Aansoeke

Hierdie stel kan gebruik word in kwantitatiewe en kwalitatiewe ontleding van flumequine-reste in heuning.

Kruisreaksies

Flumequine …………………..……………………………… 100%

Materiaal benodig

Toerusting

┅┅Mikrotiterplaatspektrofotometer (450nm/630nm)

┅┅ Homogeniseerder of maagversterkers

┅┅Shaker

┅┅Vortex menger

┅┅Sentrifuge

┅┅Analitiese balans (induktansie: 0.01g)

┅┅Gegradeerde pipet: 15ml

┅┅Rubberpipetbol

┅┅Polistireen sentrifugeerbuis: 15ml, 50ml

┅┅Glas proefbuis：10ml

┅┅Mikropipette: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipet

Reagense

┅┅n-heksaan (AR)

┅┅Metileenchloried (AR)

┅┅Asetonitril(AR)

┅┅Gedeïoniseerde water

-----Gekonsentreerde soutsuur (AR)

Kit komponente

● Mikrotiterplaat met 96 putte bedek met antigeen

● Standaardoplossings (6 bottels×1ml/bottel)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Hoë konsentrasie standaardbeheer: (1ml/bottel)

…………………………………………………………………100ppb

● Ensiemkonjugaat 12ml……………………………… rooi doppie

● Teenliggaamoplossing 7ml …………..……..….…..groen doppie

● Oplossing A 7ml……..………………………………………..wit doppie

● Oplossing B 7ml ………………….…………..………… rooi doppie

● Stop oplossing 7ml …………………………..………geel doppie

● 20XGekonsentreerde wasoplossing 40ml

………………………………………………..…..deursigtige pet

●2X Ekstraksie-oplossing 50ml………………………… blou doppie

Reagense Voorbereiding

7.1 Heuningmonster

Oplossing 1 : 0,2 M Soutsuuroplossing

Gewig 41.5ml Gekonsentreerde soutsuur, verdun met gedeïoniseerde water tot 500 ml.

Oplossing 2: Wasoplossing

Verdun die gekonsentreerde wasoplossing met gedeïoniseerde water in die volumeverhouding van 1:19, wat gebruik sal word om die plate te was.die verdunde oplossing kan vir 1 maand by 4℃ gestoor word.

Oplossing3: onttrekking oplossing

Verdun die 2×gekonsentreerde ekstraksieoplossing met gedeïoniseerde water in die volumeverhouding van 1:1 (of hang af van behoefte), wat vir monsterekstraksie gebruik sal word.Hierdie verdunde oplossing kan vir 1 maand by 4 ℃ bewaar word.

Voorbeeld voorbereidings

8.1 Kennisgewing en voorsorgmaatreëls vir die gebruikers voor operasie

(a) Gebruik asseblief eenmalige wenke in die proses van eksperiment, en verander die punte wanneer verskillende reagens absorbeer.

(b) Maak seker dat alle eksperimentele instrumente skoon is, anders sal dit die toetsresultaat beïnvloed.

8.2Heuning monster

-----Weeg 2g±0.05g heuningmonster in 'n 50ml polistireen sentrifugebuis,

-----Voeg 2ml 0.2 M Soutsuuroplossing (Oplossing 1) by, vortex om dit heeltemal te meng, voeg dan 8ml metileenchloried by, skud met shaker vir 5min om heeltemal op te los;

-----Sentrifugeer vir 10 min, ten minste 3000g by kamertemperatuur (20-25℃);

-----Verwyder die supernatant fase, neem 2 ml van die substraat organiese oplossing na 'n 10 ml glasbuis. droog die substaat onder waterbad van stikstofvloei (50-60℃)

-----Voeg 1 ml n-heksaan by, draai vir 30 sekondes, voeg dan 1 ml ekstraksie-oplossing (oplossing 3) by, draai weer vir 1 min.Sentrifugeer vir 5min, ten minste 3000g by kamertemperatuur (20-25℃);

-----Verwyder die supernatant fase, neem 50ml vir toets;

9. Assay proses

9.1 Kennisgewing voor toets

9.1.1 Maak seker dat alle reagense en mikroputte almal by kamertemperatuur (20-25℃) is.

9.1.2 Stel al die res reagense terug na 2-8℃ onmiddellik na gebruik.

9.1.3 Om die mikroputte korrek te was is 'n belangrike stap in die proses van toetsing;dit is die noodsaaklike faktor vir die herhaling van die ELISA-analise.

9.1.4 Vermy die lig en bedek die mikroputte tydens inkubasie.

9.2 Toetsstappe

9.2.1 Verwyder alle reagense by kamertemperatuur (20-25℃) vir meer as 30min, homogeniseer voor gebruik.

9.2.2 Haal die nodige mikroputte uit en sit die res onmiddellik terug in die ritssluitsak by 2-8℃.

9.2.3 Die verdunde wasoplossing moet voor gebruik herverhit word om by kamertemperatuur te wees.

9.2.4Nommer:Nommer elke mikroputposisie en alle standaarde en monsters moet in duplikaat uitgevoer word.Teken die standaarde en monsterposisies aan.

9.2.5Voeg standaard oplossing/monster by:Voeg 50 µl standaardoplossing of voorbereide monster by ooreenstemmende putte.Voeg 50µl teenliggaamoplossing by.Meng liggies deur die plaat met die hand te skud en inkubeer vir 30min by 25℃ met deksel.

9.2.6Was:Verwyder die deksel liggies en suiwer die vloeistof uit die putte en spoel die mikroputte met 250µl verdunde wasoplossing (oplossing 2) met 'n interval van 10s vir 4-5 keer.Absorbeer die oorblywende water met absorberende papier (die res lugborrel kan met ongebruikte punt uitgeskakel word).

9.2.8.Ensiem konjugaat:Voeg ensiemgekonjugeerde oplossing 100ml by elke put, Meng liggies deur die plaat met die hand te skud en inkubeer vir 30min by 25℃ met deksel.Herhaal die wasstap weer.

9.2.8Kleur:Voeg 50µl oplossing A en 50µl oplossing B by elke put.Meng liggies deur die plaat met die hand te skud en inkubeer vir 15 min by 25℃ met deksel (sien 12.8).

9.2.9Meet:Voeg 50µl die stopoplossing by elke put.Meng liggies deur die plaat met die hand te skud en meet die absorpsie by 450nm teen 'n lugblank (Dit word voorgestel met die dubbele golflengte van 450/630nm. Lees die resultaat binne 5min na byvoeging van stopoplossing. ) (Ons kan ook met die oog meet. sonder stopoplossing in kort van die ELIASA-instrument)

Resultate

10.1 Persentasie absorpsie

Die gemiddelde waardes van die absorpsiewaardes wat vir die standaarde en die monsters verkry is, word gedeel deur die absorpsiewaarde van die eerste standaard (nul standaard) en vermenigvuldig met 100%.Die nulstandaard word dus gelyk aan 100% gemaak en die absorpsiewaardes word in persentasies aangehaal.

Absorbansie (%) = B/B0 ×100%

B ——absorpsiestandaard (of monster)

B0 ——absorpsie nul standaard

10.2 Standaardkurwe

Om 'n standaardkromme te teken: Neem die absorpsiewaarde van standaarde as y-as, semi-logaritmies van die konsentrasie van die flumequine-standaardoplossing (ppb) as x-as.

--- Dieflumequinekonsentrasie van elke monster (ppb), wat uit die kalibrasiekurwe gelees kan word, word vermenigvuldig met die ooreenstemmende verdunningsveelvoud van elke monster wat gevolg word, en die werklike konsentrasie van monster word verkry.

Vir datavermindering van die ELISA-stelle is spesiale sagteware ontwikkel, wat op aanvraag verskaf kan word.

11. Sensitiwiteit, akkuraatheid en akkuraatheid

Toets sensitiwiteit:0.3ppb

Heuningmonster verdunningsfaktor: 2

Bespeuringslimiet

Heuningmonster ---------------------------------------------------- -1 ppb

Akkuraatheid

Heuningmonster ---------------------------------------------------- 90±20 %

Presisie

Variasiekoëffisiënt van die ELISA-stel is minder as 10%.

12. Kennisgewing

12.1 Die gemiddelde waardes van die absorpsiewaardes verkry vir die standaarde en die monsters sal verminder word indien die reagense en monsters nie tot kamertemperatuur (20-25℃) gereguleer is nie.

12.2 Moenie toelaat dat mikroputte tussen stappe droog word nie om onsuksesvolle herhaling te vermy en voer die volgende stap onmiddellik uit nadat die mikroputtehouer getik is.

12.3.Homogeniseer elke reagens voor gebruik.

12.4.Hou jou vel weg van die stopoplossing, want dit is die 2M H₂SO₄oplossing.

12.5 Moenie die kits verouderd gebruik nie.Moenie die reagense van verskillende groepe omruil nie, want dit sal die sensitiwiteit verlaag.

12.6 Bergingstoestand:

Hou die ELISA-stelle by 2-8 ℃, moenie vries nie.Seël rus mikroput plate Vermy reguit sonlig tydens alle inkubasies.Dit word aanbeveel om die mikrotiterplate te bedek.

12.7 Indikasies dat die reagense sleg gaan:

Substraatoplossing moet laat vaar word as dit verkleur.

Die reagense kan sleg word as die absorpsiewaarde (450/630nm) van die nulstandaard minder as 0.5 (A450nm＜0.5) is.

12.8 Die kleurreaksie benodig 15 minute nadat Oplossing A en Oplossing B bygevoeg is. En jy kan die inkubasietyd strek van 20min tot meer verleng as die kleur te lig is om te bepaal.Moet nooit 25min oorskry nie. Inteendeel, verkort die inkubasietyd behoorlik.

12.9 Die optimale reaksietemperatuur is 25℃.Hoër of laer temperatuur sal lei tot veranderinge in sensitiwiteit en absorpsiewaardes.

13. Berging

Bergingstoestand: 2-8 ℃.

Bergingstydperk: 12 maande.