Produkt

Testprinzip

Dieses Kit basiert auf der indirekt-kompetitiven ELISA-Technologie.Die Mikrotiter-Wells sind mit Kopplungsantigen beschichtet.FluequineRest in der Probe konkurriert mit dem auf der Mikrotiterplatte beschichteten Antigen um den Antikörper.Nach der Zugabe von enzymmarkiertem Anti-Antikörper wird TMB-Substrat verwendet, um die Farbe zu zeigen.Die Extinktion der Probe steht in negativem Zusammenhang mit dem darin enthaltenen Tetracyclin, nach Vergleich mit der Standardkurve, multipliziert mit dem Verdünnungsmultiplikator, kann die Flumequin-Rückstandsmenge in der Probe berechnet werden.

Anwendungen

Dieses Kit kann zur quantitativen und qualitativen Analyse von Flumequin-Rückständen in Honig verwendet werden.

Kreuzreaktionen

Fluequine …………………..……………………… 100%

Benötigte Materialien

Ausrüstungen

┅┅Mikrotiterplatten-Spektrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenisator oder Stomacher

┅┅Schüttler

┅┅Vortex-Mischer

┅┅Zentrifugieren

┅┅Analysenwaage (Induktivität: 0,01g)

┅┅Messpipette: 15ml

┅┅Pipettenkugel aus Gummi

┅┅ Polystyrol-Zentrifugenröhrchen: 15 ml, 50 ml

┅┅Reagenzglas aus Glas: 10 ml

┅┅Mikropipetten: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250ml -Multipipette

Reagenzien

┅┅n-Hexan (AR)

┅┅Methylenchlorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Deionisiertes Wasser

-----Konzentrierte Salzsäure (AR)

Kit-Komponenten

● Mikrotiterplatte mit 96 mit Antigen beschichteten Vertiefungen

● Standardlösungen (6 Flaschen × 1 ml/Flasche)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Hochkonzentrierte Standardkontrolle: (1 ml/Flasche)

…………………………………………………......100 ppb

● Enzymkonjugat 12ml………………………... rote Kappe

● Antikörperlösung 7ml …………..……..….…..grüne Kappe

● Lösung A 7ml……..…………………..………..weiße Kappe

● Lösung B 7ml …………….…………..………… rote Kappe

● Stopplösung 7ml ……………………..………gelbe Kappe

● 20fach konzentrierte Waschlösung 40 ml

………………………………………..…..transparente Kappe

●2X Extraktionslösung 50 ml………………...… blaue Kappe

Vorbereitung der Reagenzien

7.1 Honigprobe

Lösung 1: 0,2 M Salzsäurelösung

Gewicht 41,5 ml konzentrierte Salzsäure, mit deionisiertem Wasser auf 500 ml verdünnen.

Lösung 2: Waschlösung

Verdünnen Sie die konzentrierte Waschlösung mit entionisiertem Wasser im Volumenverhältnis 1:19, das zum Waschen der Platten verwendet wird.Die verdünnte Lösung kann 1 Monat bei 4℃ gelagert werden.

Lösung3: Extraktionslösung

Verdünnen Sie die 2× konzentrierte Extraktionslösung mit deionisiertem Wasser im Volumenverhältnis 1:1 (oder je nach Bedarf), das für die Probenextraktion verwendet wird.Diese verdünnte Lösung kann 1 Monat bei 4℃ aufbewahrt werden.

Probenvorbereitungen

8.1 Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen für die Benutzer vor dem Betrieb

(a) Bitte verwenden Sie während des Experiments einmalige Spitzen und wechseln Sie die Spitzen, wenn Sie andere Reagenzien absorbieren.

(b) Stellen Sie sicher, dass alle Versuchsinstrumente sauber sind, da dies sonst das Testergebnis beeinflusst.

8.2Honigprobe

----- 2 g ± 0,05 g Honigprobe in ein 50-ml-Polystyrol-Zentrifugenröhrchen wiegen,

----- 2 ml 0,2 M Salzsäurelösung (Lösung 1) zugeben, vortexen, um sie vollständig zu mischen, dann 8 ml Methylenchlorid zugeben, mit einem Schüttler 5 min schütteln, um sie vollständig aufzulösen;

-----10 min zentrifugieren, mindestens 3000g bei Raumtemperatur (20-25℃);

----- Entfernen Sie die überstehende Phase, nehmen Sie 2 ml der organischen Substratlösung in ein 10-ml-Glasröhrchen. Trocknen Sie das Substrat unter einem Wasserbad mit Stickstoffstrom (50-60 ℃).

-----Füge 1 ml n-Hexan hinzu, wirbele für 30 Sekunden, dann füge 1 ml Extraktionslösung (Lösung 3) hinzu, wirbele erneut für 1 Minute.5min zentrifugieren, mindestens 3000g bei Raumtemperatur (20-25℃);

-----Entfernen Sie die Überstandsphase, nehmen Sie 50 ml für den Assay;

9. Assay-Verfahren

9.1 Hinweis vor dem Assay

9.1.1 Stellen Sie sicher, dass alle Reagenzien und Mikrovertiefungen Raumtemperatur (20-25℃) haben.

9.1.2 Bringen Sie alle restlichen Reagenzien sofort nach Gebrauch wieder auf 2-8℃ zurück.

9.1.3 Das korrekte Waschen der Mikrowells ist ein wichtiger Schritt im Assayverfahren;es ist der lebenswichtige Faktor für die Wiederholbarkeit der ELISA-Analyse.

9.1.4 Vermeiden Sie Licht und decken Sie die Mikrowells während der Inkubation ab.

9.2 Assay-Schritte

9.2.1 Alle Reagenzien bei Raumtemperatur (20-25℃) länger als 30 Minuten entnehmen, vor Gebrauch homogenisieren.

9.2.2 Holen Sie die benötigten Mikrowells heraus und geben Sie den Rest sofort bei 2-8℃ in den Reißverschlussbeutel zurück.

9.2.3 Die verdünnte Waschlösung sollte vor Gebrauch wieder auf Raumtemperatur erwärmt werden.

9.2.4Anzahl:Nummerieren Sie jede Mikrowell-Position und alle Standards und Proben sollten doppelt ausgeführt werden.Notieren Sie die Standards und Probenpositionen.

9.2.5Standardlösung/Probe zugeben:50 µl Standardlösung oder vorbereitete Probe in die entsprechenden Vertiefungen geben.Fügen Sie 50 µl Antikörperlösung hinzu.Durch manuelles Schütteln der Platte vorsichtig mischen und 30 min bei 25℃ mit Deckel inkubieren.

9.2.6Waschen:Entfernen Sie vorsichtig die Abdeckung und reinigen Sie die Flüssigkeit aus den Vertiefungen und spülen Sie die Mikrovertiefungen mit 250 µl verdünnter Waschlösung (Lösung 2) in Intervallen von 10 Sekunden für 4-5 Mal.Restwasser mit saugfähigem Papier aufsaugen (die Restluftblase kann mit unbenutzter Spitze beseitigt werden).

9.2.8.Enzymkonjugat:Geben Sie 100 ml Enzymkonjugatlösung in jede Vertiefung, mischen Sie sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln, und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang bei 25 °C mit Abdeckung.Wiederholen Sie den Waschschritt erneut.

9.2.8Färbung:Geben Sie 50 µl Lösung A und 50 µl Lösung B in jede Vertiefung.Durch manuelles Schütteln der Platte vorsichtig mischen und 15 min bei 25℃ mit Deckel inkubieren (siehe 12.8).

9.2.9Messen:50 µl Stopplösung in jede Vertiefung geben.Mischen Sie vorsichtig, indem Sie die Platte manuell schütteln, und messen Sie die Extinktion bei 450 nm gegen eine Luftleerprobe (es wird empfohlen, mit der dualen Wellenlänge von 450/630 nm zu messen. Lesen Sie das Ergebnis innerhalb von 5 Minuten nach Zugabe der Stopplösung ab.) (Wir können auch durch Sicht messen ohne Stopplösung kurz vor dem ELIASA-Instrument)

Ergebnisse

10,1 Prozent Absorption

Die ermittelten Mittelwerte der Extinktionswerte der Standards und der Proben werden durch den Extinktionswert des ersten Standards (Nullstandard) dividiert und mit 100 % multipliziert.Der Nullstandard wird somit gleich 100 % gesetzt und die Extinktionswerte in Prozent angegeben.

Extinktion (%) = B/B0 × 100 %

B ——Extinktionsstandard (oder Probe)

B0 — Extinktionsnullstandard

10.2 Standardkurve

So zeichnen Sie eine Standardkurve: Nehmen Sie den Extinktionswert der Standards als y-Achse, halblogarithmisch der Konzentration der Flumequin-Standardlösung (ppb) als x-Achse.

--- DasFlumequinDie Konzentration jeder Probe (ppb), die aus der Kalibrierungskurve abgelesen werden kann, wird mit dem entsprechenden Verdünnungsvielfachen jeder gefolgten Probe multipliziert, und die tatsächliche Konzentration der Probe wird erhalten.

Zur Datenreduktion der ELISA-Kits wurde eine spezielle Software entwickelt, die auf Anfrage zur Verfügung gestellt werden kann.

11. Empfindlichkeit, Genauigkeit und Präzision

Empfindlichkeit testen：0,3 ppb

Verdünnungsfaktor der Honigprobe: 2

Nachweisgrenze

Honigprobe ------------------------------------------------ -1ppb

Genauigkeit

Honigprobe --------------------------------------------- 90±20 %

Präzision

Der Variationskoeffizient des ELISA-Kits beträgt weniger als 10 %.

12. Hinweis

12.1 Die Mittelwerte der für die Standards und Proben erhaltenen Extinktionswerte verringern sich, wenn die Reagenzien und Proben nicht auf Raumtemperatur (20-25℃) reguliert wurden.

12.2 Lassen Sie die Mikrowells zwischen den Schritten nicht trocknen, um erfolglose Wiederholungen zu vermeiden, und führen Sie den nächsten Schritt unmittelbar nach dem Klopfen auf den Mikrowell-Halter durch.

12.3.Homogenisieren Sie jedes Reagenz vor der Verwendung.

12.4.Halten Sie Ihre Haut von der Stopplösung fern, da es sich um 2M H handelt₂SO₄Lösung.

12.5 Verwenden Sie keine veralteten Kits.Tauschen Sie die Reagenzien verschiedener Chargen nicht aus, da dies die Empfindlichkeit verringert.

12.6 Lagerbedingungen:

Bewahren Sie die ELISA-Kits bei 2-8℃ auf, frieren Sie sie nicht ein.Rest-Mikrotiterplatten versiegeln Vermeiden Sie während aller Inkubationen direktes Sonnenlicht.Es wird empfohlen, die Mikrotiterplatten abzudecken.

12.7 Anzeichen für das Verderben der Reagenzien:

Substratlösung sollte aufgegeben werden, wenn sie sich verfärbt.

Die Reagenzien können schlecht werden, wenn der Extinktionswert (450/630 nm) des Nullstandards weniger als 0,5 (E450 nm＜0,5) beträgt.

12.8 Die Färbungsreaktion dauert 15 Minuten nach Zugabe von Lösung A und Lösung B. Und Sie können die Inkubationszeit von 20 Minuten auf mehr verlängern, wenn die Farbe zu hell ist, um bestimmt zu werden.Niemals 25min überschreiten, im Gegenteil, die Inkubationszeit ordentlich verkürzen.

12.9 Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 25℃.Höhere oder niedrigere Temperaturen führen zu Änderungen der Empfindlichkeits- und Extinktionswerte.

13. Lagerung

Lagerbedingungen: 2-8℃.

Lagerdauer: 12 Monate.