Product

Test Principe

Deze kit is gebaseerd op indirect-competitieve ELISA-technologie.De microtiterputjes zijn gecoat met koppelingsantigeen.Flumequineresidu in het monster concurreert met het op de microtiterplaat gecoate antigeen om het antilichaam.Na de toevoeging van enzym-gelabeld anti-antilichaam, wordt TMB-substraat gebruikt om de kleur te tonen.De absorptie van het monster is negatief gerelateerd aan de tetracycline die erin zit. Na vergelijking met de standaardcurve, vermenigvuldigd met het verdunningsveelvoud, kan de hoeveelheid Flumequine-residu in het monster worden berekend.

toepassingen

Deze kit kan worden gebruikt bij kwantitatieve en kwalitatieve analyse van flumequine-residu in honing.

Kruisreacties

Flumequine …………………..………………………… 100%

Benodigde materialen

Uitrustingen

┅┅Microtiter plaat spectrofotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenisator of verstuiver

┅┅Shaker

┅┅Vortex-mixer

┅┅Centrifugeer

┅┅Analytische balans (inductie: 0,01 g)

┅┅Pipet met schaalverdeling: 15ml

┅┅Rubberen pipetballon

┅┅Polystyreen centrifugebuis: 15ml, 50ml

┅┅Glazen reageerbuis: 10ml

┅┅Micropipetten: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipet

Reagentia

┅┅n-hexaan (AR)

┅┅Methyleenchloride (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Gedeïoniseerd water

----- Geconcentreerd zoutzuur (AR)

Kit-componenten

● Microtiterplaat met 96 wells gecoat met antigeen

● Standaardoplossingen (6 flessen×1ml/fles)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Hoge concentratie standaard controle:(1ml/fles)

………………………………………………......100ppb

● Enzymconjugaat 12ml…………………………... rode dop

● Antilichaamoplossing 7ml …………..……..….…..groene dop

● Oplossing A 7ml……..……………………..…………..witte dop

● Oplossing B 7ml …………….…………..………… rode dop

● Stopoplossing 7ml …………………..…………gele dop

● 20XGeconcentreerde wasoplossing 40ml

……………………………………..…..transparante dop

●2X Extractie-oplossing 50ml………………...… blauwe dop

Bereiding van reagentia

7.1 Honingmonster

Oplossing 1: 0,2 M zoutzuuroplossing

Gewicht 41,5 ml Geconcentreerd zoutzuur, verdunnen met gedeïoniseerd water tot 500 ml.

Oplossing 2: wasoplossing

Verdun de geconcentreerde wasoplossing met gedeïoniseerd water in de volumeverhouding van 1:19, die zal worden gebruikt voor het wassen van de platen.de verdunde oplossing kan 1 maand bij 4 ℃ worden bewaard.

Oplossing3: extractie-oplossing

Verdun de 2 × geconcentreerde extractieoplossing met gedeïoniseerd water in de volumeverhouding van 1: 1 (of afhankelijk van de behoefte), die zal worden gebruikt voor monsterextractie.Deze verdunde oplossing is 1 maand houdbaar bij 4℃.

Voorbereidingen voor monsters

8.1 Kennisgeving en voorzorgsmaatregelen voor de gebruikers vóór gebruik

(a) Gebruik alstublieft eenmalige tips tijdens het experiment en verander de tips wanneer u een ander reagens absorbeert.

(b) Zorg ervoor dat alle experimentele instrumenten schoon zijn, anders heeft dit invloed op het testresultaat.

8.2Honing monster

----- Weeg 2 g ± 0,05 g honingmonster af in een polystyreen centrifugebuis van 50 ml,

----- Voeg 2 ml 0,2 M zoutzuuroplossing (oplossing 1) toe, vortex om het volledig te mengen, voeg dan 8 ml methyleenchloride toe, schud met shaker gedurende 5 minuten om volledig op te lossen;

----- Centrifugeer gedurende 10 min, minstens 3000 g bij kamertemperatuur (20-25 ℃);

----- Verwijder de supernatantfase, neem 2 ml van de organische substraatoplossing in een glazen buis van 10 ml. Droog het substraat onder een waterbad met stikstofstroom (50-60 ℃)

----- Voeg 1 ml n-hexaan toe, vortex gedurende 30 seconden, voeg dan 1 ml extractieoplossing toe (oplossing 3), vortex opnieuw gedurende 1 minuut.Centrifugeer gedurende 5 minuten, minimaal 3000 g bij kamertemperatuur (20-25 ℃);

----- Verwijder de bovendrijvende fase, neem 50ml voor analyse;

9. Analyseproces

9.1 Kennisgeving vóór de test

9.1.1 Zorg ervoor dat alle reagentia en microwells allemaal op kamertemperatuur zijn (20-25℃).

9.1.2 Breng alle restreagentia onmiddellijk na gebruik terug naar 2-8 ℃.

9.1.3 Het correct wassen van de microwells is een belangrijke stap in het assayproces;het is de vitale factor voor de herhaling van de ELISA-analyse.

9.1.4 Vermijd het licht en bedek de microwells tijdens de incubatie.

9.2 Teststappen

9.2.1 Neem alle reagentia uit bij kamertemperatuur (20-25 ℃) gedurende meer dan 30 minuten, homogeniseer voor gebruik.

9.2.2 Haal de benodigde microwells eruit en doe de rest onmiddellijk terug in de zak met ritssluiting bij 2-8 ℃.

9.2.3 De verdunde wasoplossing moet vóór gebruik opnieuw worden opgewarmd tot kamertemperatuur.

9.2.4Nummer:Nummer elke positie van de microwell en alle standaarden en monsters moeten dubbel uitgevoerd worden.Noteer de normen en monsterposities.

9.2.5Voeg standaard oplossing/monster toe:Voeg 50 µl standaardoplossing of geprepareerd monster toe aan overeenkomstige putjes.Voeg 50 µl antilichaamoplossing toe.Meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden en incubeer gedurende 30 minuten bij 25 ℃ met deksel.

9.2.6Wassen:Verwijder voorzichtig het deksel en zuiver de vloeistof uit de wells en spoel de microwells 4-5 keer met 250 µl verdunde wasoplossing (oplossing 2) met tussenpozen van 10 seconden.Absorbeer het resterende water met absorberend papier (de resterende luchtbel kan worden verwijderd met een ongebruikte tip).

9.2.8.Enzymconjugaat:Voeg enzymconjugaatoplossing 100 ml toe aan elk putje, meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden en incubeer gedurende 30 minuten bij 25 ℃ met deksel.Herhaal de wasstap opnieuw.

9.2.8Kleur:Voeg 50 µl oplossing A en 50 µl oplossing B toe aan elk putje.Meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden en incubeer gedurende 15 min bij 25℃ met deksel (zie 12.8).

9.2.9Meten:Voeg 50 µl stopoplossing toe aan elk putje.Meng voorzichtig door de plaat handmatig te schudden en meet de absorptie bij 450 nm tegen een luchtblanco (het wordt aanbevolen om te meten met de dubbele golflengte van 450/630 nm. Lees het resultaat af binnen 5 minuten na toevoeging van de stopoplossing.) (We kunnen ook op zicht meten zonder stopoplossing in het kort van het ELIASA-instrument)

Resultaten

10,1 Percentage absorptie

De gemiddelde waarden van de absorptiewaarden verkregen voor de standaarden en de monsters worden gedeeld door de absorptiewaarde van de eerste standaard (nulstandaard) en vermenigvuldigd met 100%.Zo wordt de nulnorm gelijk gemaakt aan 100% en worden de absorptiewaarden in procenten weergegeven.

Absorptie (%) = B/B0 ×100%

B ——absorptienorm (of monster)

B0 -- absorptie nul standaard

10.2 Standaardbocht

Om een ​​standaardcurve te tekenen: neem de absorptiewaarde van standaarden als y-as, semi-logaritmisch van de concentratie van de flumequine-standaardoplossing (ppb) als x-as.

--- Deflumequineconcentratie van elk monster (ppb), die kan worden afgelezen van de kalibratiecurve, wordt vermenigvuldigd met het overeenkomstige verdunningsveelvoud van elk gevolgd monster, en de werkelijke concentratie van het monster wordt verkregen.

Voor datareductie van de ELISA-kits is speciale software ontwikkeld, die op aanvraag kan worden geleverd.

11. Gevoeligheid, nauwkeurigheid en precisie

Gevoeligheid testen：0,3ppb

Honing Monsterverdunningsfactor: 2

Detectie limiet

Honingmonster------------------------------------------------ -1ppb

Nauwkeurigheid

Honingmonster --------------------------------------------- 90±20 %

Precisie

Variatiecoëfficiënt van de ELISA-kit is minder dan 10%.

12. Kennisgeving

12.1 De gemiddelde waarden van de absorptiewaarden verkregen voor de standaarden en de monsters worden verlaagd als de reagentia en monsters niet op kamertemperatuur (20-25℃) zijn gebracht.

12.2 Laat de microwells niet tussen de stappen drogen om mislukte herhalingen te voorkomen en voer de volgende stap onmiddellijk uit nadat u op de microwells-houder hebt getikt.

12.3.Homogeniseer elk reagens voor gebruik.

12.4.Houd uw huid uit de buurt van de stopoplossing, want het is de 2M H₂SO₄oplossing.

12.5 Gebruik geen verouderde kits.Wissel de reagentia van verschillende batches niet uit, dit zal de gevoeligheid verminderen.

12.6 Bewaarconditie:

Houd de ELISA-kits op 2-8 ℃, bevries niet.Seal rest microwell-platen Vermijd direct zonlicht tijdens alle incubaties.Het wordt aanbevolen om de microtiterplaten af ​​te dekken.

12.7 Indicaties voor het bederven van de reagentia:

Substraatoplossing moet worden verlaten als deze kleuren verandert.

De reagentia kunnen slecht worden als de absorptiewaarde (450/630nm) van de nulstandaard lager is dan 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 De kleuringsreactie heeft 15 minuten nodig na het toevoegen van oplossing A en oplossing B. En u kunt de incubatietijd verlengen van 20 minuten tot meer als de kleur te licht is om te bepalen.Nooit meer dan 25 min. Integendeel, verkort de incubatietijd goed.

12.9 De optimale reactietemperatuur is 25℃.Hogere of lagere temperaturen leiden tot veranderingen in gevoeligheid en absorptiewaarden.

13. Opslag

Bewaarconditie: 2-8℃.

Bewaartermijn: 12 maanden.