პროდუქტი

ტესტის პრინციპი

ეს ნაკრები ეფუძნება არაპირდაპირ კონკურენტულ ELISA ტექნოლოგიას.მიკროტიტრის ჭაბურღილები დაფარულია დაწყვილების ანტიგენით.ფლუმეკინინიმუშში ნარჩენი კონკურენციას უწევს მიკროტიტრულ ფირფიტაზე დაფარულ ანტიგენს ანტისხეულისთვის.ფერმენტის საწინააღმდეგო ანტისხეულების დამატების შემდეგ, TMB სუბსტრატი გამოიყენება ფერის საჩვენებლად.ნიმუშის აბსორბცია უარყოფითად არის დაკავშირებული მასში არსებულ ტეტრაციკლინთან, სტანდარტულ მრუდთან შედარების შემდეგ, გამრავლებული განზავების მრავალჯერადზე, შეიძლება გამოითვალოს ფლუმეკინის ნარჩენების რაოდენობა ნიმუშში.

აპლიკაციები

ეს ნაკრები შეიძლება გამოყენებულ იქნას თაფლში ფლუმექინის ნარჩენების რაოდენობრივ და ხარისხობრივ ანალიზში.

ჯვარედინი რეაქციები

ფლუმექინი …………………………………………… 100%

საჭირო მასალები

მოწყობილობები

┅┅ მიკროტიტრული ფირფიტის სპექტროფოტომეტრი (450 ნმ/630 ნმ)

┅┅ჰომოგენიზატორი ან კუჭის შემქმნელი

┅┅შეიქერი

┅┅Vortex მიქსერი

┅┅ცენტრიფუგა

┅┅ანალიტიკური ბალანსი (ინდუქციურობა: 0,01გ)

┅┅გრადუირებული პიპეტი: 15მლ

┅┅ რეზინის პიპეტის ნათურა

┅┅პოლისტიროლის ცენტრიფუგა ტუბი: 15მლ, 50მლ

┅┅ მინის სინჯარა: 10მლ

┅┅ მიკროპიპეტები: 20მლ-200მლ, 100მლ-10000მლ,

250მლ -მულტიპიპეტი

რეაგენტები

┅┅n-ჰექსანი (AR)

┅┅მეთილენქლორიდი (AR)

┅┅ აცეტონიტრილი (AR)

┅┅დეიონიზებული წყალი

-----კონცენტრირებული მარილმჟავა (AR)

ნაკრების კომპონენტები

● მიკროტიტრული ფირფიტა 96 ჭაბურღილით დაფარული ანტიგენით

● სტანდარტული ხსნარები (6 ბოთლი × 1 მლ / ბოთლი)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● მაღალი კონცენტრაციის სტანდარტული კონტროლი: (1მლ/ბოთლი)

……………………………………………………………100ppb

● ფერმენტის კონიუგატი 12მლ………………………… წითელი თავსახური

● ანტისხეულების ხსნარი 7მლ …………………………………..მწვანე ქუდი

● ხსნარი A 7 მლ………………………………………..თეთრი თავსახურით

● ხსნარი B 7მლ ……………………………..………… წითელი თავსახური

● შესაჩერებელი ხსნარი 7მლ …………………………………ყვითელი თავსახურით

● 20X კონცენტრირებული სარეცხი ხსნარი 40მლ

…………………………………………………..გამჭვირვალე ქუდი

●2X ექსტრაქციის ხსნარი 50მლ…………………………………………………………………………………………………

რეაგენტების მომზადება

7.1 თაფლის ნიმუში

ხსნარი 1: 0,2 მ მარილმჟავას ხსნარი

წონა 41,5 მლ კონცენტრირებული მარილმჟავა, განზავდეს დეიონიზებული წყლით 500 მლ-მდე.

გამოსავალი 2: სარეცხი ხსნარი

კონცენტრირებული სარეცხი ხსნარი განზავდეს დეიონირებული წყლით მოცულობითი თანაფარდობით 1:19, რომელიც გამოყენებული იქნება ფირფიტების გასარეცხად.განზავებული ხსნარი შეიძლება ინახებოდეს 4℃ ტემპერატურაზე 1 თვის განმავლობაში.

გამოსავალი3: ექსტრაქციის ხსნარი

განზავდეს 2×კონცენტრირებული ექსტრაქციის ხსნარი დეიონიზებული წყლით მოცულობითი თანაფარდობით 1:1 (ან მოთხოვნიდან გამომდინარე), რომელიც გამოყენებული იქნება ნიმუშის ამოღებისთვის.ამ გაზავებული ხსნარის შენახვა შესაძლებელია 1 თვის განმავლობაში 4℃ ტემპერატურაზე.

ნიმუშების მომზადება

8.1 გაფრთხილება და სიფრთხილის ზომები მომხმარებლისთვის ექსპლუატაციამდე

(ა) გთხოვთ, გამოიყენოთ ერთჯერადი რჩევები ექსპერიმენტის პროცესში და შეცვალოთ რჩევები სხვადასხვა რეაგენტის შთანთქმისას.

(ბ) დარწმუნდით, რომ ყველა ექსპერიმენტული ინსტრუმენტი სუფთაა, წინააღმდეგ შემთხვევაში ეს გავლენას მოახდენს ანალიზის შედეგზე.

8.2თაფლის ნიმუში

-----აწონეთ 2გ±0,05გრ თაფლის ნიმუში 50მლ პოლისტიროლის ცენტრიფუგა მილში,

-----დაამატეთ 2მლ 0,2 მ მარილმჟავას ხსნარი (ხსნარი 1), მორევა, რათა მთლიანად შეურიოს, შემდეგ დაუმატეთ 8მლ მეთილენქლორიდი, შეანჯღრიეთ შეიკერით 5 წუთის განმავლობაში, რომ მთლიანად გაიხსნას;

----- ცენტრიფუგა 10 წთ, მინიმუმ 3000გ ოთახის ტემპერატურაზე (20-25℃);

----- ამოიღეთ ზენატანის ფაზა, გადაიტანეთ 2 მლ სუბსტრატის ორგანული ხსნარი 10 მლ მინის მილში. გააშრეთ სუბსტატი აზოტის ნაკადის წყლის აბანოში (50-60℃)

-----დაამატეთ 1 მლ n-ჰექსანი, მორევი 30 წმ, შემდეგ დაამატეთ 1 მლ ექსტრაქციის ხსნარი (ხსნარი 3), კვლავ ადუღეთ 1 წუთის განმავლობაში.ცენტრიფუგა 5 წუთის განმავლობაში, მინიმუმ 3000 გ ოთახის ტემპერატურაზე (20-25℃);

----- ამოიღეთ ზენატანის ფაზა, მიიღეთ 50მლ ანალიზისთვის;

9. ანალიზის პროცესი

9.1 შენიშვნა ანალიზის წინ

9.1.1 დარწმუნდით, რომ ყველა რეაგენტი და მიკროჭაჭა ოთახის ტემპერატურაზეა (20-25℃).

9.1.2 დააბრუნეთ ყველა დანარჩენი რეაგენტი გამოყენების შემდეგ დაუყოვნებლივ 2-8℃ ტემპერატურაზე.

9.1.3 მიკროჭის სწორად გარეცხვა მნიშვნელოვანი ნაბიჯია ანალიზის პროცესში;ეს არის ELISA ანალიზის განმეორებადობის სასიცოცხლო ფაქტორი.

9.1.4 მოერიდეთ შუქს და დააფარეთ მიკროჭები ინკუბაციის დროს.

9.2 ანალიზის საფეხურები

9.2.1 გამოიღეთ ყველა რეაგენტი ოთახის ტემპერატურაზე (20-25℃) 30 წუთზე მეტი ხნის განმავლობაში, გამოყენებამდე ჰომოგენიზაცია.

9.2.2 ამოიღეთ საჭირო მიკროჭები და დაუყონებლივ დააბრუნეთ ელვა შესაკრავის ჩანთაში 2-8℃ ტემპერატურაზე.

9.2.3 განზავებული სარეცხი ხსნარი გამოყენებამდე უნდა გაათბო, რათა ოთახის ტემპერატურაზე იყოს.

9.2.4ნომერი:დანომრეთ ყოველი მიკროჭის პოზიცია და ყველა სტანდარტი და ნიმუში უნდა იყოს დუბლიკატში.ჩაწერეთ სტანდარტები და ნიმუშების პოზიციები.

9.2.5დაამატეთ სტანდარტული ხსნარი/ნიმუში:დაამატეთ 50 μl სტანდარტული ხსნარი ან მომზადებული ნიმუში შესაბამის ჭებში.დაამატეთ 50 μl ანტისხეულების ხსნარი.ნაზად აურიეთ თეფში ხელით შეანჯღრიეთ და ინკუბაცია 30 წუთის განმავლობაში 25℃ სახურავით.

9.2.6Სარეცხი:ნაზად ამოიღეთ საფარი და გამოასუფთავეთ სითხე ჭებიდან და ჩამოიბანეთ მიკროჭები 250 μl განზავებული სარეცხი ხსნარით (ხსნარი 2) 10 წამის ინტერვალით 4-5 ჯერ.შეიწოვეთ ნარჩენი წყალი შთამნთქმელი ქაღალდით (დარჩენილი ჰაერის ბუშტი შეიძლება აღმოიფხვრას გამოუყენებელი წვერით).

9.2.8.ფერმენტის კონიუგატი:თითოეულ ჭაბურღილში დაამატეთ ფერმენტის კონიუგატის ხსნარი 100 მლ, ნაზად აურიეთ ფირფიტა ხელით შეანჯღრიეთ და ინკუბაცია 30 წუთის განმავლობაში 25℃-ზე სახურავით.კვლავ გაიმეორეთ სარეცხი ნაბიჯი.

9.2.8შეფერილობა:თითოეულ ჭაბურღილს დაამატეთ 50 μl A და 50 μl ხსნარი B.ნაზად შეურიეთ ფირფიტა ხელით შეანჯღრიეთ და ინკუბაცია 15 წუთის განმავლობაში 25℃-ზე საფარით (იხ. 12.8).

9.2.9გაზომეთ:თითოეულ ჭაბურღილს დაუმატეთ 50µl საცობი ხსნარი.ნაზად შეურიეთ ფირფიტა ხელით შეანჯღრიეთ და გაზომეთ შთანთქმა 450 ნმ-ზე ჰაერის ბლანკთან მიმართებაში (სავარაუდოა გაზომვა ორმაგი ტალღის სიგრძით 450/630 ნმ. წაიკითხეთ შედეგი გაჩერების ხსნარის დამატების შემდეგ 5 წუთში. ) (ჩვენ ასევე შეგვიძლია გავზომოთ ხედვით. გაჩერების ხსნარის გარეშე ELIASA ინსტრუმენტის მოკლედ)

შედეგები

10.1 პროცენტული შთანთქმა

სტანდარტებისთვის და ნიმუშებისთვის მიღებული შთანთქმის მნიშვნელობების საშუალო მნიშვნელობები იყოფა პირველი სტანდარტის შთანთქმის მნიშვნელობაზე (ნულოვანი სტანდარტი) და მრავლდება 100%-ზე.ნულოვანი სტანდარტი ამგვარად კეთდება 100%-ის ტოლი და შთანთქმის მნიშვნელობები ციტირებულია პროცენტებში.

აბსორბცია (%) = B/B0 ×100%

B - შთანთქმის სტანდარტი (ან ნიმუში)

B0 — — შთანთქმის ნულოვანი სტანდარტი

10.2 სტანდარტული მრუდი

სტანდარტული მრუდის დახაზვა: აიღეთ სტანდარტების შთანთქმის მნიშვნელობა, როგორც y ღერძი, ფლუმექინის სტანდარტების ხსნარის კონცენტრაციის ნახევრად ლოგარითმული (ppb) x ღერძის სახით.

---ფლუმექინითითოეული ნიმუშის კონცენტრაცია (ppb), რომლის წაკითხვაც შესაძლებელია კალიბრაციის მრუდიდან, მრავლდება თითოეული ნიმუშის შესაბამისი განზავების ჯერადზე და მიიღება ნიმუშის რეალური კონცენტრაცია.

ELISA კომპლექტების მონაცემთა შემცირებისთვის შემუშავებულია სპეციალური პროგრამული უზრუნველყოფა, რომლის მიწოდება შესაძლებელია მოთხოვნის შემთხვევაში.

11. მგრძნობელობა, სიზუსტე და სიზუსტე

ტესტის მგრძნობელობა:0.3ppb

თაფლის ნიმუშის განზავების ფაქტორი: 2

გამოვლენის ლიმიტი

თაფლის ნიმუში---------------------------------------------- -1ppb

სიზუსტე

თაფლის ნიმუში -------------------------------------------- 90±20 %

სიზუსტე

ELISA ნაკრების ვარიაციის კოეფიციენტი 10%-ზე ნაკლებია.

12. შენიშვნა

12.1 სტანდარტებისა და ნიმუშებისთვის მიღებული შთანთქმის მნიშვნელობების საშუალო მნიშვნელობები შემცირდება, თუ რეაგენტები და ნიმუშები არ იქნება დარეგულირებული ოთახის ტემპერატურაზე (20-25℃).

12.2 არ დაუშვათ მიკროჭის გაშრობა საფეხურებს შორის, რათა თავიდან აიცილოთ წარუმატებელი გამეორება და ამუშავეთ შემდეგი ნაბიჯი მიკროჭების დამჭერის შეხებისთანავე.

12.3.გამოყენებამდე თითოეული რეაგენტის ჰომოგენიზაცია.

12.4.შეინახეთ კანი მოშორებით სტოპ ხსნარისგან, რადგან ის არის 2M H₂SO₄გამოსავალი.

12.5 არ გამოიყენოთ მოძველებული ნაკრები.არ შეცვალოთ სხვადასხვა პარტიების რეაგენტები, რადგან ეს ამცირებს მგრძნობელობას.

12.6 შენახვის მდგომარეობა:

შეინახეთ ELISA ნაკრები 2-8℃ ტემპერატურაზე, არ გაყინოთ.დალუქეთ მიკროჭის ფირფიტები მოერიდეთ მზის პირდაპირ სხივებს ყველა ინკუბაციის დროს.რეკომენდებულია მიკროტიტრული ფირფიტების დაფარვა.

12.7 ჩვენებები რეაგენტების გაუარესების შესახებ:

სუბსტრატის ხსნარი უნდა იყოს მიტოვებული, თუ ის ფერადდება.

რეაგენტები შეიძლება გაფუჭდეს, თუ ნულოვანი სტანდარტის შთანთქმის მნიშვნელობა (450/630 ნმ) ნაკლებია 0,5-ზე (A450 ნმ-0,5).

12.8 შეფერილობის რეაქციას სჭირდება 15 წუთი A და ხსნარის B ხსნარის დამატების შემდეგ. და შეგიძლიათ გააგრძელოთ ინკუბაციური დრო 20 წუთიდან მეტზე, თუ ფერი ძალიან ღიაა დასადგენისთვის.არასოდეს გადააჭარბოთ 25 წუთს, პირიქით, სწორად შეამცირეთ ინკუბაციის დრო.

12.9 რეაქციის ოპტიმალური ტემპერატურაა 25℃.უფრო მაღალი ან დაბალი ტემპერატურა გამოიწვევს მგრძნობელობისა და შთანთქმის მნიშვნელობების ცვლილებას.

13. შენახვა

შენახვის პირობები: 2-8℃.

შენახვის ვადა: 12 თვე.