ምርት

የሙከራ መርህ

ይህ ኪት በተዘዋዋሪ-ተወዳዳሪ ELISA ቴክኖሎጂ ላይ የተመሰረተ ነው።የማይክሮቲተር ጉድጓዶች በተጣመረ አንቲጂን ተሸፍነዋል.Flumequineበናሙናው ውስጥ ያለው ቅሪት ለፀረ እንግዳ አካላት በማይክሮቲተር ሳህን ላይ ከተሸፈነው አንቲጂን ጋር ይወዳደራል።ፀረ-ፀረ-አንቲቦይድ የተለጠፈ ኢንዛይም ከተጨመረ በኋላ, TMB substrate ቀለሙን ለማሳየት ይጠቅማል.የናሙና መምጠጥ በውስጡ ከሚኖረው tetracycline ጋር በአሉታዊ መልኩ ይዛመዳል፣ ከስታንዳርድ ከርቭ ጋር በማነፃፀር በዲሉሽን ብዜት ተባዝቶ በናሙናው ውስጥ ያለው የፍሉሜኩዊን ቀሪ መጠን ሊሰላ ይችላል።

መተግበሪያዎች

ይህ ኪት በማር ውስጥ ስላለው የፍሉሜኩዊን ቅሪት በቁጥር እና በጥራት ትንተና ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።

ተሻጋሪ ምላሽ

ፍሉሜኩዊን …………………………………………………………………………………………

የሚያስፈልጉ ቁሳቁሶች

መሳሪያዎች

┅┅ ማይክሮቲተር ፕሌትስ ስፔክሮፎቶሜትር (450nm/630nm)

┅┅ ሆሞጀኒዘር ወይም ሆድ ሰሪ

┅┅ ሻከር

┅┅ የቮርቴክስ ማደባለቅ

┅┅ ሴንትሪፉጅ

┅┅ የትንታኔ ሚዛን (ኢንደክሽን፡ 0.01ግ)

┅┅የተመረቀ pipette: 15ml

┅┅የላስቲክ ፒፕት አምፖል

┅┅ ፖሊስቲሪሬን ሴንትሪፉጅ ቱቦ፡ 15ml፣ 50ml

┅┅የመስታወት መሞከሪያ ቱቦ፡10ml

┅┅ ማይክሮፒፔትስ: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ሚሊ - ባለብዙ ፓይፔት

ሬጀንቶች

┅┅n-hexane(AR)

┅┅ሜቲሊን ክሎራይድ(AR)

┅┅አሴቶኒትሪል(AR)

┅┅የቀዘቀዘ ውሃ

--የተከማቸ ሃይድሮክሎሪክ አሲድ(AR)

Kit ክፍሎች

● ማይክሮቲተር ፕላስቲን ከ 96 ጉድጓዶች ጋር በአንቲጂን የተሸፈነ

● መደበኛ መፍትሄዎች (6 ጠርሙሶች × 1ml / ጠርሙስ)

0ppb፣ 0.3ppb፣ 1.2ppb፣ 4.8ppb፣ 19.2ppb፣ 76.8ppb

● ከፍተኛ የማጎሪያ መደበኛ ቁጥጥር:(1ml/ጠርሙስ)

…………………………………………………………………100 ፒ.ቢ

● ኢንዛይም conjugate 12ml………………………………. ቀይ ካፕ

● ፀረ እንግዳ አካላት መፍትሄ 7ml …………………………………….. አረንጓዴ ካፕ

● መፍትሄ A 7ml …………………………………………………………. ነጭ ካፕ

● መፍትሄ B 7ml ………………………………………………………………… ቀይ ካፕ

● የማቆም መፍትሄ 7ml …………………………………………………………

● 20X ኮንሰንትሬትድ ማጠቢያ መፍትሄ 40ml

……………………………………………………………

●2X የማውጣት መፍትሄ 50ml………………………………. ሰማያዊ ካፕ

Reagents ዝግጅት

7.1 የማር ናሙና

መፍትሄ 1: 0.2 ሜ ሃይድሮክሎሪክ አሲድ መፍትሄ

ክብደት 41.5ml የተከማቸ ሃይድሮክሎሪክ አሲድ , በተቀነሰ ውሃ ወደ 500 ሚሊ ሊትር.

መፍትሄ 2: መፍትሄን ማጠብ

በ 1:19 የድምፅ መጠን ውስጥ የተከማቸ ማጠቢያ መፍትሄን በዲዮኒዝድ ውሃ ይቀንሱ, ይህም ሳህኖቹን ለማጠብ ያገለግላል.የተቀላቀለው መፍትሄ በ 4 ℃ ውስጥ ለ 1 ወር ሊከማች ይችላል.

መፍትሄ3: የማውጣት መፍትሄ

በ 1: 1 (ወይንም እንደአስፈላጊነቱ የሚወሰን) የ 2 × የተከማቸ የማውጫ መፍትሄን በዲዮኒዝድ ውሃ ይቀንሱ, ይህም ለናሙና ለማውጣት ያገለግላል.ይህ የተዳከመ መፍትሄ ለ 1 ወር በ 4 ℃ ውስጥ ሊከማች ይችላል.

የናሙና ዝግጅት

8.1 ከመተግበሩ በፊት ለተጠቃሚዎች ማሳሰቢያ እና ጥንቃቄዎች

(ሀ) እባክዎን በሙከራ ሂደት ውስጥ የአንድ ጊዜ ጠቃሚ ምክሮችን ይጠቀሙ እና የተለያዩ ሪአጀንትን በሚስቡበት ጊዜ ምክሮቹን ይለውጡ።

(ለ) ሁሉም የሙከራ መሳሪያዎች ንፁህ መሆናቸውን ያረጋግጡ፣ አለበለዚያ የምርመራውን ውጤት ያስገኛል.

8.2የማር ናሙና

--2g±0.05g የማር ናሙና ወደ 50ml polystyrene centrifuge tube

---2ml 0.2M Hydrochloric acid solution (መፍትሄ 1)፣ ሙሉ ለሙሉ ለመደባለቅ አዙሪት፣ ከዚያም 8ml ሚቲሊን ክሎራይድ ይጨምሩ፣ ሙሉ በሙሉ ለመሟሟት ለ 5min ያህል በሻከር ያናውጡ።

-- ሴንትሪፉጅ ለ 10 ደቂቃ, ቢያንስ 3000 ግራም በክፍል ሙቀት (20-25 ℃);

--የላይኛውን ክፍል ያስወግዱ ፣ 2 ሚሊር የንጥረ-ነገር ኦርጋኒክ መፍትሄን ወደ 10 ሚሊር የመስታወት ቱቦ ይውሰዱ ። በናይትሮጅን ፍሰት (50-60 ℃) የውሃ መታጠቢያ ስር ንዑስ ስቴቱን ያድርቁት።

---1 ml n-hexane, vortex ለ 30s ይጨምሩ እና ከዚያ 1ml የማውጣት መፍትሄ (መፍትሄ 3) ይጨምሩ, አዙሪት እንደገና ለ 1 ደቂቃ ይጨምሩ.ሴንትሪፉጅ ለ 5 ደቂቃ ፣ ቢያንስ 3000 ግ በክፍል ሙቀት (20-25 ℃);

--የላይኛውን ክፍል ያስወግዱ፣ 50ml ለምርመራ ይውሰዱ።

9. የመመርመሪያ ሂደት

9.1 ከመመርመሩ በፊት ያስተውሉ

9.1.1 ሁሉም ሬጀንቶች እና ማይክሮዌልች ሁሉም በክፍል ሙቀት (20-25 ℃) መሆናቸውን ያረጋግጡ።

9.1.2 ሁሉንም የቀሩትን ሬጀንቶች ከተጠቀሙ በኋላ ወዲያውኑ ወደ 2-8 ℃ ይመልሱ።

9.1.3 ማይክሮዌልን በትክክል ማጠብ በምርመራው ሂደት ውስጥ አስፈላጊ እርምጃ ነው;ለ ELISA ትንተና ተደጋጋሚነት ወሳኝ ነገር ነው።

9.1.4 መብራቱን ያስወግዱ እና ማይክሮዌልቶችን በክትባት ጊዜ ይሸፍኑ.

9.2 የመመርመሪያ ደረጃዎች

9.2.1 ሁሉንም ሬጀንቶች በክፍል ሙቀት (20-25 ℃) ከ 30 ደቂቃ በላይ ይውሰዱ ፣ ከመጠቀምዎ በፊት ተመሳሳይነት ያድርጉ።

9.2.2 የሚፈለጉትን ማይክሮዌልች አውጥተው ቀሪውን ወደ ዚፕ መቆለፊያ ቦርሳ ከ2-8℃ ወዲያውኑ ይመልሱ።

9.2.3 የተቀላቀለው ማጠቢያ መፍትሄ ከመጠቀምዎ በፊት በክፍል ሙቀት ውስጥ እንዲሞቅ መደረግ አለበት.

9.2.4ቁጥር፡-የእያንዳንዱን ማይክሮዌል አቀማመጥ ቁጥር እና ሁሉም ደረጃዎች እና ናሙናዎች በሁለት ቅጂዎች መከናወን አለባቸው.ደረጃዎችን እና የናሙና ቦታዎችን ይመዝግቡ።

9.2.5መደበኛ መፍትሄ/ናሙና አክል፡ወደ ተጓዳኝ ጉድጓዶች 50 μl መደበኛ መፍትሄ ወይም የተዘጋጀ ናሙና ይጨምሩ።50µl ፀረ እንግዳ አካላት መፍትሄ ይጨምሩ።ሳህኑን በእጅ በማወዛወዝ በቀስታ ይቀላቅሉ እና ለ 30 ደቂቃዎች በ 25 ℃ ሽፋን ይሸፍኑ።

9.2.6ማጠብ፡ሽፋኑን በቀስታ ያስወግዱ እና ፈሳሹን ከጉድጓድ ውስጥ ያፅዱ እና ማይክሮዌሎችን በ 250µl የተበረዘ የመታጠቢያ መፍትሄ (መፍትሄ 2) በ 10 ሰከንድ ለ 4-5 ጊዜ ያጠቡ ።የተረፈውን ውሃ በሚስብ ወረቀት (የተቀረው የአየር አረፋ ጥቅም ላይ ባልዋለ ጫፍ ሊወገድ ይችላል)።

9.2.8.የኢንዛይም ውህደት;በእያንዳንዱ ጉድጓድ ውስጥ የኢንዛይም ኮንጁጌት መፍትሄ 100ml ይጨምሩ ፣ ሳህኑን በእጅ በመነቅነቅ በቀስታ ይቀላቅሉ እና ለ 30 ደቂቃዎች በ 25 ℃ ከሽፋኑ ጋር ያፍሱ።የመታጠቢያውን ደረጃ እንደገና ይድገሙት.

9.2.8ቀለምበእያንዳንዱ ጉድጓድ 50µl መፍትሄ A እና 50µl መፍትሄ B ይጨምሩ።ሳህኑን በእጅ በማወዛወዝ በቀስታ ይቀላቅሉ እና ለ 15 ደቂቃዎች በ 25 ℃ ከሽፋኑ ጋር ይንቁ (12.8 ይመልከቱ)።

9.2.9ለካ፡በእያንዳንዱ ጉድጓድ ውስጥ 50µl የማቆሚያውን መፍትሄ ይጨምሩ.ሳህኑን በእጅ በማወዛወዝ በቀስታ ይቀላቅሉ እና መምጠጥን በ 450 nm በአየር ባዶ ላይ ይለኩ (በ 450/630 nm ባለሁለት-ሞገድ ርዝመት እንዲለካ ይመከራል ። የማቆሚያ መፍትሄ ከተጨመረ በኋላ ውጤቱን በ 5 ደቂቃ ውስጥ ያንብቡ ።) (በተጨማሪም በእይታ መለካት እንችላለን) ያለማቋረጥ መፍትሄ ከኤሊያሳ መሳሪያ አጭር)

ውጤቶች

10.1 መቶኛ መምጠጥ

ለመመዘኛዎቹ የተገኙት የመምጠጥ እሴቶች አማካኝ እሴቶች እና ናሙናዎች በመጀመሪያው ስታንዳርድ (ዜሮ ስታንዳርድ) የመምጠጥ ዋጋ የተከፋፈሉ እና በ 100% ተባዝተዋል።የዜሮ መስፈርቱ ከ 100% ጋር እኩል ነው እና የመምጠጥ እሴቶቹ በመቶኛ ይጠቀሳሉ።

መምጠጥ (%) = B/B0 ×100%

B —— የመጠጣት ደረጃ (ወይም ናሙና)

B0 ——የመምጠጥ ዜሮ መስፈርት

10.2 መደበኛ ከርቭ

መደበኛ ከርቭ ለመሳል፡ የመመዘኛዎችን የመምጠጥ ዋጋ እንደ y-ዘንግ፣ ከፊል ሎጋሪዝም የፍሉሜኩዊን ደረጃዎች መፍትሄ (ppb) ትኩረት እንደ x-ዘንግ ይውሰዱ።

--- የflumequineከካሊብሬሽን ከርቭ የሚነበበው የእያንዳንዱ ናሙና (ppb) ማጎሪያ፣ በእያንዳንዱ ናሙና በሚከተለው ተጓዳኝ የዲሉሽን ብዜት ተባዝቶ ትክክለኛው የናሙና ትኩረት ተገኝቷል።

የ ELISA ኪት መረጃን ለመቀነስ ልዩ ሶፍትዌር ተዘጋጅቷል ይህም በጥያቄ ሊቀርብ ይችላል።

11. ስሜታዊነት, ትክክለኛነት እና ትክክለኛነት

ትብነት ፈትኑ፦0.3 ፒ.ቢ

የማር ናሙና የመሟሟት ሁኔታ፡ 2

የማወቅ ገደብ

የማር ናሙና --------------------------------- -1 ፒ.ቢ

ትክክለኛነት

የማር ናሙና -------------------------------------------------- 90 ± 20 %

ትክክለኛነት

የ ELISA ኪት ልዩነት ከ 10% ያነሰ ነው.

12. ማሳሰቢያ

12.1 ለመመዘኛዎቹ የተገኙት የመምጠጥ እሴቶቹ አማካኝ እሴቶች እና ናሙናዎቹ የሚቀነሱት ሬጀንቶች እና ናሙናዎች ወደ ክፍል የሙቀት መጠን (20-25 ℃) ካልተስተካከለ ነው።

12.2 ማይክሮዌል (ማይክሮዌል) እንዳይደርቅ በደረጃዎች መካከል እንዲደርቅ አይፍቀዱ ።

12.3.ከመጠቀምዎ በፊት እያንዳንዱን reagen ያድርጉ።

12.4.ቆዳዎን ከማቆሚያው መፍትሄ ያርቁ ምክንያቱም 2M H ነው₂SO₄መፍትሄ.

12.5 ኪቶቹን ጊዜው ያለፈበት አይጠቀሙ።የተለያዩ ስብስቦችን ሬጀንተሮችን አትለዋወጡ፣ ምክንያቱም ስሜትን ይቀንሳል።

12.6 የማከማቻ ሁኔታ;

የELISA ዕቃዎችን ከ2-8 ℃ ላይ ያቆዩት ፣ አይቀዘቅዝም።የማኅተም ማረፊያ የማይክሮዌል ሳህኖች በሁሉም የመፈልፈያ ጊዜ ቀጥተኛ የፀሐይ ብርሃንን ያስወግዱ።የማይክሮቲተር ንጣፎችን መሸፈን ይመከራል.

12.7 የመጥፎ አካላት ምልክቶች

ቀለሞችን ከቀየሩ የንጥረ-ነገር መፍትሄ መተው አለበት.

የዜሮ መስፈርቱ የመምጠጥ ዋጋ (450/630nm) ከ0.5 (A450nm＜0.5) ያነሰ ከሆነ ሬጀንቶቹ መጥፎ ሊሆኑ ይችላሉ።

12.8 የቀለማት ምላሽ መፍትሄ A እና መፍትሄ B ከተጨመረ በኋላ 15 ደቂቃ ያስፈልገዋል. እና ቀለሙን ለመለየት በጣም ቀላል ከሆነ የመታቀፉን ጊዜ ከ 20 ደቂቃ ወደ ብዙ ማራዘም ይችላሉ.ከ 25 ደቂቃ መብለጥ የለበትም ፣ በተቃራኒው ፣ የመታቀፉን ጊዜ በትክክል ያሳጥሩ።

12.9 ጥሩው የምላሽ ሙቀት 25 ℃ ነው።ከፍ ያለ ወይም ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ወደ ስሜታዊነት እና የመሳብ እሴቶች ለውጦች ይመራል።

13. ማከማቻ

የማከማቻ ሁኔታ: 2-8 ℃.

የማከማቻ ጊዜ: 12 ወራት.