ምርት

1. ዳራ

ታይሎሲንማክሮሮይድ አንቲባዮቲክ ነው, እሱም በዋናነት ፀረ-ባክቴሪያ እና ፀረ-ማይኮፕላዝማ.ይህ መድሃኒት በተወሰኑ ቡድኖች ላይ ከባድ የጎንዮሽ ጉዳት ሊያስከትል ስለሚችል ጥብቅ ኤምአርኤልዎች ተመስርተዋል.

ይህ ኪት በELISA ቴክኖሎጂ ላይ የተመሰረተ አዲስ ምርት ነው ፈጣን፣ ቀላል፣ ትክክለኛ እና ሚስጥራዊነት ያለው ከተለመደው የመሳሪያ ትንተና ጋር ሲነጻጸር እና በአንድ ኦፕሬሽን ውስጥ 1.5 ሰአት ብቻ የሚያስፈልገው፣ የክዋኔ ስህተትን እና የስራ ጥንካሬን በእጅጉ ሊቀንስ ይችላል።

2. የሙከራ መርህ

ይህ ኪት በተዘዋዋሪ-ተወዳዳሪ ELISA ቴክኖሎጂ ላይ የተመሰረተ ነው።የማይክሮቲተር ጉድጓዶች በተጣመረ አንቲጂን ተሸፍነዋል.በናሙናው ውስጥ ያለው የታይሎሲን ቅሪት ለፀረ እንግዳ አካላት በማይክሮቲተር ሰሃን ላይ ከተሸፈነው አንቲጂን ጋር ይወዳደራል።ፀረ-ፀረ-አንቲቦይድ የተለጠፈ ኢንዛይም ከተጨመረ በኋላ, TMB substrate ቀለሙን ለማሳየት ይጠቅማል.የናሙና መምጠጥ በውስጡ ከሚኖረው ታይሎሲን ጋር በአሉታዊ መልኩ ይዛመዳል፣ ከስታንዳርድ ከርቭ ጋር በማነፃፀር፣ በ dilution factor ተባዝቶ፣ በናሙናው ውስጥ ያለው የታይሎሲን ቀሪ መጠን ሊሰላ ይችላል።

3. መተግበሪያዎች

ይህ ኪት በእንስሳት ቲሹ (የዶሮ፣ የአሳማ ሥጋ፣ ዳክዬ) እና ወተት፣ ማር፣ እንቁላል ወ.ዘ.ተ የታይሎሲን ቅሪት ላይ በቁጥር እና በጥራት ትንተና ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።

4. ተሻጋሪ ምላሽ

ታይሎሲን …………………………………………………………………………………………

ቲልሚኮሲን …………………………………………………………………………

5. የሚያስፈልጉ ቁሳቁሶች

5.1 መሳሪያዎች:

---- የማይክሮቲተር ፕሌትስ ስፔክሮፖቶሜትር (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator ወይም ናይትሮጅን ማድረቂያ መሳሪያዎች

---- homogenizer

----ሻከር

---- ሴንትሪፉጅ

---- የትንታኔ ሚዛን (ኢንደክሽን፡ 0.01ግ)

----የተመረቀ pipette: 10ml

---- የጎማ ፓይፕ አምፖል

----የቮልሜትሪክ ብልቃጥ: 10ml

---- የ polystyrene ሴንትሪፉጅ ቱቦዎች: 50ml

---- ማይክሮፒፕቶች፡ 20-200ml፣ 100-1000ml

250 ሚሊ-ባለብዙ ፓይፔት

5.2 መልመጃዎች:

----ሶዲየም ሃይድሮክሳይድ (NaOH, AR)

---- ሶዲየም ባይካርቦኔት (ናኤችኮ_3,አር)

---- ሶዲየም ካርቦኔት (ናኮ₃፣ አር)

---- ትሪክሎሮአክቲክ አሲድ (ኤአር)

---- አሴቶኒትሪል (ኤአር)

---- ኤቲል አሲቴት (ኤአር)

┅┅n-ሄክሳን (ኤአር)

---- ዲዮኒዝድ ውሃ

6. Kit ክፍሎች

l ማይክሮቲተር ጠፍጣፋ ከ 96 ጉድጓዶች ጋር በአንቲጂን የተሸፈነ

l መደበኛ መፍትሄዎች (5 ጠርሙሶች ፣ 1 ml / ጠርሙስ)

0ppb፣ 0.5ppb፣ 1.5ppb፣ 4.5ppb፣ 13.5ppb

l ስፒኪንግ መደበኛ መቆጣጠሪያ: (1ml/ ጠርሙስ)1 ፒ.ኤም

l ኢንዛይም conjugate 1ml …………………………………

l ፀረ እንግዳ አካላት መፍትሄ 7ml ………………………………………. አረንጓዴ ካፕ

l መፍትሄ A 7ml ………………………………………………. ነጭ ካፕ

l መፍትሄ B 7ml ………………………………………………. ቀይ ካፕ

l የማቆሚያ መፍትሄ 7ml …………………………………………. ቢጫ ካፕ

l 20 × የተከማቸ ማጠቢያ መፍትሄ 40ml

……………………………………………………………………

l 4 × የታመቀ የማውጣት መፍትሄ 50ml

…………………………………………………………………………. ሰማያዊ ካፕ

7. የሪኤጀንቶች ዝግጅት;

መፍትሄ 1፡0.1mol/L NaOH መፍትሄ

ከ 0.4 ግ ናኦኤች እስከ 100 ሚ.ሜ የተዳከመ ውሃ ይመዝኑ እና ሙሉ በሙሉ ይቀላቅሉ።

መፍትሄ 2: 1mol/L NaOH መፍትሄ

4g NaOH እስከ 100ml ዲዮኒዝድ ውሃ ይመዝኑ እና ሙሉ ለሙሉ ይቀላቅሉ።

መፍትሄ 3: የካርቦኔት ቋት ጨው

መፍትሄ1: 0.2M ፒ.ቢ

51.6g የናኦሚ ሟሟ₂HPO₄· 12 ሸ₂ኦ፣ 8.7g የናኤች₂PO₄· 2ኤች₂ኦ በተቀቀለ ውሃ እና ወደ 1000 ሚሊ ሊትል.

መፍትሄ2: የማውጣት መፍትሄ

በ 1: 1 (የድምጽ ሬሾ) ውስጥ ባለ 2 × የተከማቸ የማውጫ መፍትሄን በዲዮኒዝድ ውሃ ይቀንሱለምሳሌ 10 ሚሊ 2 × የማውጣት መፍትሄ + 10 ሚሊር የተቀዳ ውሃ), ለናሙና ለማውጣት የሚያገለግል,ይህ መፍትሄ በ 4 ℃ ውስጥ ለ 1 ወር ሊከማች ይችላል.

መፍትሄ3: መፍትሄን ማጠብ

ባለ 20 × የተከማቸ ማጠቢያ መፍትሄ በዲዮኒዝድ ውሃ በ 1፡19 (ጥራዝ) መጠን ይቀንሱለምሳሌ 5ml 20×የማጠቢያ መፍትሄ + 95ml deionized ውሃ), ሳህኖቹን ለማጠብ የሚያገለግል.ይህ መፍትሄ በ 4 ℃ ውስጥ ለ 1 ወር ሊከማች ይችላል.

8. የናሙና ዝግጅት

8.1 ከስራ በፊት ማሳሰቢያ እና ጥንቃቄዎች፡-

(ሀ) እባክዎን በሙከራ ሂደት ውስጥ የአንድ ጊዜ ጠቃሚ ምክሮችን ይጠቀሙ እና የተለያዩ ሪአጀንትን በሚስቡበት ጊዜ ምክሮቹን ይለውጡ።

(ለ) ሁሉም መሳሪያዎች ንጹህ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

(ሐ) የቲሹ ናሙና በማቀዝቀዣ ውስጥ ያስቀምጡ.

(መ) የተዘጋጀ ናሙና ለግምገማ በአንድ ጊዜ ጥቅም ላይ መዋል አለበት.

8.2 የእንስሳት ቲሹ (ዶሮ ፣ አሳማ ፣ ወዘተ)

---- ናሙናውን በሆሞጂኒዘር (homogenizer) ያድርጉ;

---- 2.0 ± 0.05 ግራም ሆሞጅን በ 50 ሚሊ ሜትር የ polystyrene ሴንትሪፉጅ ቱቦ ውስጥ ውሰድ;2 ሚሊ 0.2M ፒቢ ይጨምሩ (መፍትሄ1) ፣ ለመሟሟት ይንቀጠቀጡ እና ከዚያ 8ml ethyl acetate ይጨምሩ እና ለ 3 ደቂቃዎች አጥብቀው ይንቀጠቀጡ።

---- ሴንትሪፉጅ ለመለያየት: 3000g / የአካባቢ ሙቀት / 5min.

---- 4ml እጅግ የላቀውን የኦርጋኒክ ምዕራፍ ወደ 10ml ብርጭቆ ቱቦ ያስተላልፉ፣ ከ50-60℃ የውሃ መታጠቢያ በናይትሮጅን ጋዝ ጅረት ስር ያድርቁ።

---- የደረቀውን የተረፈውን በ 1ml n-hexane፣ vortex for 30s ለመሟሟት እና ከዚያም 1ml የማውጣት መፍትሄ (መፍትሄ) ይጨምሩ።መፍትሄ2) ፣ አዙሪት ለ 1 ደቂቃ።ለመለያየት ሴንትሪፉጅ: 3000g / የአካባቢ ሙቀት / 5min

---- ከፍተኛውን n-hexane ደረጃን ያስወግዱ;ለግምገማ 50μl የንዑስትራክት የውሃ ክፍል ይውሰዱ።

የማሟሟት ሁኔታ፡ 1

8.2 ወተት

---- 100μl ጥሬ ወተት ናሙና ይውሰዱ ፣ ከ 900 ማይክሮን መፍትሄ ጋር ይቀላቅሉ (መፍትሄ2) እና ሙሉ በሙሉ ይቀላቅሉ።

---- ለምርመራ የተዘጋጀውን 50μl ውሰዱ።

የማሟሟት ሁኔታ፡ 10

9. የመመርመሪያ ሂደት

9.1 ከመመርመሩ በፊት ያስተውሉ

9.1.1ሁሉም ሬጀንቶች እና ማይክሮዌልች ሁሉም በክፍል ሙቀት (20-25 ℃) መሆናቸውን ያረጋግጡ።

9.1.2የተቀሩትን ሬጀንቶች ወደ 2-8 ይመልሱ℃ወዲያውኑ ጥቅም ላይ ከዋለ በኋላ.

9.1.3ማይክሮዌልን በትክክል ማጠብ በምርመራው ሂደት ውስጥ አስፈላጊ እርምጃ ነው;የ ELISA ትንታኔን እንደገና ለማራባት ወሳኝ ነገር ነው.

9.1.4 አመብራቱን ያጥፉ እና ማይክሮዌልን በሚታጠቁበት ጊዜ ይሸፍኑ።

9.2 የመመርመሪያ ደረጃዎች

9.2.1 ሁሉንም ሬጀንቶች በክፍል ሙቀት (20-25 ℃) ከ 30 ደቂቃ በላይ ይውሰዱ ፣ ከመጠቀምዎ በፊት በቀስታ ይንቀጠቀጡ።

9.2.2 የሚፈለጉትን ማይክሮዌልች አውጥተው ቀሪውን ወደ ዚፕ መቆለፊያ ቦርሳ ከ2-8℃ ወዲያውኑ ይመልሱ።

9.2.3 የተቀላቀለው ማጠቢያ መፍትሄ ከመጠቀምዎ በፊት በክፍል ሙቀት ውስጥ እንዲሞቅ መደረግ አለበት.

9.2.4ቁጥር፡-በእያንዳንዱ የማይክሮዌል አቀማመጥ የተቆጠሩ እና ሁሉም ደረጃዎች እና ናሙናዎች በሁለት ቅጂዎች መከናወን አለባቸው።ደረጃዎችን እና የናሙና ቦታዎችን ይመዝግቡ።

9.2.5Add መደበኛ መፍትሔ / ናሙና እና ፀረ እንግዳ መፍትሄመደበኛ መፍትሄ 50µl ይጨምሩ (((ኪት ቀረበ)) ወይም ወደ ተጓዳኝ ጉድጓዶች የተዘጋጀ ናሙና.50µl ፀረ እንግዳ አካላት መፍትሄ ይጨምሩ (ኪት ቀረበ).ሳህኑን በእጅ በማወዛወዝ በቀስታ ይቀላቅሉ እና ለ 30 ደቂቃዎች በ 37 ℃ ሽፋን ይሸፍኑ።

9.2.6ማጠብ: ሽፋኑን በቀስታ ያስወግዱት እና ፈሳሹን ከጉድጓድ ውስጥ ያፅዱ እና ማይክሮዌሎችን በ 250µl የተቀላቀለ የመታጠቢያ መፍትሄ ያጠቡ (መፍትሄ3) በ 10 ሰከንድ ለ 4-5 ጊዜ.የተረፈውን ውሃ በሚስብ ወረቀት (የተቀረው የአየር አረፋ ጥቅም ላይ ባልዋለ ጫፍ ሊወገድ ይችላል)።

9.2.7የኢንዛይም ውህደትን ይጨምሩ: 100ml የኢንዛይም ኮንጁጌት መፍትሄ ይጨምሩኪት ቀረበእያንዳንዱን ጉድጓድ በቀስታ ይቀላቅሉ እና ለ 30 ደቂቃዎች በ 37 ℃ ከሽፋኑ ጋር ይቅቡት ።የመታጠቢያውን ደረጃ እንደገና ይድገሙት.

9.2.8ቀለም መቀባት50µl መፍትሄ A (A) ይጨምሩኪት ቀረበእና 50µl መፍትሄ B (ኪት ቀረበ) ለእያንዳንዱ ጉድጓድ.በቀስታ ይደባለቁ እና ለ 15 ደቂቃዎች በ 37 ℃ ከሽፋኑ ጋር ይንቁ.

9.2.9ለካየማቆሚያው መፍትሄ 50µl ይጨምሩ (ኪት ቀረበ) ለእያንዳንዱ ጉድጓድ.በቀስታ ይቀላቅሉ እና የመምጠጥ መጠኑን በ 450nm ይለኩ (በ 450/630nm ባለሁለት-ሞገድ ርዝመት እንዲለካ ይመከራል። የማቆሚያ መፍትሄ ከጨመሩ በኋላ ውጤቱን በ 5 ደቂቃ ውስጥ ያንብቡ)።

10. ውጤቶች

10.1 መቶኛ መምጠጥ

ለመመዘኛዎቹ የተገኙት የመምጠጥ እሴቶች አማካኝ እሴቶች እና ናሙናዎች በመጀመሪያው መስፈርት (ዜሮ ደረጃ) በመምጠጥ ዋጋ የተከፋፈሉ እና በ 100% ተባዝተዋል.የዜሮ መስፈርቱ ከ 100% ጋር እኩል ነው እና የመምጠጥ እሴቶቹ በመቶኛ ይጠቀሳሉ።

B

መምጠጥ (%) = —— ×100%

B0

B —— የመጠጣት ደረጃ (ወይም ናሙና)

B0 ——የመምጠጥ ዜሮ መስፈርት

10.2 መደበኛ ከርቭ

---- ደረጃውን የጠበቀ ኩርባ ለመሳል፡ የመመዘኛዎችን የመምጠጥ ዋጋ እንደ y-ዘንግ፣ ከፊል ሎጋሪዝም የታይሎሲን ደረጃዎች መፍትሄ (ppb) እንደ x-ዘንግ ይውሰዱ።

---- ከካሊብሬሽን ከርቭ የሚነበበው የእያንዳንዱ ናሙና (ppb) የታይሎሲን መጠን፣ በእያንዳንዱ ናሙና በሚከተለው ተጓዳኝ Dilution factor ተባዝቶ ትክክለኛው የናሙና ክምችት ተገኝቷል።

እባክዎን ያስተውሉ፡

ለመረጃ ትንተና ልዩ ሶፍትዌር ተዘጋጅቷል፣ እሱም በጥያቄ ሊቀርብ ይችላል።

11. ስሜታዊነት, ትክክለኛነት እና ትክክለኛነት

የመፈተሽ ስሜት;1.5 ፒ.ፒ.ቢ

የማወቅ ገደብ፡

የእንስሳት ቲሹ …………………………………………………………………… 1.5ppb ወተት ………………………………………………………………………………………………………… 15ppb ትክክለኛነት፡

የእንስሳት ቲሹ …………………………………………………………………………… 80± 15%

ወተት ………………………………………………………………………………………………………… 80±10%

ትክክለኛነት፡

የ ELISA ኪት ልዩነት ከ 10% ያነሰ ነው.

12. ማሳሰቢያ

12.1 ለመመዘኛዎቹ የተገኙት የመምጠጥ እሴቶቹ አማካኝ እሴቶች እና ናሙናዎቹ የሚቀነሱት ሬጀንቶች እና ናሙናዎች ወደ ክፍል የሙቀት መጠን (20-25 ℃) ካልተስተካከለ ነው።

12.2 ያልተሳካ መራባትን ለማስወገድ ማይክሮዌል በደረጃዎች መካከል እንዲደርቅ አይፍቀዱ እና የማይክሮዌል መያዣውን ከነካ በኋላ ወዲያውኑ ቀጣዩን እርምጃ ይውሰዱ።

12.3 ከመጠቀምዎ በፊት እያንዳንዱን ሬጀንት በቀስታ ያናውጡ።

12.4 ቆዳዎን ከማቆሚያው መፍትሄ ያርቁ ምክንያቱም 0.5MH ነው₂SO₄መፍትሄ.

12.5 ኪቶቹን ጊዜው ያለፈበት አይጠቀሙ።የተለያዩ ባች ሪጀንተሮችን አትለዋወጡ፣ አለበለዚያ ስሜቱ ይቀንሳል።

12.6 የELISA ኪትቹን ከ2-8℃ ያቆዩት ፣ አይቀዘቅዙ።የማይክሮዌል ንጣፎችን ያሽጉ ፣ በሁሉም ማቀፊያዎች ጊዜ ቀጥተኛ የፀሐይ ብርሃንን ያስወግዱ።የማይክሮቲተር ንጣፎችን መሸፈን ይመከራል.

12.7 የንዑስ መፍትሄ ቀለሞችን ከቀየሩ መተው አለበት.የዜሮ መስፈርቱ የመምጠጥ ዋጋ (450/630nm) ከ0.5 (A450nm<0.5) ያነሰ ከሆነ ሬጀንቶቹ መጥፎ ሊሆኑ ይችላሉ።

12.8 የመፍትሄው ሀ እና መፍትሄ B ከተጨመሩ በኋላ የቀለማት ምላሽ 15 ደቂቃ ያስፈልገዋል. እና ቀለሙን ለመለየት በጣም ቀላል ከሆነ የመታቀፉን ጊዜ ወደ 20 ደቂቃ ወይም ከዚያ በላይ ማራዘም ይችላሉ.ከ 30 ደቂቃ መብለጥ የለበትም ፣ በተቃራኒው ፣ የመታቀፉን ጊዜ በትክክል ያሳጥሩ።

12.9 ጥሩው የምላሽ ሙቀት 37 ℃ ነው።ከፍ ያለ ወይም ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ወደ ስሜታዊነት እና የመሳብ እሴቶች ለውጦች ይመራል።

13. ማከማቻ

የማከማቻ ሁኔታ: 2-8 ℃.

የማከማቻ ጊዜ: 12 ወራት.