produktas

Konkurencingo fermento imunologinio tyrimo rinkinys, skirtas kiekybinei tilozino analizei

Trumpas aprašymas:

Tilozinas yra makrolidų grupės antibiotikas, kuris daugiausia naudojamas kaip antibakterinis ir antimikoplazmas.Buvo nustatytos griežtos DLK, nes šis vaistas gali sukelti rimtą šalutinį poveikį tam tikroms grupėms.

Šis rinkinys yra naujas gaminys, pagrįstas ELISA technologija, kuris yra greitas, lengvas, tikslus ir jautrus, palyginti su įprasta instrumentine analize, ir kurio vienai operacijai reikia tik 1,5 valandos, todėl galima žymiai sumažinti veikimo klaidas ir darbo intensyvumą.


Produkto detalė

Produkto etiketės

Konkurencingas fermentų imunologinio tyrimo rinkinys, skirtas

Kiekybinė analizėtilozinas


1. Fonas

tilozinasyra makrolidinis antibiotikas, kuris daugiausia naudojamas kaip antibakterinis ir antimikoplazmas.Buvo nustatytos griežtos DLK, nes šis vaistas gali sukelti rimtą šalutinį poveikį tam tikroms grupėms.

Šis rinkinys yra naujas gaminys, pagrįstas ELISA technologija, kuris yra greitas, lengvas, tikslus ir jautrus, palyginti su įprasta instrumentine analize, ir kurio vienai operacijai reikia tik 1,5 valandos, todėl galima žymiai sumažinti veikimo klaidas ir darbo intensyvumą.

2. Bandymo principas

Šis rinkinys yra pagrįstas netiesiogiai konkuruojančia ELISA technologija.Mikrotitro šulinėliai yra padengti jungiamuoju antigenu.Tilozino liekana mėginyje konkuruoja su antigenu, padengtu ant mikrotitravimo plokštelės dėl antikūno.Pridėjus fermentu pažymėto anti-antikūno, spalvai parodyti naudojamas TMB substratas.Mėginio absorbcija yra neigiamai susijusi su jame esančia tilozino likučiais, palyginus su standartine kreive, padauginus iš praskiedimo koeficiento, galima apskaičiuoti tilozino likučių kiekį mėginyje.

3. Paraiškos

Šis rinkinys gali būti naudojamas kiekybinei ir kokybinei tilozino likučių gyvūnų audiniuose (vištienos, kiaulienos, ančių) ir pieno, medaus, kiaušinių ir kt.

4. Kryžminės reakcijos

Tilozinas………………………………………………..100 proc.

Tilmikozinas………………………………………………<2 %

5. Reikalingos medžiagos

5.1 Įranga:

---- Mikrotitravimo plokštelės spektrofotometras (450 nm / 630 nm)

---- Rotorinis garintuvas arba azoto džiovinimo instrumentai

----homogenizatorius

---- Purtyklė

----Centrifuga

---- Analitinės svarstyklės (induktyvumas: 0,01 g)

---- Pipetė su gradacija: 10 ml

---- Guminės pipetės lemputė

----Mūrinė kolba: 10ml

----Polistireno centrifugos vamzdeliai: 50ml

----Mikropipetės: 20-200ml, 100-1000ml

250 ml-multipipetė

5.2 Reagentai:

----Natrio hidroksidas (NaOH, AR)

---- Natrio bikarbonatas (NaHCO3,AR)

---- Natrio karbonatas (NaCO3, AR)

---- Trichloracto rūgštis (AR)

---- Acetonitrilas (AR)

----Etilo acetatas (AR)

┅┅n-heksanas (AR)

---- Dejonizuotas vanduo

6. Komplekto komponentai

l Mikrotitravimo plokštelė su 96 šulinėliais, padengta antigenu

l Standartiniai tirpalai (5 buteliai, 1 ml / butelis)

0 ppb, 0,5 ppb, 1,5 ppb, 4,5 ppb, 13,5 ppb

l Standartinis spygliuočių valdymas: (1ml/butelis)1 ppm

l Fermentų konjugatas 1ml…………………………………………………………………………………………………………………………………………

l Antikūnų tirpalas 7 ml……………….……žalias dangtelis

l A tirpalas 7 ml…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

l B tirpalas 7 ml………………………………..raudonas dangtelis

l Stop tirpalas 7ml.……………….……….geltonas dangtelis

l 20×koncentruotas plovimo tirpalas 40ml

…………………………………..…permatomas dangtelis

l 4×koncentruotas ekstrahavimo tirpalas 50ml

……………………………………………….mėlyna kepurė

7. Reagentų paruošimas:

1 sprendimas:0,1 mol/l NaOH tirpalas

Pasverkite 0,4 g NaOH 100 ml dejonizuoto vandens ir visiškai išmaišykite.

2 sprendimas: 1 mol/L NaOH tirpalas

Pasverkite 4 g NaOH 100 ml dejonizuoto vandens ir visiškai išmaišykite.

3 sprendimas: karbonatinė buferinė druska

Sprendimas1: 0,2M PB

Ištirpinkite 51,6 g Na2HPO4· 12h2O, 8,7 g NaH2PO4· 2H2O su dejonizuotu vandeniu ir praskieskite iki 1000 ml.

Sprendimas2: ekstrahavimo tirpalas

Atskieskite 2x koncentruotą ekstrahavimo tirpalą dejonizuotu vandeniu tūrio santykiu 1:1 (pvz., 10 ml 2 × ekstrahavimo tirpalo + 10 ml dejonizuoto vandens), kuris bus naudojamas mėginiui ekstrahuoti,šį tirpalą galima laikyti 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesį.

Sprendimas3: plovimo tirpalas

Praskieskite 20 kartų koncentruotą plovimo tirpalą dejonizuotu vandeniu tūrio santykiu 1:19 (pvz., 5 ml 20 × plovimo tirpalo + 95 ml dejonizuoto vandens), kuris bus naudojamas lėkštėms plauti.Šį tirpalą galima laikyti 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesį.

8. Mėginių paruošimas

8.1 Pastaba ir atsargumo priemonės prieš naudojant:

a) Eksperimento metu naudokite vienkartinius antgalius ir pakeiskite antgalius, kai sugeria kitą reagentą.

b) Įsitikinkite, kad visi instrumentai yra švarūs.

c) Audinio mėginį laikykite užšaldytą.

d) Paruoštas mėginys turi būti naudojamas tyrimui iš karto.

8.2 Gyvūniniai audiniai (vištiena, kiauliena ir kt.)

----Homogenizuoti mėginį homogenizatoriumi;

----Paimkite 2,0±0,05 g homogenato į 50 ml polistireno centrifugos mėgintuvėlį;įpilkite 2 ml 0,2 M PB (sprendimas1), suplakite, kad ištirptų, tada įpilkite 8 ml etilo acetato ir stipriai kratykite 3 min.;

----Centrifuga atskyrimui: 3000g / aplinkos temperatūra / 5min.

---- Perkelkite 4 ml supernatantinės organinės fazės į 10 ml stiklinį mėgintuvėlį, išdžiovinkite 50-60 ℃ vandens vonioje azoto dujų srove;

---- Sausus likučius ištirpinkite 1 ml n-heksano, 30 s maišydami sumaišykite, kad ištirptų, tada įpilkite 1 ml ekstrahavimo tirpalo (sprendimas2), sukite sūkurį 1 min.centrifuga atskyrimui: 3000g / aplinkos temperatūra / 5min

----Pašalinkite supernatantą n-heksano fazę;paimkite 50 μl substrato vandeninės fazės tyrimui.

 

Skiedimo koeficientas: 1

 

8.2 Pienas

----Paimkite 100 μl žalio pieno mėginio, sumaišykite su 900 μl ekstrahavimo tirpalo (sprendimas2) ir visiškai išmaišykite.

---- Paimkite 50 μl paruošto tirpalo tyrimui.

 

Skiedimo koeficientas: 10

 

9. Tyrimo procesas

9.1 Pastaba prieš tyrimą

9.1.1Įsitikinkite, kad visi reagentai ir mikrošulinėliai yra kambario temperatūros (20–25 ℃).

9.1.2Visus likusius reagentus grąžinkite į 2–8iš karto po panaudojimo.

9.1.3Tinkamas mikrošulinėlių išplovimas yra svarbus tyrimo proceso etapas;tai gyvybiškai svarbus ELISA analizės atkuriamumo veiksnys.

9.1.4 Aištuštinkite šviesą ir inkubacijos metu uždenkite šulinėlius.

9.2 Tyrimo etapai

9.2.1 Išimkite visus reagentus kambario temperatūroje (20-25 ℃) ilgiau nei 30 min., prieš naudodami švelniai suplakite.

9.2.2 Išimkite reikiamus šulinėlius, o likusius nedelsdami grąžinkite į užtrauktuku užsegamą maišelį 2–8 ℃ temperatūroje.

9.2.3 Prieš naudojimą praskiestas plovimo tirpalas turi būti pašildytas iki kambario temperatūros.

9.2.4Numeris:Kiekviena mikrošulinėlio padėtis sunumeruota ir visi standartai bei mėginiai turi būti paleisti dviem egzemplioriais.Užrašykite standartų ir pavyzdžių pozicijas.

9.2.5Add standartinis tirpalas/mėginys ir antikūnų tirpalas: Įpilkite 50 µl standartinio tirpalo ((komplektas pateiktas)) arba paruoštą mėginį į atitinkamus šulinius.Įpilkite 50 µl antikūnų tirpalo (komplektas pateiktas).Švelniai sumaišykite lėkštę purtant rankiniu būdu ir inkubuokite 30 min 37 ℃ temperatūroje uždengę.

9.2.6Nuplaukite: Švelniai nuimkite dangtelį ir išvalykite skystį iš šulinėlių, o mikrošulinėlius išskalaukite 250 µl praskiesto plovimo tirpalo (sprendimas3) 10s intervalu 4-5 kartus.Vandens likučius sugerkite sugeriančiu popieriumi (likusį oro burbuliuką galite pašalinti nenaudojamu antgaliu).

9.2.7Įpilkite fermento konjugato: Įpilkite 100 ml fermento konjugato tirpalo (komplektas pateiktas) į kiekvieną šulinėlį, švelniai išmaišykite ir inkubuokite 30 min 37 ℃ temperatūroje uždengę.Dar kartą pakartokite plovimo veiksmą.

9.2.8Spalvinimas: Įpilkite 50 µl tirpalo A(komplektas pateiktas) ir 50 µl tirpalo B(komplektas pateiktas) į kiekvieną šulinį.Švelniai sumaišykite ir inkubuokite 15 minučių 37 ℃ temperatūroje uždengę.

9.2.9Išmatuoti: Įpilkite 50 µl stabdymo tirpalo (komplektas pateiktas) į kiekvieną šulinį.Švelniai sumaišykite ir išmatuokite absorbciją esant 450 nm (siūloma matuoti naudojant dvigubą 450/630 nm bangos ilgį. Nuskaitykite rezultatą per 5 minutes po to, kai pridėsite stabdymo tirpalo).

10. Rezultatai

10.1 Procentinė absorbcija

Vidutinės gautos etalonų ir mėginių absorbcijos verčių vertės dalijamos iš pirmojo etalono absorbcijos vertės (nulinis standartas ) ir padauginamos iš 100%.Taigi nulinis standartas yra lygus 100%, o absorbcijos vertės nurodomos procentais.

B

Absorbcija (%) = —— × 100 %

B0

B — absorbcijos standartas (arba mėginys)

B0 — — absorbcijos nulinis standartas

10.2 Standartinė kreivė

----Norėdami nubrėžti standartinę kreivę: paimkite etalonų absorbcijos vertę kaip y ašį, o pusiau logaritminę tilozino etaloninio tirpalo koncentraciją (ppb) kaip x ašį.

----Tilozino koncentracija kiekviename mėginyje (ppb), kurią galima nuskaityti iš kalibravimo kreivės, padauginama iš atitinkamo kiekvieno mėginio praskiedimo koeficiento ir gaunama tikroji mėginio koncentracija.

Atkreipkite dėmesį:

Duomenų analizei sukurta speciali programinė įranga, kurią galima pateikti pagal pageidavimą.

11. Jautrumas, tikslumas ir preciziškumas

Bandymo jautrumas:1,5 ppb

Aptikimo riba:

Gyvūnų audiniai…………………………………………1,5 ppb Pienas…………………………………………………..15ppb Tikslumas:

Gyvūnų audiniai…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………80±15 proc.

Pienas………………………………………………………80±10%

Tikslumas:

ELISA rinkinio variacijos koeficientas yra mažesnis nei 10%.

12. Pastaba

12.1. Jei reagentai ir mėginiai nebuvo sureguliuoti iki kambario temperatūros (20-25 ℃), vidutinės absorbcijos verčių vertės, gautos standartams ir mėginiams, bus sumažintos.

12.2 Neleiskite mikrošulinėliams išdžiūti tarp etapų, kad išvengtumėte nesėkmingo atkuriamumo, ir atlikite kitą veiksmą iš karto bakstelėję mikrošulinėlių laikiklį.

12.3 Prieš naudodami kiekvieną reagentą švelniai suplakite.

12.4 Saugokite odą nuo stabdymo tirpalo, nes jis yra 0,5MH2SO4sprendimas.

12.5 Nenaudokite pasenusių rinkinių.Nekeiskite skirtingų partijų reagentų, kitaip sumažės jautrumas.

12.6 ELISA rinkinius laikykite 2–8 ℃ temperatūroje, neužšaldykite.Uždarykite likusias mikrošulinėlių plokšteles. Visų inkubacijų metu venkite tiesioginių saulės spindulių.Mikrotitravimo plokšteles rekomenduojama uždengti.

12.7 Pagrindo tirpalo reikia atsisakyti, jei jis nusidažo.Reagentai gali sugesti, jei nulinio standarto absorbcijos vertė (450/630 nm) yra mažesnė nei 0,5 (A450 nm < 0,5).

12.8. Spalvos reakcijai reikia 15 minučių po tirpalo A ir tirpalo B pridėjimo. Be to, inkubacijos laiką galite pratęsti iki 20 minučių ar ilgiau, jei spalva per šviesi, kad ją būtų galima nustatyti.Niekada neviršykite 30 min., priešingai, tinkamai sutrumpinkite inkubacijos laiką.

12.9 Optimali reakcijos temperatūra yra 37 ℃.Aukštesnė ar žemesnė temperatūra lems jautrumo ir absorbcijos verčių pokyčius.

13. Sandėliavimas

Laikymo sąlygos: 2-8 ℃.

Laikymo laikotarpis: 12 mėnesių.

 


  • Ankstesnis:
  • Kitas:

  • Parašykite savo žinutę čia ir atsiųskite mums