производ

Комплет компетитивних ензимских имуноанализа за квантитативну анализу тилозина

Кратак опис:

Тилозин је макролидни антибиотик, који се углавном примењује као антибактеријски и антимикоплазма.Установљене су строге МРЛ пошто овај лек може довести до озбиљних нежељених ефеката у одређеним групама.

Овај комплет је нови производ заснован на ЕЛИСА технологији, који је брз, лак, прецизан и осетљив у поређењу са уобичајеном инструменталном анализом и треба му само 1,5 сат у једној операцији, може значајно да минимизира грешку у раду и интензитет рада.


Детаљи о производу

Ознаке производа

Комплет за компетитивни ензимски имуноесеј за

Квантитативна анализаТилозин


1. Позадина

Тилозинје макролидни антибиотик, који се углавном примењује као антибактеријски и антимикоплазма.Установљене су строге МРЛ пошто овај лек може довести до озбиљних нежељених ефеката у одређеним групама.

Овај комплет је нови производ заснован на ЕЛИСА технологији, који је брз, лак, прецизан и осетљив у поређењу са уобичајеном инструменталном анализом и треба му само 1,5 сат у једној операцији, може значајно да минимизира грешку у раду и интензитет рада.

2. Принцип теста

Овај комплет је заснован на индиректно-компетитивној ЕЛИСА технологији.Јамице за микротитар су обложене купложним антигеном.Остатак тилозина у узорку се такмичи са антигеном обложеним на микротитарској плочи за антитело.Након додавања анти-антитела обележеног ензима, ТМБ супстрат се користи да би се приказала боја.Апсорбанца узорка је негативно повезана са тилозином који се налази у њему, након поређења са стандардном кривом, помноженом фактором разблажења, може се израчунати количина остатка тилозина у узорку.

3. Пријаве

Овај комплет се може користити у квантитативној и квалитативној анализи остатака тилозина у животињском ткиву (пилетина, свињетина, патка) и млеку, меду, јајима итд.

4. Унакрсне реакције

Тилозин…………………………………………………………..100%

Тилмикозин………………………………………………<2%

5. Потребни материјали

5.1 Опрема:

---- Спектрофотометар микротитарске плоче (450нм/630нм)

----Ротациони испаривач или инструменти за сушење азота

----хомогенизатор

----Схакер

----Центрифуга

----Аналитичка вага (индуктивност: 0,01г)

----Градована пипета: 10мл

---- Гумена сијалица за пипету

---- Запремина боца: 10 мл

---- Полистиренске епрувете за центрифугирање: 50 мл

----Микропипете: 20-200мл, 100-1000мл

250мл-мултиппета

5.2 Реагенси:

----натријум хидроксид (НаОХ, АР)

---- Натријум бикарбонат (НаХЦО3,АР)

---- Натријум карбонат (НаЦО3, АР)

----Трихлоросирћетна киселина (АР)

---- ацетонитрил (АР)

---- етил ацетат (АР)

┅┅н-хексан (АР)

----Дејонизована вода

6. Компоненте комплета

л Микротитарска плоча са 96 јажица обложених антигеном

л Стандардни раствори (5 боца, 1мл/боца)

0ппб, 0,5ппб, 1,5ппб, 4,5ппб, 13,5ппб

л Стандардна контрола шпицања: (1мл/боца)1ппм

л Ензимски коњугат 1мл……………..…..…црвени поклопац

л Раствор антитела 7мл………………………зелена капица

л Раствор А 7мл…………………….….……бела капица

л Раствор Б 7мл…………………………………………..црвени поклопац

л Стоп раствор 7мл.……………….……….жути поклопац

л 20×концентровани раствор за прање 40мл

……………………………………………..…прозирна капа

л 4×концентровани раствор за екстракцију 50мл

………………………………………………………….плава капа

7. Припрема реагенса:

Решење 1:0,1 мол/Л раствора НаОХ

Измерити 0,4 г НаОХ у 100 мл дејонизоване воде и потпуно промешати.

Решење 2: 1мол/Л раствора НаОХ

Измерити 4 г НаОХ у 100 мл дејонизоване воде и потпуно измешати.

Решење 3: карбонатна пуфер со

Решење1: 0,2М ПБ

Растворити 51,6 г На2ХПО4·12Х2О, 8,7 г НаХ2PO4·2Х2О са дејонизованом водом и разблажите до 1000 мл.

Решење2: Решење за екстракцију

Разблажите 2×концентровани раствор за екстракцију са дејонизованом водом у запреминском односу 1:1(нпр. 10 мл 2× екстракционог раствора + 10 мл дејонизоване воде), који ће се користити за екстракцију узорака,овај раствор се може чувати на 4℃ 1 месец.

Решење3: Раствор за прање

Разблажите 20×концентровани раствор за прање дејонизованом водом у запреминском односу 1:19(нпр. 5 мл 20× раствора за прање + 95 мл дејонизоване воде), који ће се користити за прање плоча.Овај раствор се може чувати на 4 ℃ 1 месец.

8. Припрема узорака

8.1 Обавештење и мере предострожности пре рада:

(а) Користите једнократне врхове у процесу експеримента и промените врхове када апсорбујете другачији реагенс.

(б) Уверите се да су сви инструменти чисти.

(ц) Држите узорак ткива у замрзнутом стању.

(д) Припремљени узорак треба одмах користити за анализу.

8.2 Животињско ткиво (пилетина, свињетина, итд.)

----Хомогенизирати узорак помоћу хомогенизатора;

----Узмите 2,0±0,05 г хомогената у епрувету за центрифугу од полистирена од 50 мл;додати 2мл 0,2М ПБ (решење1) протресите да се раствори, а затим додајте 8 мл етил ацетата и снажно мућкајте 3 мин;

----Центрифуга за одвајање: 3000г / температура околине / 5мин.

----Пренесите 4мл органске фазе супернатанта у стаклену епрувету од 10мл, осушите у воденом купатилу на 50-60℃ под струјом гаса азота;

----Растворите суви остатак са 1мл н-хексана, мешајте 30с да се раствори, а затим додајте 1мл раствора за екстракцију (решење2), вртлог 1 мин.центрифуга за одвајање: 3000г / температура околине / 5мин

----Уклонити супернатант н-хексанске фазе;узети 50 μл водене фазе супстрата за анализу.

 

Фактор разблажења: 1

 

8.2 Млеко

----Узмите 100μл узорка сировог млека, помешајте са 900μл раствора за екстракцију (решење2) и потпуно промешајте.

----Узмите 50μл припремљеног раствора за анализу.

 

Фактор разблажења: 10

 

9. Процес анализе

9.1 Обавештење пре анализе

9.1.1Уверите се да су сви реагенси и микробанцири на собној температури (20-25℃).

9.1.2Вратите све остале реагенсе на 2-8одмах након употребе.

9.1.3Правилно прање микро-бужица је важан корак у процесу анализе;то је витални фактор за поновљивост ЕЛИСА анализе.

9.1.4 Аиспразните светло и покријте микро-јажице током инкубације.

9.2 Кораци теста

9.2.1 Извадите све реагенсе на собној температури (20-25℃) дуже од 30 минута, лагано протресите пре употребе.

9.2.2 Извадите потребне микро-јажице, а остатак одмах вратите у врећу са затварачем на 2-8 ℃.

9.2.3 Разблажени раствор за прање треба поново загрејати да буде на собној температури пре употребе.

9.2.4Број:Нумерисана свака позиција микробуна и сви стандарди и узорци треба да се раде у дупликату.Забележите положаје стандарда и узорака.

9.2.5Aдд стандардни раствор/узорак и раствор антитела: Додати 50µл стандардног раствора((обезбеђен комплет)) или припремљеног узорка до одговарајућих бунара.Додати 50 µл раствора антитела (обезбеђен комплет).Нежно промешајте ручним протресањем плоче и инкубирајте 30 минута на 37 ℃ са поклопцем.

9.2.6Оперите: Пажљиво уклоните поклопац и очистите течност из удубљења и исперите микро-јажице са 250 µл разблаженог раствора за прање (решење3) у интервалу од 10с за 4-5 пута.Преосталу воду апсорбујте упијајућим папиром (остатак мехурића ваздуха се може елиминисати неискоришћеним врхом).

9.2.7Додајте коњугат ензима: Додати 100 мл раствора коњугата ензима (обезбеђен комплет) у сваки бунар, лагано промешајте и инкубирајте 30 минута на 37℃ са поклопцем.Поновите корак прања поново.

9.2.8Цолоратион: Додати 50 µл раствора А(обезбеђен комплет) и 50 µл раствора Б(обезбеђен комплет) до сваког бунара.Нежно промешајте и инкубирајте 15 минута на 37 ℃ са поклопцем.

9.2.9Мера: Додати 50 µл стоп раствора (обезбеђен комплет) до сваког бунара.Пажљиво промешајте и измерите апсорбанцију на 450 нм (предлаже се мерење са двоструком таласном дужином од 450/630 нм. Очитајте резултат у року од 5 минута након додавања стоп раствора).

10. Резултати

10.1 Проценат апсорпције

Средње вредности вредности апсорпције добијене за стандарде и узорке подељене су са вредношћу апсорпције првог стандарда (нулти стандард) и помножене са 100%.Нулти стандард је на тај начин једнак 100%, а вредности апсорпције су наведене у процентима.

B

Упијање (%) = —— ×100%

B0

Б ——стандард апсорпције (или узорак)

Б0 —— стандард нулте апсорпције

10.2 Стандардна крива

----Да нацртате стандардну криву: Узмите вредност апсорпције стандарда као и-осу, полулогаритамску концентрације раствора стандарда тилозина (ппб) као к-осу.

----Концентрација тилозина у сваком узорку (ппб), која се може очитати са калибрационе криве, множи се одговарајућим фактором разблажења сваког узорка који се прати и добија се стварна концентрација узорка.

Обратите пажњу:

развијен је посебан софтвер за анализу података који се може обезбедити на захтев.

11. Осетљивост, тачност и прецизност

Осетљивост теста:1.5ппб

Граница детекције:

Животињско ткиво………………………………………1.5ппб Млеко……………………………………………………………………..15ппб тачност:

Животињско ткиво……………………………………80±15%

Млеко……………………………………………..……….……80±10%

Прецизност:

Коефицијент варијације ЕЛИСА комплета је мањи од 10%.

12. Обавештење

12.1 Средње вредности вредности апсорпције добијене за стандарде и узорке биће смањене ако реагенси и узорци нису подешени на собну температуру (20-25℃).

12.2 Не дозволите да се микро-јажице осуше између корака да бисте избегли неуспешну поновљивост и извршите следећи корак одмах након додиривања држача микро-јажица.

12.3 Нежно протресите сваки реагенс пре употребе.

12.4 Држите кожу даље од раствора за заустављање јер је 0,5МХ2SO4решење.

12.5 Не користите комплете који су застарели.Не мењајте реагенсе различитих серија, иначе ће пасти осетљивост.

12.6 Држите ЕЛИСА комплете на 2-8℃, немојте замрзавати.Запечатите микро јажице за одмор, избегавајте директну сунчеву светлост током свих инкубација.Препоручује се покривање микротитарских плоча.

12.7 Раствор супстрата треба напустити ако поприми боју.Реагенси могу бити лоши ако је вредност апсорпције (450/630нм) нултог стандарда мања од 0,5 (А450нм<0,5).

12.8 За реакцију бојења потребно је 15 минута након додавања раствора А и раствора Б. Можете продужити време инкубације на 20 минута или више ако је боја превише светла да би се одредила.Никада не прелазите 30 минута, напротив, правилно скратите време инкубације.

12.9 Оптимална температура реакције је 37 ℃.Виша или нижа температура ће довести до промене вредности осетљивости и апсорпције.

13. Складиштење

Услови складиштења: 2-8 ℃.

Период складиштења: 12 месеци.

 


  • Претходна:
  • Следећи:

  • Напишите своју поруку овде и пошаљите нам је