නිෂ්පාදන

1. පසුබිම

ටයිලෝසින්මැක්‍රොලයිඩ් ප්‍රතිජීවකයක් වන අතර එය ප්‍රධාන වශයෙන් ප්‍රතිබැක්ටීරීය සහ ප්‍රති-මයිකොප්ලාස්මා ලෙස යොදනු ලැබේ.මෙම ඖෂධය ඇතැම් කණ්ඩායම්වල බරපතල අතුරු ආබාධ ඇති කළ හැකි බැවින් දැඩි MRL ස්ථාපිත කර ඇත.

මෙම කට්ටලය ELISA තාක්ෂණය මත පදනම් වූ නව නිෂ්පාදනයක් වන අතර එය සාමාන්‍ය උපකරණ විශ්ලේෂණය හා සසඳන විට වේගවත්, පහසු, නිරවද්‍ය සහ සංවේදී වන අතර එක් මෙහෙයුමක් සඳහා පැය 1.5 ක් පමණක් අවශ්‍ය වේ, එය මෙහෙයුම් දෝෂ සහ වැඩ තීව්‍රතාවය සැලකිය යුතු ලෙස අවම කර ගත හැකිය.

2. පරීක්ෂණ මූලධර්මය

මෙම කට්ටලය වක්‍ර තරඟකාරී ELISA තාක්ෂණය මත පදනම් වේ.මයික්‍රොටයිටර් ළිං කප්ලිං ප්‍රතිදේහජනක සමඟ ආලේප කර ඇත.නියැදියේ ඇති Tylosin අවශේෂ ප්‍රතිදේහ සඳහා මයික්‍රොටයිටර් තහඩුව මත ආලේප කර ඇති ප්‍රතිදේහජනක සමඟ තරඟ කරයි.ප්‍රතිදේහ ලේබල් කරන ලද එන්සයිම එකතු කිරීමෙන් පසුව, TMB උපස්ථරය වර්ණය පෙන්වීමට භාවිතා කරයි.නියැදියේ අවශෝෂණය එහි ඇති ටයිලෝසින් වාසස්ථානයට සෘණාත්මකව සම්බන්ධ වේ, සම්මත වක්‍රය සමඟ සංසන්දනය කිරීමෙන් පසු තනුක සාධකයෙන් ගුණ කළ විට නියැදියේ ඇති තයිලෝසින් අවශේෂ ප්‍රමාණය ගණනය කළ හැකිය.

3. යෙදුම්

මෙම කට්ටලය සත්ව පටක (කුකුල් මස්, ඌරු මස්, තාරා) සහ කිරි, මී පැණි, බිත්තර ආදියෙහි ටයිලෝසින් අවශේෂ ප්රමාණාත්මක හා ගුණාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා භාවිතා කළ හැක.

4. හරස් ප්රතික්රියා

ටයිලොසින් ……………………………………………… 100%

Tilmicosin………………………………………… 2%

5. අවශ්ය ද්රව්ය

5.1 උපකරණ:

----Microtiter තහඩු වර්ණාවලීක්ෂය (450nm/630nm)

----භමක වාෂ්පකාරක හෝ නයිට්‍රජන් වියළන උපකරණ

----සමජාතීයකාරකය

----ෂේකර්

---- කේන්ද්රාපසාරී

----විශ්ලේෂණාත්මක ශේෂය (ප්රේරණය: 0.01g)

----උපාධිගත පයිප්ප: 10ml

----රබර් පයිප්ප බල්බය

----පරිමාමිතික නළය: 10ml

----පොලිස්ටිරින් කේන්ද්රාපසාරී නල: 50ml

----මයික්‍රොපිපෙට්: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-multipipette

5.2 ප්රතික්රියාකාරක:

----සෝඩියම් හයිඩ්‍රොක්සයිඩ් (NaOH, AR)

----සෝඩියම් බයිකාබනේට් (NaHCO_3,AR)

---- සෝඩියම් කාබනේට් (NaCO₃, AR)

----ට්‍රයික්ලෝරෝඇසිටික් අම්ලය (AR)

---- ඇසිටොනයිට්‍රයිල් (AR)

----එතිල් ඇසිටේට් (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

----ඩයෝනීකරණය කළ ජලය

6. කට්ටල සංරචක

l ප්‍රතිදේහජනක ආලේපිත ළිං 96ක් සහිත මයික්‍රොටයිටර් තහඩුව

l සම්මත විසඳුම් (බෝතල් 5, 1ml/බෝතලය)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l ස්පයිකින් සම්මත පාලනය: (1ml/බෝතලය)1ppm

l එන්සයිම සංයෝජකය 1ml…………………………………… රතු තොප්පිය

l ප්‍රතිදේහ ද්‍රාවණය 7ml.......................... හරිත තොප්පිය

l විසඳුම A 7ml…………………………………… සුදු තොප්පිය

l ද්‍රාවණය B 7ml.............................................. රතු තොප්පිය

l නැවතුම් ද්‍රාවණය 7ml............................. කහ තොප්පිය

l 20 × සාන්ද්‍ර වොෂ් ද්‍රාවණය 40ml

………………………………… විනිවිද පෙනෙන තොප්පිය

l 4 × සාන්ද්‍ර නිස්සාරණ ද්‍රාවණය 50ml

…………………………………………………….නිල් තොප්පිය

7. ප්රතික්රියාකාරක සකස් කිරීම:

විසඳුම 1:0.1mol/L NaOH ද්‍රාවණය

0.4g NaOH සිට 100ml deionized ජලය දක්වා බර කර සම්පූර්ණයෙන්ම මිශ්ර කරන්න.

විසඳුම 2: 1mol/L NaOH ද්‍රාවණය

4g NaOH සිට 100ml deionized ජලය දක්වා බර කර සම්පූර්ණයෙන්ම මිශ්ර කරන්න.

විසඳුම 3: කාබනේට් බෆර් ලුණු

විසඳුමක්1: 0.2M PB

Na 51.6g විසුරුවා හරින්න₂HPO₄· 12H₂O, NaH 8.7g₂PO₄·2එච්₂O deionized ජලය සමග සහ 1000ml දක්වා තනුක.

විසඳුමක්2: නිස්සාරණය විසඳුම

2×සාන්ද්‍රිත නිස්සාරණ ද්‍රාවණය 1:1 පරිමා අනුපාතයෙන් ඩයෝනීකෘත ජලය සමග තනුක කරන්න.උදා 10ml 2×නිස්සාරණ ද්‍රාවණය + deionized ජලය 10ml), නියැදි නිස්සාරණය සඳහා භාවිතා කරනු ඇත,මෙම විසඳුම සෙල්සියස් අංශක 4 ක උෂ්ණත්වයකදී මාස 1 ක් ගබඩා කළ හැකිය.

විසඳුමක්3: විසඳුම සෝදන්න

20× සාන්ද්‍ර වොෂ් ද්‍රාවණය 1:19 පරිමාවේ අනුපාතයට ඩියෝනීකරණය කළ ජලය සමග තනුක කරන්න.උදා: 20×වොෂ් ද්‍රාවණයෙන් 5ml + deionized ජලය 95ml), තහඩු සේදීම සඳහා භාවිතා කරනු ඇත.මෙම විසඳුම සෙල්සියස් අංශක 4 ක උෂ්ණත්වයකදී මාස 1 ක් ගබඩා කළ හැකිය.

8. නියැදි සූදානම

8.1 මෙහෙයුමට පෙර දැනුම්දීම සහ පූර්වාරක්ෂාවන්:

(අ) කරුණාකර අත්හදා බැලීමේ ක්‍රියාවලියේදී තනි ඉඟි භාවිතා කරන්න, සහ විවිධ ප්‍රතික්‍රියාකාරක අවශෝෂණය කරන විට ඉඟි වෙනස් කරන්න.

(ආ) සියලුම උපකරණ පිරිසිදු බවට වග බලා ගන්න.

(ඇ) පටක සාම්පල කැටිකර තබා ගන්න.

(d) සකස් කරන ලද නියැදිය එකවර විශ්ලේෂණය සඳහා භාවිතා කළ යුතුය.

8.2 සත්ව පටක (කුකුළු මස්, ඌරු මස්, ආදිය)

----සමජාතීයකාරකය සමඟ නියැදිය සමජාතීය කරන්න;

---- සමජාතීය 2.0± 0.05g මිලිලීටර් 50 ක ෙපොලිස්ටිරින් කේන්ද්‍රාපසාරී නලයකට ගන්න;0.2M PB හි 2ml එකතු කරන්න (විසඳුමක්1) , විසුරුවා හැරීමට සොලවන්න, ඉන්පසු එතිල් ඇසිටේට් මිලි ලීටර් 8 ක් එකතු කර විනාඩි 3 ක් තදින් සොලවන්න;

---- වෙන් කිරීම සඳහා කේන්ද්රාපසාරී: 3000g / පරිසර උෂ්ණත්වය / 5min.

---- නයිට්‍රජන් වායු ප්‍රවාහය යටතේ 50-60℃ ජල ස්නානයකින් වියළන්න, 10ml වීදුරු නලයකට සුපිරි කාබනික අවධියේ 4ml මාරු කරන්න;

(විසඳුමක්2), විනාඩි 1 ක් සඳහා සුලිය.වෙන් කිරීම සඳහා කේන්ද්රාපසාරී: 3000g / පරිසර උෂ්ණත්වය / 5min

----උපරිනාටක n-hexane අදියර ඉවත් කරන්න;විශ්ලේෂණය සඳහා උපස්ථර ජලීය අවධියෙන් 50μl ගන්න.

තනුක සාධකය: 1

8.2 කිරි

----අමු කිරි සාම්පල 100μl ගන්න, නිස්සාරණ ද්‍රාවණය 900μl සමඟ මිශ්‍ර කරන්න (විසඳුමක්2), සහ සම්පූර්ණයෙන්ම මිශ්ර.

---- විශ්ලේෂණය සඳහා සකස් කළ විසඳුමෙන් 50μl ගන්න.

තනුක සාධකය: 10

9. පරීක්ෂණ ක්රියාවලිය

9.1 පරීක්ෂණයට පෙර දැනුම් දෙන්න

9.1.1සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ මයික්‍රොවේල් කාමර උෂ්ණත්වයේ (20-25℃) ඇති බවට වග බලා ගන්න.

9.1.2ඉතිරි සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක 2-8 වෙත ආපසු යන්න℃භාවිතා කළ වහාම.

9.1.3මයික්රොවේල් නිවැරදිව සේදීම විශ්ලේෂණය කිරීමේ ක්රියාවලියේ වැදගත් පියවරකි;එය ELISA විශ්ලේෂණයේ ප්‍රතිනිෂ්පාදනය සඳහා වැදගත් සාධකයකි.

9.1.4 ඒඉන්කියුබේෂන් අතරතුර ආලෝකය අවලංගු කර මයික්‍රොවේල් ආවරණය කරයි.

9.2 පරීක්ෂණ පියවර

9.2.1 විනාඩි 30කට වඩා කාමර උෂ්ණත්වයේ (20-25℃) සියලුම ප්‍රතික්‍රියාකාරක පිටතට ගෙන, භාවිතයට පෙර මෘදු ලෙස සොලවන්න.

9.2.2 අවශ්‍ය මයික්‍රොවේල් ලබාගෙන ඉතිරිය සෙල්සියස් අංශක 2-8 ට සිප්-ලොක් බෑගයට වහාම ආපසු එවන්න.

9.2.3 තනුක කළ සේදුම් ද්‍රාවණය භාවිතයට පෙර කාමර උෂ්ණත්වයේ පවතින පරිදි නැවත උණුසුම් කළ යුතුය.

9.2.4ගණන:සෑම මයික්‍රොවෙල් පිහිටීමක්ම අංකනය කර ඇති අතර සියලුම ප්‍රමිති සහ සාම්පල අනුපිටපත් වලින් ධාවනය කළ යුතුය.ප්‍රමිති සහ සාම්පල ස්ථාන වාර්තා කරන්න.

9.2.5Add සම්මත ද්‍රාවණය/නියැදිය සහ ප්‍රතිදේහ ද්‍රාවණය: සම්මත විසඳුම 50µl එකතු කරන්න ((කට්ටලය ලබා දී ඇත)) හෝ අනුරූප ළිං සඳහා සකස් කළ නියැදිය.ප්‍රතිදේහ ද්‍රාවණ 50µl එකතු කරන්න (කට්ටලය ලබා දී ඇත)පිඟාන අතින් සොලවා මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර පියනක් සමඟ සෙල්සියස් අංශක 37 ට මිනිත්තු 30 ක් පුර්වාගත කරන්න.

9.2.6සෝදන්න: කවරය මෘදු ලෙස ඉවත් කර ළිංවලින් දියර පිරිසිදු කර මයික්‍රෝවේල් 250µl තනුක කළ සේදුම් ද්‍රාවණයකින් සෝදා හරින්න (විසඳුමක්3) තත්පර 10 ක පරතරයකින් 4-5 වතාවක්.අවශෝෂක කඩදාසි සමඟ අවශේෂ ජලය අවශෝෂණය කරන්න (ඉතිරි වායු බුබුල භාවිතයට නොගත් ඉඟියකින් ඉවත් කළ හැකිය).

9.2.7එන්සයිම සංයෝජන එකතු කරන්න: එන්සයිම සංයුජ ද්‍රාවණය මිලි ලීටර් 100ක් එක් කරන්න(කට්ටලය ලබා දී ඇත) සෑම ළිඳකටම මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර විනාඩි 30ක් සෙල්සියස් අංශක 37 ට පියනක් සමඟ පුර්වාගත කරන්න.සේදීමේ පියවර නැවත නැවත කරන්න.

9.2.8වර්ණ ගැන්වීම: A(විසඳුම 50µl එකතු කරන්නකට්ටලය ලබා දී ඇත) සහ විසඳුම B(50µlකට්ටලය ලබා දී ඇත) එක් එක් ළිඳට.මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර 37℃ උෂ්ණත්වයකදී විනාඩි 15ක් ආවරණයක් සහිතව ඉන්කියුබේට් කරන්න.

9.2.9මනින්න: නැවතුම් විසඳුමෙන් 50µl එකතු කරන්න(කට්ටලය ලබා දී ඇත) එක් එක් ළිඳට.මෘදු ලෙස මිශ්‍ර කර 450nm හිදී අවශෝෂණය මැනීම (එය 450/630nm ද්විත්ව තරංග ආයාමයකින් මැනීමට යෝජනා කෙරේ. නැවතුම් ද්‍රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු විනාඩි 5ක් ඇතුළත ප්‍රතිඵලය කියවන්න).

10. ප්රතිඵල

10.1 ප්‍රතිශතය අවශෝෂණය

සම්මතයන් සහ සාම්පල සඳහා ලබාගත් අවශෝෂණ අගයන්හි මධ්යන්ය අගයන් පළමු සම්මතයේ (ශුන්ය සම්මතයේ) අවශෝෂණ අගයෙන් බෙදනු ලබන අතර 100% කින් ගුණ කරනු ලැබේ.ශුන්‍ය ප්‍රමිතිය 100% ට සමාන වන අතර අවශෝෂණ අගයන් ප්‍රතිශත වලින් උපුටා දක්වා ඇත.

B

අවශෝෂණය (%) = —— × 100%

B0

B ——අවශෝෂණ සම්මතය (හෝ නියැදිය)

B0 ——අවශෝෂණ ශුන්‍ය සම්මතය

10.2 සම්මත වක්රය

----සම්මත වක්‍රයක් ඇඳීමට: ප්‍රමිතිවල අවශෝෂණ අගය y-axis ලෙස, tylosin ප්‍රමිති ද්‍රාවණයේ (ppb) සාන්ද්‍රණයේ අර්ධ ලඝුගණක අගය x-අක්ෂය ලෙස ගන්න.

----ක්‍රමාංකන වක්‍රයෙන් කියවිය හැකි එක් එක් නියැදියේ (ppb) ටයිලෝසින් සාන්ද්‍රණය අනුගමනය කරන එක් එක් සාම්පලයේ අනුරූප තනුක සාධකය මගින් ගුණ කරනු ලබන අතර, නියැදියේ සත්‍ය සාන්ද්‍රණය ලබා ගනී.

කරුණාකර සටහන් කරන්න:

දත්ත විශ්ලේෂණය සඳහා විශේෂ මෘදුකාංගයක් නිර්මාණය කර ඇති අතර එය ඉල්ලීම මත ලබා දිය හැකිය.

11. සංවේදීතාව, නිරවද්යතාව සහ නිරවද්යතාව

පරීක්ෂණ සංවේදීතාව:1.5ppb

හඳුනාගැනීමේ සීමාව:

සත්ව පටක …………………………………………………… 1.5ppb කිරි ………………………………………………………..15ppb නිරවද්යතාව:

සත්ව පටක ………………………………………… 80 ± 15%

කිරි ……………………………………………… 80 ± 10%

නිරවද්යතාව:

ELISA කට්ටලයේ විචලන සංගුණකය 10% ට වඩා අඩුය.

12. දැනුම්දීම

12.1 ප්‍රතික්‍රියාකාරක සහ සාම්පල කාමර උෂ්ණත්වයට (20-25℃) නියාමනය කර නොමැති නම් ප්‍රමිති සහ සාම්පල සඳහා ලබාගත් අවශෝෂණ අගයන්හි මධ්‍යන්‍ය අගයන් අඩු කරනු ලැබේ.

12.2 අසාර්ථක ප්‍රතිනිෂ්පාදනය වැළැක්වීම සඳහා පියවර අතර මයික්‍රොවේල් වියළීමට ඉඩ නොතබන්න සහ මයික්‍රොවේල් රඳවනයට තට්ටු කළ වහාම ඊළඟ පියවර ක්‍රියාත්මක කරන්න.

12.3 භාවිතයට පෙර එක් එක් ප්‍රතික්‍රියාකාරකය මෘදු ලෙස සොලවන්න.

12.4 ඔබේ සම 0.5MH නිසා නැවතුම් ද්‍රාවණයෙන් ඈත් කරන්න₂SO₄විසඳුමක්.

12.5 කල් ඉකුත් වූ කට්ටල භාවිතා නොකරන්න.විවිධ කාණ්ඩවල ප්‍රතික්‍රියාකාරක හුවමාරු නොකරන්න, එසේ නොමැතිනම් එය සංවේදීතාව අඩු කරයි.

12.6 ELISA කට්ටල 2-8℃ දී තබා ගන්න, කැටි නොකරන්න.විවේක මයික්‍රොවෙල් තහඩු මුද්‍රා තබන්න, සියලුම ඉන්කියුබේෂන් වලදී සෘජු හිරු එළියෙන් වළකින්න.මයික්රොටයිටර් තහඩු ආවරණය කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.

12.7 උපස්ථර ද්‍රාවණය වර්ණ බවට පත් වුවහොත් එය අත්හැරිය යුතුය.ශුන්‍ය ප්‍රමිතියේ අවශෝෂණ අගය (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) ට වඩා අඩු නම් ප්‍රතික්‍රියාකාරක නරක අතට හැරිය හැක.

12.8 A ද්‍රාවණය සහ B ද්‍රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු වර්ණ ගැන්වීමේ ප්‍රතික්‍රියාව විනාඩි 15 ක් අවශ්‍ය වේ. තවද වර්ණය තීරණය කළ නොහැකි තරම් සැහැල්ලු නම් ඔබට ඉන්කියුබේෂන් කාල පරාසය විනාඩි 20ක් හෝ ඊට වැඩි කාලයක් දක්වා දීර්ඝ කළ හැක.මිනිත්තු 30 නොඉක්මවන්න, ඊට පටහැනිව, ඉන්කියුබේෂන් කාලය නිසි ලෙස කෙටි කරන්න.

12.9 ප්‍රශස්ත ප්‍රතික්‍රියා උෂ්ණත්වය 37℃ වේ.ඉහළ හෝ අඩු උෂ්ණත්වය සංවේදීතාවයේ සහ අවශෝෂණ අගයන්හි වෙනස්කම් වලට තුඩු දෙනු ඇත.

13. ගබඩා කිරීම

ගබඩා තත්ත්වය: 2-8℃.

ගබඩා කාලය: මාස 12 යි.