مصنوعات

1. پس منظر

ٹائلوسینایک میکولائڈ اینٹی بائیوٹک ہے، جو بنیادی طور پر اینٹی بیکٹیریل اور اینٹی مائکوپلاسما کے طور پر لاگو ہوتی ہے۔سخت MRLs قائم کیے گئے ہیں کیونکہ یہ دوا بعض گروپوں میں سنگین ضمنی اثرات کا باعث بن سکتی ہے۔

یہ کٹ ELISA ٹیکنالوجی پر مبنی ایک نئی پروڈکٹ ہے، جو عام آلات کے تجزیہ کے مقابلے میں تیز، آسان، درست اور حساس ہے اور اسے ایک آپریشن میں صرف 1.5 گھنٹے درکار ہوتے ہیں، یہ آپریشن کی خرابی اور کام کی شدت کو کافی حد تک کم کر سکتی ہے۔

2. ٹیسٹ کا اصول

یہ کٹ بالواسطہ مسابقتی ELISA ٹیکنالوجی پر مبنی ہے۔مائیکرو ٹائٹر کنویں کپلنگ اینٹیجن کے ساتھ لیپت ہیں۔نمونے میں ٹائلوسین کی باقیات اینٹی باڈی کے لیے مائکرو ٹائٹر پلیٹ پر لیپت اینٹیجن سے مقابلہ کرتی ہیں۔اینٹی اینٹی باڈی کے لیبل والے انزائم کے اضافے کے بعد، رنگ دکھانے کے لیے TMB سبسٹریٹ استعمال کیا جاتا ہے۔نمونے کے جذب کا منفی تعلق اس میں موجود ٹائلوسین سے ہوتا ہے، معیاری منحنی خطوط سے موازنہ کرنے کے بعد، ڈیلیشن فیکٹر سے ضرب کرنے کے بعد، نمونے میں ٹائلوسین کی باقیات کی مقدار کا اندازہ لگایا جا سکتا ہے۔

3. درخواستیں

اس کٹ کو جانوروں کے بافتوں (مرغی، سور کا گوشت، بطخ) اور دودھ، شہد، انڈے وغیرہ میں ٹائلوسین کی باقیات کے مقداری اور کوالیٹیٹو تجزیہ میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔

4. کراس رد عمل

ٹائلوسین ………………………………………………..100%

تلمیکوسین ……………………………………………… 2%

5. مطلوبہ مواد

5.1 سازوسامان:

----مائکروٹیٹر پلیٹ سپیکٹرو فوٹومیٹر (450nm/630nm)

---- روٹری بخارات یا نائٹروجن خشک کرنے والے آلات

---- ہوموجنائزر

---- شیکر

---- سینٹری فیوج

----تجزیاتی توازن (انڈکٹنس: 0.01 گرام)

---- گریجویٹ پائپیٹ: 10 ملی لٹر

---- ربڑ کا پائپیٹ بلب

---- والیومیٹرک فلاسک: 10 ملی لٹر

پولی اسٹیرین سینٹرفیوج ٹیوبیں: 50 ملی لٹر

---- مائیکروپیپٹس: 20-200 ملی لیٹر، 100-1000 ملی لیٹر

250 ملی لٹر

5.2 ری ایجنٹس:

----سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ (NaOH, AR)

----سوڈیم بائی کاربونیٹ (NaHCO_3,اے آر)

---- سوڈیم کاربونیٹ (NaCO₃, AR)

---- Trichloroacetic ایسڈ (AR)

---- Acetonitrile (AR)

---- ایتھل ایسیٹیٹ (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

----ڈی آئیونائزڈ پانی

6. کٹ کے اجزاء

l مائکرو ٹائٹر پلیٹ 96 کنویں کے ساتھ اینٹیجن کے ساتھ لیپت

معیاری حل (5 بوتلیں، 1ml/بوتل)

0ppb، 0.5ppb، 1.5ppb، 4.5ppb، 13.5ppb

l سپائکنگ معیاری کنٹرول: (1ml/بوتل)1ppm

l انزائم کنجوگیٹ 1 ملی لیٹر …………………………………… سرخ ٹوپی

l اینٹی باڈی محلول 7 ملی لیٹر……………….…… گرین ٹوپی

l حل A 7 ملی لیٹر ……………………………………… سفید ٹوپی

l حل B 7 ملی لیٹر...……………………………….. سرخ ٹوپی

l سٹاپ سلوشن 7 ملی لیٹر ……………………….. پیلی ٹوپی

l 20×مرتکز واش محلول 40ml

……………………………………… شفاف ٹوپی

l 4×مرتکز نکالنے کا حل 50ml

……………………………………………… نیلی ٹوپی

7. ریجنٹس کی تیاری:

حل 1:0.1mol/L NaOH حل

0.4 گرام NaOH سے 100 ملی لیٹر ڈیونائزڈ پانی کا وزن کریں اور مکمل طور پر مکس کریں۔

حل 2: 1mol/L NaOH حل

4 گرام NaOH سے 100 ملی لیٹر ڈیونائزڈ پانی کا وزن کریں اور مکمل طور پر مکس کریں۔

حل 3: کاربونیٹ بفر نمک

حل1: 0.2M PB

51.6 گرام Na کو تحلیل کریں۔₂HPO₄12H₂O، 8.7 گرام NaH₂PO₄· 2H₂O deionized پانی کے ساتھ اور 1000ml تک پتلا کریں۔

حل2: نکالنے کا حل

1:1( کے حجم کے تناسب میں ڈیونائزڈ پانی کے ساتھ 2×مرتکز نکالنے والے محلول کو پتلا کریں۔مثال کے طور پر 10 ملی لیٹر 2×ایکسٹریکشن سلوشن + 10 ملی لیٹر ڈیونائزڈ پانی)، جو نمونہ نکالنے کے لیے استعمال کیا جائے گا،اس محلول کو 4℃ پر 1 ماہ کے لیے محفوظ کیا جا سکتا ہے۔.

حل3: دھونے کا حل

1:19 کے حجم کے تناسب میں 20×مرتکز واش محلول کو ڈیونائزڈ پانی سے پتلا کریں۔مثال کے طور پر 5 ملی لیٹر 20 × واش محلول + 95 ملی لیٹر ڈیونائزڈ پانی)، جو پلیٹوں کو دھونے کے لیے استعمال کیا جائے گا۔اس محلول کو 4℃ پر 1 ماہ کے لیے محفوظ کیا جا سکتا ہے۔.

8. نمونے کی تیاری

8.1 آپریشن سے پہلے نوٹس اور احتیاطی تدابیر:

(a) براہ کرم تجربے کے عمل میں یک طرفہ ٹپس استعمال کریں، اور مختلف ریجنٹ جذب کرتے وقت ٹپس کو تبدیل کریں۔

(b) یقینی بنائیں کہ تمام آلات صاف ہیں۔

(c) ٹشو کے نمونے کو منجمد میں رکھیں۔

(d) پرکھ کے لیے ایک ہی وقت میں تیار نمونہ استعمال کیا جانا چاہیے۔

8.2 جانوروں کے ٹشو (مرغی، سور کا گوشت، وغیرہ)

---- ہوموجنائزر کے ساتھ نمونے کو ہم آہنگ کریں۔

----ایک 50 ملی لیٹر پولی اسٹیرین سنٹری فیوج ٹیوب میں 2.0±0.05 گرام ہوموجنیٹ لیں۔0.2M PB کے 2ml شامل کریں (حل1)، تحلیل کرنے کے لیے ہلائیں، اور پھر 8 ملی لیٹر ایتھائل ایسیٹیٹ ڈالیں اور 3 منٹ تک زور سے ہلائیں۔

---- علیحدگی کے لیے سینٹری فیوج: 3000 گرام/ محیط درجہ حرارت/ 5 منٹ۔

----سپرناٹینٹ نامیاتی مرحلے کے 4 ملی لیٹر کو 10 ملی لیٹر گلاس ٹیوب میں منتقل کریں، نائٹروجن گیس کی ندی کے نیچے 50-60℃ پانی کے غسل کے ساتھ خشک کریں۔

----بچی ہوئی خشک چیز کو 1ml n-hexane کے ساتھ پگھلا دیں، 30s تک گھلنے کے لیے ورٹیکس، اور پھر 1ml نکالنے کا محلول شامل کریں (حل2)، 1 منٹ کے لیے بھنور۔علیحدگی کے لیے سینٹری فیوج: 3000 گرام/ محیط درجہ حرارت/ 5 منٹ

---- سپرنٹنٹ این-ہیکسین مرحلے کو ہٹا دیں؛پرکھ کے لیے سبسٹریٹ آبی مرحلے کا 50μl لیں۔

کم کرنے کا عنصر: 1

8.2 دودھ

---- 100μl کچے دودھ کا نمونہ لیں، 900μl نکالنے کے محلول کے ساتھ ملائیں (حل2)، اور مکمل طور پر مکس کریں۔

---- پرکھ کے لیے تیار شدہ محلول کا 50μl لیں۔

کم کرنے کا عنصر: 10

9. پرکھ کا عمل

9.1 پرکھ سے پہلے نوٹس

9.1.1یقینی بنائیں کہ تمام ریجنٹس اور مائیکرو ویل کمرے کے درجہ حرارت پر ہیں (20-25℃)۔

9.1.2باقی تمام ری ایجنٹس کو 2-8 پر لوٹائیں۔℃استعمال کے فورا بعد.

9.1.3مائیکرو ویلز کو صحیح طریقے سے دھونا پرکھ کے عمل میں ایک اہم مرحلہ ہے۔یہ ELISA تجزیہ کی تولیدی صلاحیت کا ایک اہم عنصر ہے۔

9.1.4 اےروشنی کو باطل کریں اور انکیوبیشن کے دوران مائکرو ویلز کو ڈھانپیں۔

9.2 پرکھ کے مراحل

9.2.1 تمام ری ایجنٹس کو کمرے کے درجہ حرارت (20-25℃) پر 30 منٹ سے زیادہ کے لیے نکالیں، استعمال سے پہلے ہلکے سے ہلائیں۔

9.2.2 ضروری مائیکرو ویل نکالیں اور باقی کو فوری طور پر 2-8℃ پر زپ لاک بیگ میں واپس کریں۔

9.2.3 استعمال سے پہلے دھونے کے حل کو کمرے کے درجہ حرارت پر دوبارہ گرم کیا جانا چاہیے۔

9.2.4نمبر:ہر مائیکرو ویل پوزیشنوں کو نمبر دیا جائے اور تمام معیارات اور نمونے نقل میں چلائے جائیں۔معیارات اور نمونے کی پوزیشنیں ریکارڈ کریں۔

9.2.5Aڈی ڈی معیاری حل/نمونہ اور اینٹی باڈی حل: 50µl معیاری حل شامل کریں((کٹ فراہم کی)) یا متعلقہ کنوؤں کے لیے تیار کردہ نمونہ۔50µl اینٹی باڈی محلول شامل کریں(کٹ فراہم کی)۔پلیٹ کو دستی طور پر ہلاتے ہوئے آہستہ سے مکس کریں اور 30 ​​منٹ کے لیے 37℃ پر ڈھانپ کر سینکیں۔

9.2.6دھونا: کور کو آہستہ سے ہٹائیں اور کنوؤں سے مائع کو صاف کریں اور مائیکرو ویلز کو 250µl پتلے ہوئے واش محلول سے دھولیں (حل3) 10 سیکنڈ کے وقفے سے 4-5 بار۔جاذب کاغذ کے ساتھ بقایا پانی کو جذب کریں (باقی ہوا کے بلبلے کو غیر استعمال شدہ نوک سے ختم کیا جا سکتا ہے)۔

9.2.7انزائم کنجوگیٹ شامل کریں۔: 100 ملی لیٹر انزائم کنجوگیٹ محلول شامل کریںکٹ فراہم کی) ہر ایک کنویں میں آہستہ سے مکس کریں اور 30 ​​منٹ تک 37 ℃ پر ڈھانپ کر سینکیں۔دوبارہ دھونے کا مرحلہ دہرائیں۔.

9.2.8رنگ کاری: 50µl حل A( شامل کریںکٹ فراہم کی) اور 50µl حل B(کٹ فراہم کی) ہر ایک کنویں تک۔آہستہ سے مکس کریں اور 15 منٹ تک 37℃ پر ڈھانپ کر سینکیں۔

9.2.9پیمائش کریں۔: اسٹاپ سلوشن کا 50µl شامل کریں(کٹ فراہم کی) ہر ایک کنویں تک۔آہستہ سے مکس کریں اور 450nm پر جاذبیت کی پیمائش کریں (450/630nm کی دوہری طول موج کے ساتھ پیمائش کی تجویز کی گئی ہے۔ سٹاپ سلوشن شامل کرنے کے بعد 5 منٹ کے اندر نتیجہ پڑھیں)۔

10. نتائج

10.1 فیصد جذب

معیارات اور نمونوں کے لیے حاصل کردہ جاذب قدروں کی اوسط قدروں کو پہلے معیار (صفر معیاری ) کی جاذب قدر سے تقسیم کیا جاتا ہے اور 100% سے ضرب کیا جاتا ہے۔اس طرح صفر کے معیار کو 100% کے برابر بنایا جاتا ہے اور جاذبیت کی قدریں فیصد میں بتائی جاتی ہیں۔

B

جذب (%) = —— × 100%

B0

بی ——جذب کا معیار (یا نمونہ)

B0 —— جذب صفر معیار

10.2 معیاری وکر

----ایک معیاری منحنی خطوط کھینچنے کے لیے: معیارات کی جاذبیت کی قدر کو y-axis کے طور پر لیں، tylosin اسٹینڈرڈز سلوشن (ppb) کے ارتکاز کا نیم لوگارتھمک بطور x-محور۔

----ہر نمونے (ppb) کی ٹائلوسین ارتکاز، جسے کیلیبریشن کریو سے پڑھا جا سکتا ہے، اس کے بعد آنے والے ہر نمونے کے متعلقہ Dilution عنصر سے ضرب کیا جاتا ہے، اور نمونے کا اصل ارتکاز حاصل کیا جاتا ہے۔

برائے مہربانی نوٹ کریں:

ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے خصوصی سافٹ ویئر تیار کیا گیا ہے، جو درخواست پر فراہم کیا جا سکتا ہے۔

11. حساسیت، درستگی اور درستگی

ٹیسٹ کی حساسیت:1.5ppb

پتہ لگانے کی حد:

جانوروں کے ٹشو ……………………………………………… 1.5ppb دودھ ………………………………………………………………..15ppb درستگی:

جانوروں کے بافتوں ………………………………………… 80±15%

دودھ ………………………………………………………… 80±10%

درستگی:

ELISA کٹ کا تغیر گتانک 10% سے کم ہے۔

12. نوٹس

12.1 معیارات اور نمونوں کے لیے حاصل کردہ جاذبیت کی اوسط قدریں کم ہو جائیں گی اگر ری ایجنٹس اور نمونوں کو کمرے کے درجہ حرارت (20-25℃) پر ریگولیٹ نہیں کیا گیا ہے۔

12.2 ناکام تولیدی صلاحیت سے بچنے کے لیے مائیکرو ویلز کو مراحل کے درمیان خشک نہ ہونے دیں اور مائیکرو ویلز ہولڈر کو تھپتھپانے کے فوراً بعد اگلا مرحلہ چلائیں۔

12.3 استعمال کرنے سے پہلے ہر ریجنٹ کو آہستہ سے ہلائیں۔

12.4 اپنی جلد کو سٹاپ سلوشن سے دور رکھیں کیونکہ یہ 0.5MH ہے۔₂SO₄حل

12.5 پرانی کٹس کا استعمال نہ کریں۔مختلف بیچوں کے ری ایجنٹس کا تبادلہ نہ کریں، ورنہ اس سے حساسیت ختم ہو جائے گی۔

12.6 ELISA کٹس کو 2-8℃ پر رکھیں، منجمد نہ کریں۔باقی مائیکرو ویل پلیٹوں کو سیل کریں، تمام انکیوبیشن کے دوران سیدھی سورج کی روشنی سے بچیں۔مائکرو ٹائٹر پلیٹوں کو ڈھانپنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

12.7 سبسٹریٹ محلول کو ترک کر دینا چاہیے اگر یہ رنگ بدل جائے۔اگر صفر معیار کی جاذبیت کی قدر (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) سے کم ہو تو ریجنٹس خراب ہو سکتے ہیں۔

12.8 محلول A اور محلول B کے اضافے کے بعد رنگت کے رد عمل کو 15 منٹ کی ضرورت ہوتی ہے۔ اور اگر رنگ بہت ہلکا ہے تو آپ انکیوبیشن ٹائم رینج کو 20 منٹ یا اس سے زیادہ تک بڑھا سکتے ہیں۔کبھی بھی 30 منٹ سے زیادہ نہ ہوں، اس کے برعکس، انکیوبیشن کے وقت کو مناسب طریقے سے کم کریں۔

12.9 بہترین رد عمل کا درجہ حرارت 37 ℃ ہے۔زیادہ یا کم درجہ حرارت حساسیت اور جاذبیت کی قدروں میں تبدیلی کا باعث بنے گا۔

13. ذخیرہ

سٹوریج کی حالت: 2-8℃

ذخیرہ کرنے کی مدت: 12 ماہ.