ટાયલોસિનના જથ્થાત્મક વિશ્લેષણ માટે સ્પર્ધાત્મક એન્ઝાઇમ ઇમ્યુનોસે કીટ
માટે સ્પર્ધાત્મક એન્ઝાઇમ ઇમ્યુનોસે કીટ
નું જથ્થાત્મક વિશ્લેષણટાયલોસિન
1. પૃષ્ઠભૂમિ
ટાયલોસિનમેક્રોલાઇડ એન્ટિબાયોટિક છે, જે મુખ્યત્વે એન્ટીબેક્ટેરિયલ અને એન્ટિ-માયકોપ્લાઝ્મા તરીકે લાગુ પડે છે.સખત MRL ની સ્થાપના કરવામાં આવી છે કારણ કે આ દવા અમુક જૂથોમાં ગંભીર આડઅસર તરફ દોરી શકે છે.
આ કિટ ELISA ટેક્નોલોજી પર આધારિત નવી પ્રોડક્ટ છે, જે સામાન્ય ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટલ એનાલિસિસની સરખામણીમાં ઝડપી, સરળ, સચોટ અને સંવેદનશીલ છે અને એક ઑપરેશનમાં માત્ર 1.5 કલાકની જરૂર છે, તે ઑપરેશનની ભૂલ અને કામની તીવ્રતાને નોંધપાત્ર રીતે ઘટાડી શકે છે.
2. પરીક્ષણ સિદ્ધાંત
આ કિટ પરોક્ષ-સ્પર્ધાત્મક ELISA ટેક્નોલોજી પર આધારિત છે.માઇક્રોટાઇટર કુવાઓ કપલિંગ એન્ટિજેન સાથે કોટેડ છે.નમૂનામાં ટાયલોસિન અવશેષો એન્ટિબોડી માટે માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ પર કોટેડ એન્ટિજેન સાથે સ્પર્ધા કરે છે.એન્ટિ-એન્ટિબોડી લેબલવાળા એન્ઝાઇમ ઉમેર્યા પછી, રંગ બતાવવા માટે TMB સબસ્ટ્રેટનો ઉપયોગ થાય છે.નમૂનાનું શોષણ તેમાં રહેલ ટાયલોસિન સાથે નકારાત્મક રીતે સંબંધિત છે, પ્રમાણભૂત વળાંક સાથે સરખામણી કર્યા પછી, મંદન પરિબળ દ્વારા ગુણાકાર કર્યા પછી, નમૂનામાં ટાયલોસિન અવશેષની માત્રાની ગણતરી કરી શકાય છે.
3. અરજીઓ
આ કીટનો ઉપયોગ પ્રાણીની પેશીઓ (ચિકન, ડુક્કરનું માંસ, બતક) અને દૂધ, મધ, ઈંડા વગેરેમાં ટાયલોસિન અવશેષોના જથ્થાત્મક અને ગુણાત્મક વિશ્લેષણમાં થઈ શકે છે.
4. ક્રોસ-પ્રતિક્રિયાઓ
ટાયલોસિન ………………………………………………..100%
ટિલ્મીકોસિન ……………………………………………… 2%
5. જરૂરી સામગ્રી
5.1 સાધનો:
----માઈક્રોટાઈટર પ્લેટ સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (450nm/630nm)
----રોટરી બાષ્પીભવક અથવા નાઇટ્રોજન સૂકવવાના સાધનો
----હોમોજીનાઇઝર
---- શેકર
----સેન્ટ્રીફ્યુજ
---- વિશ્લેષણાત્મક સંતુલન (ઇન્ડક્ટન્સ: 0.01 ગ્રામ)
----ગ્રેજ્યુએટેડ પીપેટ: 10ml
----રબર પિપેટ બલ્બ
----વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્ક: 10 મિલી
----પોલીસ્ટાયરીન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ: 50ml
----માઈક્રોપીપેટ્સ: 20-200ml, 100-1000ml
250ml-મલ્ટિપીપેટ
5.2 રીએજન્ટ્સ:
----સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ (NaOH, AR)
----સોડિયમ બાયકાર્બોનેટ (NaHCO3,AR)
---- સોડિયમ કાર્બોનેટ (NaCO3, AR)
----ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડ (AR)
---- એસેટોનિટ્રિલ (AR)
----ઇથિલ એસીટેટ (AR)
┅┅n-Hexane (AR)
---- ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી
6. કિટ ઘટકો
l એન્ટિજેન સાથે કોટેડ 96 કુવાઓ સાથે માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ
l માનક સોલ્યુશન્સ (5 બોટલ, 1ml/બોટલ)
0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb
l સ્પાઇકિંગ પ્રમાણભૂત નિયંત્રણ: (1ml/બોટલ)1ppm
l એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ 1 મિલી ………………………………………લાલ કેપ
l એન્ટિબોડી સોલ્યુશન 7 મિલી ………………………………ગ્રીન કેપ
l સોલ્યુશન A 7 મિલી……………………………….. સફેદ કેપ
l સોલ્યુશન B 7 મિલી ...……………………………….. લાલ કેપ
l સ્ટોપ સોલ્યુશન 7ml.……………………….. પીળી કેપ
l 20×કેન્દ્રિત ધોવાનું દ્રાવણ 40ml
…………………………………..…પારદર્શક ટોપી
l 4×કેન્દ્રિત નિષ્કર્ષણ ઉકેલ 50ml
……………………………………………….વાદળી ટોપી
7. રીએજન્ટ તૈયારી:
ઉકેલ 1:0.1mol/L NaOH સોલ્યુશન
0.4g NaOH થી 100ml ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીનું વજન કરો અને સંપૂર્ણપણે ભળી દો.
ઉકેલ 2: 1mol/L NaOH સોલ્યુશન
4g NaOH થી 100ml ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીનું વજન કરો અને સંપૂર્ણપણે ભળી દો.
ઉકેલ 3: કાર્બોનેટ બફર મીઠું
ઉકેલ1: 0.2M PB
51.6 ગ્રામ Na ઓગાળો2HPO4·12એચ2O, NaH નું 8.7g2PO4·2એચ2ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી સાથે O અને 1000ml સુધી પાતળું કરો.
ઉકેલ2: નિષ્કર્ષણ ઉકેલ
1:1(ના વોલ્યુમ રેશિયોમાં ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી સાથે 2×કેન્દ્રિત નિષ્કર્ષણ દ્રાવણને પાતળું કરોદા.ત. 2×એક્સ્ટ્રક્શન સોલ્યુશનનું 10ml + ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીનું 10ml), જેનો ઉપયોગ નમૂના નિષ્કર્ષણ માટે કરવામાં આવશે,આ સોલ્યુશનને 1 મહિના માટે 4℃ પર સ્ટોર કરી શકાય છે.
ઉકેલ3: ઉકેલ ધોવા
20×કેન્દ્રિત વોશ સોલ્યુશનને ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીથી 1:19(ના વોલ્યુમ રેશિયોમાં પાતળું કરો.દા.ત. 20×વોશ સોલ્યુશનનું 5ml + ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીનું 95ml), જેનો ઉપયોગ પ્લેટો ધોવા માટે કરવામાં આવશે.આ સોલ્યુશનને 1 મહિના માટે 4℃ પર સ્ટોર કરી શકાય છે.
8. નમૂના તૈયારીઓ
8.1 ઓપરેશન પહેલા સૂચના અને સાવચેતીઓ:
(a) મહેરબાની કરીને પ્રયોગની પ્રક્રિયામાં વન-ઑફ ટીપ્સનો ઉપયોગ કરો અને જ્યારે વિવિધ રીએજન્ટને શોષી લે ત્યારે ટીપ્સ બદલો.
(b) ખાતરી કરો કે તમામ સાધનો સ્વચ્છ છે.
(c) પેશીના નમૂનાને ફ્રીઝમાં રાખો.
(d) તૈયાર નમૂનાનો એક જ વારમાં પરીક્ષા માટે ઉપયોગ કરવો જોઈએ.
8.2 પશુ પેશી (ચિકન, ડુક્કરનું માંસ, વગેરે)
---- હોમોજેનાઇઝર સાથે નમૂનાને એકરૂપ બનાવો;
---- 50ml પોલિસ્ટરીન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 2.0±0.05 ગ્રામ હોમોજેનેટ લો;0.2M PB ના 2ml ઉમેરો (ઉકેલ1) , ઓગળવા માટે હલાવો, અને પછી 8ml એથિલ એસીટેટ ઉમેરો અને 3 મિનિટ માટે જોરથી હલાવો;
----વિભાજન માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ: 3000 ગ્રામ / આસપાસનું તાપમાન / 5 મિનિટ.
----સુપરનેટન્ટ ઓર્ગેનિક તબક્કાના 4ml ને 10ml કાચની ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરો, નાઇટ્રોજન ગેસ પ્રવાહ હેઠળ 50-60℃ પાણીના સ્નાન સાથે સૂકા;
---- સૂકા બચેલાને 1ml n-hexane સાથે ઓગાળો, 30s માટે વમળ ઓગળવા માટે, અને પછી 1ml નિષ્કર્ષણ દ્રાવણ ઉમેરો (ઉકેલ2), 1 મિનિટ માટે વમળ.વિભાજન માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ: 3000 ગ્રામ / આસપાસનું તાપમાન / 5 મિનિટ
----સુપરનેટન્ટ એન-હેક્સેન તબક્કો દૂર કરો;પરખ માટે સબસ્ટ્રેટ જલીય તબક્કાના 50μl લો.
મંદન પરિબળ: 1
8.2 દૂધ
---- 100μl કાચા દૂધનો નમૂનો લો, 900μl નિષ્કર્ષણ દ્રાવણ સાથે મિક્સ કરો (ઉકેલ2), અને સંપૂર્ણપણે ભળી દો.
----પરીક્ષા માટે તૈયાર દ્રાવણમાંથી 50μl લો.
મંદન પરિબળ: 10
9. પરીક્ષા પ્રક્રિયા
9.1 પરીક્ષા પહેલાં સૂચના
9.1.1ખાતરી કરો કે બધા રીએજન્ટ્સ અને માઇક્રોવેલ ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) છે.
9.1.2બાકીના બધા રીએજન્ટને 2-8 પર પાછા આવો℃ઉપયોગ કર્યા પછી તરત જ.
9.1.3માઇક્રોવેલને યોગ્ય રીતે ધોવા એ પરીક્ષાની પ્રક્રિયામાં એક મહત્વપૂર્ણ પગલું છે;ELISA વિશ્લેષણની પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા માટે તે મહત્વપૂર્ણ પરિબળ છે.
9.1.4 એપ્રકાશને રદબાતલ કરો અને સેવન દરમિયાન માઇક્રોવેલને આવરી લો.
9.2 પરીક્ષણ પગલાં
9.2.1 બધા રીએજન્ટ્સને ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) 30 મિનિટથી વધુ સમય માટે બહાર કાઢો, ઉપયોગ કરતા પહેલા હળવા હાથે હલાવો.
9.2.2 જરૂરી માઇક્રોવેલ મેળવો અને બાકીનાને 2-8℃ પર તરત જ ઝિપ-લોક બેગમાં પરત કરો.
9.2.3 પાતળું ધોવાનું સોલ્યુશન ઉપયોગ કરતા પહેલા ઓરડાના તાપમાને ફરીથી ગરમ કરવું જોઈએ.
9.2.4નંબર:દરેક માઇક્રોવેલ પોઝિશનને ક્રમાંકિત કરો અને તમામ ધોરણો અને નમૂનાઓ ડુપ્લિકેટમાં ચલાવવા જોઈએ.ધોરણો અને નમૂનાઓની સ્થિતિ રેકોર્ડ કરો.
9.2.5Aડીડી સ્ટાન્ડર્ડ સોલ્યુશન/સેમ્પલ અને એન્ટિબોડી સોલ્યુશન: 50µl પ્રમાણભૂત ઉકેલ ઉમેરો((કીટ આપવામાં આવી છે)) અથવા અનુરૂપ કુવાઓ માટે તૈયાર નમૂના.50µl એન્ટિબોડી સોલ્યુશન ઉમેરો(કીટ આપવામાં આવી છે).પ્લેટને મેન્યુઅલી હલાવીને હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 37°C પર 30 મિનિટ માટે સેકવો.
9.2.6ધોવું: કવરને હળવેથી દૂર કરો અને કૂવાઓમાંથી પ્રવાહીને શુદ્ધ કરો અને માઇક્રોવેલને 250µl પાતળું ધોવાનું સોલ્યુશન વડે કોગળા કરો (ઉકેલ3) 4-5 વખત માટે 10 સે.ના અંતરાલ પર.અવશેષ પાણીને શોષક કાગળ વડે શોષી લો (બાકીના હવાના બબલને ન વપરાયેલ ટીપથી દૂર કરી શકાય છે).
9.2.7એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ ઉમેરો: એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ સોલ્યુશનનું 100 મિલી ઉમેરો(કીટ આપવામાં આવી છે) દરેક કૂવામાં હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 37°C તાપમાને 30 મિનિટ સુધી સેકવો.ધોવાનું પગલું ફરીથી પુનરાવર્તન કરો.
9.2.8રંગ: 50µl ઉકેલ A( ઉમેરોકીટ આપવામાં આવી છે) અને 50µl દ્રાવણ B(કીટ આપવામાં આવી છે) દરેક કૂવા માટે.હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 37°C પર 15 મિનિટ સુધી સેકવો.
9.2.9માપ: 50µl સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેરો(કીટ આપવામાં આવી છે) દરેક કૂવા માટે.હળવેથી મિક્સ કરો અને શોષકતાને 450nm પર માપો (તે 450/630nm ની ડ્યુઅલ-વેવલન્થ સાથે માપવાનું સૂચન કર્યું છે. સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેર્યા પછી 5 મિનિટની અંદર પરિણામ વાંચો).
10. પરિણામો
10.1 ટકા શોષણ
ધોરણો અને નમૂનાઓ માટે મેળવેલા શોષક મૂલ્યોના સરેરાશ મૂલ્યોને પ્રથમ ધોરણ (શૂન્ય ધોરણ) ના શોષક મૂલ્ય દ્વારા વિભાજિત કરવામાં આવે છે અને 100% દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે.શૂન્ય ધોરણ આમ 100% ની બરાબર બનાવવામાં આવે છે અને શોષક મૂલ્યો ટકાવારીમાં ટાંકવામાં આવે છે.
B
શોષણ (%) = —— × 100%
B0
B ——શોષક ધોરણ (અથવા નમૂના)
B0 ——શોષક શૂન્ય ધોરણ
10.2 પ્રમાણભૂત વળાંક
---- પ્રમાણભૂત વળાંક દોરવા માટે: ધોરણોના શોષક મૂલ્યને y-અક્ષ તરીકે લો, ટાયલોસિન સ્ટાન્ડર્ડ સોલ્યુશન (ppb) ની સાંદ્રતાના અર્ધ લઘુગણકને x-અક્ષ તરીકે લો.
----દરેક નમૂના (ppb) ની ટાયલોસિન સાંદ્રતા, જે કેલિબ્રેશન વળાંકમાંથી વાંચી શકાય છે, તેને અનુસરવામાં આવતા દરેક નમૂનાના અનુરૂપ મંદન પરિબળ દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે, અને નમૂનાની વાસ્તવિક સાંદ્રતા પ્રાપ્ત થાય છે.
મહેરબાની કરીને નોંધ કરો:
ડેટા વિશ્લેષણ માટે વિશેષ સોફ્ટવેર વિકસાવવામાં આવ્યું છે, જે વિનંતી પર પ્રદાન કરી શકાય છે.
11. સંવેદનશીલતા, ચોકસાઈ અને ચોકસાઈ
પરીક્ષણ સંવેદનશીલતા:1.5ppb
તપાસ મર્યાદા:
પશુ પેશી………………………………………………1.5ppb દૂધ …………………………………………………………..15ppb ચોકસાઈ:
પ્રાણી પેશી ……………………………………………… 80±15%
દૂધ ………………………………………………………… 80±10%
ચોકસાઇ:
ELISA કિટનો ભિન્નતા ગુણાંક 10% કરતા ઓછો છે.
12. સૂચના
12.1 ધોરણો અને નમૂનાઓ માટે મેળવેલા શોષક મૂલ્યોના સરેરાશ મૂલ્યોમાં ઘટાડો થશે જો રીએજન્ટ્સ અને નમૂનાઓ ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) પર નિયમન કરવામાં આવ્યાં નથી.
12.2 અસફળ પુનઃઉત્પાદનક્ષમતાને ટાળવા અને માઇક્રોવેલ ધારકને ટેપ કર્યા પછી તરત જ આગળનું પગલું ચલાવવા માટે પગલાંઓ વચ્ચે માઇક્રોવેલને સૂકવવા ન દો.
12.3 ઉપયોગ કરતા પહેલા દરેક રીએજન્ટને હળવા હાથે હલાવો.
12.4 તમારી ત્વચાને સ્ટોપ સોલ્યુશનથી દૂર રાખો કારણ કે તે 0.5MH છે2SO4ઉકેલ
12.5 જૂની કીટનો ઉપયોગ કરશો નહીં.વિવિધ બેચના રીએજન્ટ્સનું વિનિમય કરશો નહીં, નહીં તો તે સંવેદનશીલતા ગુમાવશે.
12.6 ELISA કિટ્સને 2-8℃ પર રાખો, સ્થિર થશો નહીં.બાકીની માઈક્રોવેલ પ્લેટોને સીલ કરો, તમામ ઇન્ક્યુબેશન દરમિયાન સીધો સૂર્યપ્રકાશ ટાળો.માઇક્રોટાઇટર પ્લેટોને આવરી લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
12.7 સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન જો રંગ કરે તો તેને છોડી દેવો જોઈએ.જો શૂન્ય ધોરણનું શોષક મૂલ્ય (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) કરતાં ઓછું હોય તો રીએજન્ટ ખરાબ થઈ શકે છે.
12.8 સોલ્યુશન A અને સોલ્યુશન B ઉમેર્યા પછી કલરેશન રિએક્શનને 15 મિનિટની જરૂર પડે છે. અને જો રંગ નક્કી કરવા માટે ખૂબ હલકો હોય તો તમે ઇન્ક્યુબેશન સમય રેન્જને 20 મિનિટ અથવા તેથી વધુ લંબાવી શકો છો.30મિનિટથી વધુ કદી ન કરો, તેનાથી વિપરીત, સેવનનો સમય યોગ્ય રીતે ઓછો કરો.
12.9 શ્રેષ્ઠ પ્રતિક્રિયા તાપમાન 37℃ છે.ઉચ્ચ અથવા નીચું તાપમાન સંવેદનશીલતા અને શોષક મૂલ્યોમાં ફેરફાર તરફ દોરી જશે.
13. સંગ્રહ
સંગ્રહ સ્થિતિ: 2-8℃.
સંગ્રહ સમયગાળો: 12 મહિના.
