бүтээгдэхүүн

Tylosin-ийн тоон шинжилгээнд зориулсан өрсөлдөх чадвартай ферментийн дархлааны шинжилгээний иж бүрдэл

Товч тодорхойлолт:

Тилозин нь макролидын антибиотик бөгөөд голчлон бактерийн эсрэг ба микоплазмын эсрэг үйлчилгээтэй.Энэ эм нь зарим бүлэгт ноцтой гаж нөлөө үүсгэж болзошгүй тул хатуу MRL-ийг тогтоосон.

Энэхүү иж бүрдэл нь ELISA технологид суурилсан шинэ бүтээгдэхүүн бөгөөд энгийн багажийн шинжилгээтэй харьцуулахад хурдан, хялбар, үнэн зөв, мэдрэмжтэй, нэг удаагийн үйл ажиллагаанд ердөө 1.5 цаг зарцуулдаг тул үйл ажиллагааны алдаа, ажлын эрчмийг эрс багасгадаг.


Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй

Бүтээгдэхүүний шошго

Өрсөлдөх чадвартай ферментийн дархлаа судлалын иж бүрдэл

-ийн тоон шинжилгээТилозин


1. Суурь

Тилозиннь макролидын антибиотик бөгөөд голчлон бактерийн эсрэг ба микоплазмын эсрэг үйлчилгээтэй.Энэ эм нь зарим бүлэгт ноцтой гаж нөлөө үүсгэж болзошгүй тул хатуу MRL-ийг тогтоосон.

Энэхүү иж бүрдэл нь ELISA технологид суурилсан шинэ бүтээгдэхүүн бөгөөд энгийн багажийн шинжилгээтэй харьцуулахад хурдан, хялбар, үнэн зөв, мэдрэмжтэй, нэг удаагийн үйл ажиллагаанд ердөө 1.5 цаг зарцуулдаг тул үйл ажиллагааны алдаа, ажлын эрчмийг эрс багасгадаг.

2. Туршилтын зарчим

Энэхүү хэрэгсэл нь шууд бус өрсөлдөх чадвартай ELISA технологи дээр суурилдаг.Микротитерийн цооногууд нь холбох антигенээр бүрсэн байна.Дээж дэх тилозины үлдэгдэл нь эсрэгбиеийн хувьд микротитр хавтан дээр бүрсэн эсрэгтөрөгчтэй өрсөлддөг.Эсрэгбиеийн эсрэг шошготой ферментийг нэмсний дараа TMB субстратыг өнгийг харуулахад ашигладаг.Дээжний шингээлт нь түүн дэх тилозины агууламжтай сөргөөр хамааралтай бөгөөд стандарт муруйг шингэрүүлэлтийн коэффициентоор үржүүлсэнтэй харьцуулсны дараа дээж дэх тилозины үлдэгдлийн хэмжээг тооцоолж болно.

3. Хэрэглээ

Энэхүү иж бүрдэл нь амьтны эд (тахиа, гахайн мах, нугас) болон сүү, зөгийн бал, өндөг гэх мэт дэх тилозины үлдэгдлийг тоон болон чанарын шинжилгээнд ашиглаж болно.

4. Хөндлөнгийн урвал

Тилозин……………………………………………..100%

Тилмикозин……………………………………………<2%

5. Шаардлагатай материал

5.1 Тоног төхөөрөмж:

---- Микротитр хавтангийн спектрофотометр (450нм/630нм)

----Эргэдэг ууршуулагч буюу азотоор хатаах багаж

----гомогенжүүлэгч

---- Шейкер

---- Центрифуг

----Аналитик тэнцвэр (индукц: 0.01г)

----Төгссөн пипетк: 10мл

---- Резинэн пипеткийн чийдэн

----Эзэлхүүний колбо: 10мл

----Полистирол центрифугийн хоолой: 50мл

----Микропипетк: 20-200мл, 100-1000мл

250 мл олон талт

5.2 Урвалжууд:

----Натрийн гидроксид (NaOH, AR)

---- Натрийн бикарбонат (NaHCO3,AR)

---- Натрийн карбонат (NaCO3, AR)

----Трихлора цууны хүчил (AR)

---- Ацетонитрил (AR)

----Этил ацетат (AR)

┅┅n-Гексан (AR)

----Ионгүйжүүлсэн ус

6. Иж бүрдэл хэсгүүд

л Антигенээр бүрсэн 96 цооног бүхий микротитр хавтан

л Стандарт уусмал (5 шил, 1 мл/шил)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l Баяжуулалтын стандарт хяналт: (1 мл/лонх)1ppm

л Ферментийн коньюгат 1мл…………………….…улаан малгай

л Эсрэгбиеийн уусмал 7мл……………….……ногоон малгай

l Уусмал А 7мл…………………….….……цагаан таг

l Уусмал В 7мл……………………………..улаан малгай

l Зогсоолын уусмал 7мл.……………….……….шар малгай

л 20×өтгөрүүлсэн угаалгын уусмал 40мл

…………………………………………………..ил тод малгай

л 4×өтгөрүүлсэн экстракцийн уусмал 50мл

………………………………………………….хөх малгай

7. Урвалж бэлтгэх:

Шийдэл 1:0.1моль/л NaOH уусмал

0.4 г NaOH-ийг 100 мл ионгүйжүүлсэн ус хүртэл жинлэн бүрэн холино.

Шийдэл 2: 1моль/л NaOH уусмал

4г NaOH-ийг 100мл ионгүйжүүлсэн ус хүртэл жинлээд бүрэн холино.

Шийдэл 3: Карбонат буферийн давс

Шийдэл1: 0.2M PB

51.6 г Na-г уусгана2HPO4· 12 цаг2O, 8.7г NaH2PO4· 2H2O ионгүйжүүлсэн усаар хийгээд 1000 мл хүртэл шингэлнэ.

Шийдэл2: Олборлох уусмал

2 × концентрацитай экстракцийн уусмалыг ионгүйжүүлсэн усаар 1: 1 эзэлхүүний харьцаагаар шингэлнэ.жишээ нь 10мл 2хэкстракцийн уусмал + 10мл ионгүйжүүлсэн ус), дээж олборлоход ашиглах,Энэ уусмалыг 4 хэмийн температурт 1 сар хадгалах боломжтой.

Шийдэл3: Угаах уусмал

20 × концентрацитай угаалгын уусмалыг ионгүйжүүлсэн усаар 1:19 харьцаагаар шингэлнэ.Жишээлбэл, 5 мл 20 × угаах уусмал + 95 мл ионгүйжүүлсэн ус), ялтсуудыг угаахад ашиглах болно.Энэ уусмалыг 4 хэмийн температурт 1 сар хадгалах боломжтой.

8. Дээж бэлтгэх

8.1 Ашиглалтын өмнөх анхааруулга, урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ:

(a) Туршилтын явцад нэг удаагийн зөвлөмжийг ашиглаж, өөр урвалж шингээх үед зөвлөмжийг өөрчилнө үү.

(б) Бүх хэрэгсэл цэвэр байгаа эсэхийг шалгаарай.

(в) Эд эсийн дээжийг хөлдөөж хадгална.

(г) Бэлтгэсэн дээжийг шинжилгээнд нэн даруй хэрэглэнэ.

8.2 Амьтны эд (тахиа, гахайн мах гэх мэт)

----Дээжийг гомогенжүүлэгчээр нэгэн төрлийн болгох;

----2.0±0.05г гомогенатыг 50мл полистирол центрифугийн хоолойд хийнэ;2мл 0.2М PB нэмнэ (шийдэл1) уусгахын тулд сэгсэрч, дараа нь 8 мл этил ацетат нэмээд 3 минутын турш хүчтэй сэгсэрнэ;

----Центрифуг ялгах: 3000гр / орчны температур / 5мин.

---- 4 мл-ийн органик фазыг 10 мл шилэн хоолойд хийж, азотын хийн урсгалын дор 50-60 ℃ усан ваннд хатаана;

---- Хуурай үлдэгдлийг 1 мл н-гексанаар уусгаж, уусгахын тулд 30 секунд эргүүлээд дараа нь 1 мл экстракцийн уусмал нэмнэ (шийдэл2), 1 минутын турш эргүүлнэ.салгах центрифуг: 3000г / орчны температур / 5мин

----Н-гексан фазын дээд давхаргыг зайлуулах;Шинжилгээнд зориулж субстратын усан фазаас 50 мкл авна.

 

Шингэрүүлэх хүчин зүйл: 1

 

8.2 Сүү

---- 100мкл түүхий сүүний дээж авч, 900мкл хандлах уусмал (шийдэл2), бүрэн холино.

---- Шинжилгээнд бэлдсэн уусмалаас 50 мкл авна.

 

Шингэрүүлэх хүчин зүйл: 10

 

9. Шинжилгээний үйл явц

9.1 Шинжилгээ хийхээс өмнө анхааруулах

9.1.1Бүх урвалж болон бичил цооногууд бүгд өрөөний температурт (20-25℃) байгаа эсэхийг шалгаарай.

9.1.2Үлдсэн бүх урвалжийг 2-8 болгож буцаанахэрэглэсний дараа шууд.

9.1.3Бичил цооногийг зөв угаах нь шинжилгээний үйл явцын чухал алхам юм;Энэ нь ELISA шинжилгээний дахин давтагдахад чухал хүчин зүйл юм.

9.1.4 Агэрлийг хүчингүй болгож, инкубацийн үед бичил цооногийг таглана.

9.2 Шинжилгээний алхамууд

9.2.1 Бүх урвалжийг тасалгааны температурт (20-25℃) 30 минутаас дээш хугацаагаар гаргаж аваад хэрэглэхийн өмнө зөөлөн сэгсэрнэ.

9.2.2 Шаардлагатай бичил цооногийг гаргаж, үлдсэнийг нь 2-8 хэмийн температурт нэн даруй цахилгаан цоожтой уутанд хийнэ.

9.2.3 Угаах шингэрүүлсэн уусмалыг хэрэглэхийн өмнө тасалгааны температурт дахин халаана.

9.2.4Тоо:Бичил цооногийн байрлал бүрийг дугаарлаж, бүх стандарт, дээжийг давхардсан байх ёстой.Стандарт болон дээжийн байрлалыг тэмдэглэ.

9.2.5Add стандарт уусмал/дээж ба эсрэгбиеийн уусмал: 50мкл стандарт уусмал нэмнэ((иж бүрдэл өгсөн)) эсвэл бэлтгэсэн дээжийг харгалзах худагт хийнэ.50мкл эсрэгбиеийн уусмал нэмнэ(иж бүрдэл өгсөн).Хавтанг гараар сэгсэрч зөөлөн хольж, таглаад 37 хэмд 30 минут байлгана.

9.2.6Угаах: Бүрхүүлийг зөөлөн авч, цооногийн шингэнийг цэвэршүүлж, бичил цооногийг 250 мкл шингэрүүлсэн угаалгын уусмалаар зайлна (шийдэл3) 10 секундын интервалаар 4-5 удаа.Үлдэгдэл усыг шингээгч цаасаар шингээнэ (ашиглагдаагүй үзүүрээр үлдсэн агаарын бөмбөлгийг арилгах боломжтой).

9.2.7Ферментийн коньюгат нэмнэ: 100мл ферментийн коньюгат уусмал нэмнэ(иж бүрдэл өгсөн) худаг бүрт зөөлөн хольж, таглаад 37 хэмд 30 минут байлгана.Угаах алхамыг дахин давтана уу.

9.2.8Өнгө: 50мкл А уусмал нэмнэ(иж бүрдэл өгсөн) ба 50мкл уусмал В(иж бүрдэл өгсөн) худаг бүрт.Зөөлөн хольж, таглаад 37 хэмд 15 минут байлгана.

9.2.9Хэмжих: 50мкл зогсоох уусмал нэмнэ(иж бүрдэл өгсөн) худаг бүрт.Зөөлөн хольж, шингээлтийг 450 нм-д хэмжинэ (Энэ нь 450/630 нм хос долгионы урттай хэмжилтийг санал болгож байна. Зогсоох уусмал нэмсний дараа 5 минутын дотор үр дүнг уншина уу).

10. Үр дүн

10.1 Шингээлтийн хувь

Стандарт болон дээжийн хувьд олж авсан шингээлтийн утгын дундаж утгыг эхний стандартын шингээлтийн утгад (тэг стандарт) хувааж, 100% -иар үржүүлнэ.Тиймээс тэг стандартыг 100% -тай тэнцүү болгож, шингээлтийн утгыг хувиар илэрхийлнэ.

B

Шингээлт (%) = —— ×100%

B0

B ——шингээлтийн стандарт (эсвэл дээж)

B0 ——шингээлтийн 0 стандарт

10.2 Стандарт муруй

----Стандарт муруй зурахдаа: Стандартуудын шингээлтийн утгыг y тэнхлэгээр, тилозин стандартын уусмалын концентрацийн хагас логарифм (ppb) -ийг х тэнхлэгээр авна.

---- Шалгалт тохируулгын муруйгаас уншиж болох дээж бүрийн тилозины концентрацийг (ppb) дагаж мөрдөж буй дээж бүрийн шингэрүүлэлтийн харгалзах хүчин зүйлээр үржүүлж, дээжийн бодит концентрацийг гаргана.

Анхаарна уу:

Мэдээлэлд дүн шинжилгээ хийх тусгай программ хангамжийг боловсруулсан бөгөөд хүсэлтийн дагуу өгөх боломжтой.

11. Мэдрэмж, нарийвчлал, нарийвчлал

Туршилтын мэдрэмж:1.5ppb

Илрүүлэх хязгаар:

Амьтны эд …………………………………………1.5ppb Сүү………………………………………………..15ppb Нарийвчлал:

Амьтны эд………………………………………80±15%

Сүү…………………………………………………………80±10%

Нарийвчлал:

ELISA багцын өөрчлөлтийн коэффициент 10% -иас бага байна.

12. Анхааруулга

12.1 Урвалж болон дээжийг тасалгааны температурт (20-25℃) тохируулаагүй тохиолдолд стандарт болон дээжийн шингээлтийн дундаж утгыг бууруулна.

12.2 Амжилтгүй давтагдахаас зайлсхийхийн тулд бичил цооногийг үе шат хооронд хатаахыг бүү зөвшөөр, бичил цооногийн тавиурыг тогшсоны дараа шууд дараагийн алхамыг хийнэ.

12.3 Хэрэглэхийн өмнө урвалж бүрийг зөөлөн сэгсэрнэ.

12.4 Арьсаа зогсоох уусмалаас хол байлга, учир нь 0.5MH2SO4шийдэл.

12.5 Хугацаа нь дууссан иж бүрдлийг бүү ашигла.Янз бүрийн багцын урвалжуудыг сольж болохгүй, эс тэгвээс энэ нь мэдрэмжийг бууруулна.

12.6 ELISA-ийн иж бүрдлийг 2-8℃ хэмд байлгана, хөлдөж болохгүй.Бичил цооногийн хавтангуудыг битүүмжилж, бүх инкубацийн үед нарны шууд тусгалаас зайлсхий.Микротитрийн хавтанг таглахыг зөвлөж байна.

12.7. Субстратын уусмал өнгө болж хувирвал түүнийг орхих хэрэгтэй.Хэрэв тэг стандартын шингээлтийн утга (450/630 нм) 0,5 (A450 нм<0,5) -аас бага байвал урвалжууд муу болж магадгүй.

12.8 А уусмал, В уусмал нэмсэнээс хойш 15 минутын дараа будах урвал явагдана. Хэрэв өнгө нь хэтэрхий цайвар байвал та инкубацийн хугацааг 20 минут ба түүнээс дээш хугацаагаар сунгаж болно.Хэзээ ч 30 минутаас хэтрэхгүй, харин эсрэгээр инкубацийн хугацааг зөв богиносго.

12.9 Урвалын оновчтой температур нь 37℃ байна.Өндөр эсвэл бага температур нь мэдрэмж, шингээлтийн утгыг өөрчлөхөд хүргэдэг.

13. Хадгалалт

Хадгалах нөхцөл: 2-8℃.

Хадгалах хугацаа: 12 сар.

 


  • Өмнөх:
  • Дараачийн:

  • Энд мессежээ бичээд бидэнд илгээгээрэй