продукт

1. Баштапкы

Тилозиннегизинен антибактериалдык жана анти-микоплазма катары колдонулат макролиддик антибиотик болуп саналат.Бул дары кээ бир топтордо олуттуу терс таасирин алып келиши мүмкүн, анткени катуу MRLs түзүлгөн.

Бул комплект ELISA технологиясына негизделген жаңы продукт болуп саналат, ал жалпы инструменталдык анализге салыштырмалуу тез, оңой, так жана сезимтал жана бир операцияда 1,5 саатты гана талап кылат, ал операция катасын жана жумуштун интенсивдүүлүгүн кыйла азайтат.

2. Сыноо принциби

Бул комплект кыйыр атаандаштык ELISA технологиясына негизделген.Микротитр скважиналары бириктирүүчү антиген менен капталган.Үлгүдөгү тилозин калдыктары антитело үчүн микротитр пластинкасында капталган антиген менен атаандашат.Антитело менен белгиленген энзим кошулгандан кийин, түстү көрсөтүү үчүн TMB субстраты колдонулат.Үлгүнүн абсорбциясы андагы тилозинге терс байланыштуу, суюлтуу коэффициентине көбөйтүлгөн Стандарттык ийри сызык менен салыштыргандан кийин үлгүдөгү тилозин калдыктарынын санын эсептөөгө болот.

3. Тиркемелер

Бул комплект жаныбарлардын тканындагы тилозин калдыктарын сандык жана сапаттык талдоодо (тоок, чочконун эти, өрдөк) жана сүт, бал, жумуртка ж.б.

4. Кайчылаш реакциялар

Тилозин…………………………………………..100%

Тилмикозин…………………………………………<2%

5. Керектүү материалдар

5.1 Жабдуулар:

---- Микротитр плитасы спектрофотометри (450нм/630нм)

---- Айлануучу бууланткыч же азот кургатуучу приборлор

----гомогенизатор

----Шакер

---- Центрифуга

---- Аналитикалык баланс (индуктивдүүлүк: 0,01г)

---- Бүтүрүлгөн пипетка: 10мл

---- Резина пипетка лампочкасы

---- Колба: 10мл

---- Полистиролдук центрифуга түтүктөр: 50мл

---- Микропипеттер: 20-200мл, 100-1000мл

250 мл - мультипипетка

5.2 Реагенттер:

----Натрий гидроксиди (NaOH, AR)

----Натрий бикарбонаты (NaHCO_3,AR)

---- Натрий карбонаты (NaCO₃, AR)

----Трихлорассус кислотасы (AR)

---- Ацетонитрил (AR)

----Этилацетат (AR)

┅┅n-гексан (AR)

---- Деионизацияланган суу

6. Комплекттин компоненттери

l Антиген менен капталган 96 скважинасы бар микротитр плитасы

л Стандарттык эритмелер (5 бөтөлкө, 1 мл / бөтөлкө)

0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb

l Spiking стандарттык башкаруу: (1мл / бөтөлкө)1ppm

л Фермент конъюгаты 1мл…………………….…кызыл капкак

l Антитело эритмеси 7мл……………………жашыл капкак

l Эритме А 7мл…………………….….……ак капкак

l Б эритмеси 7мл……………………………..кызыл капкак

l Токтотуу эритмеси 7мл.……………….……….сары калпак

л 20 × концентрацияланган жуугуч эритмеси 40 мл

…………………………………………………..тунук капкак

л 4 × концентрацияланган экстракция эритмеси 50мл

……………………………………………….көк калпак

7. Реагенттерди даярдоо:

Чечим 1:0,1моль/л NaOH эритмеси

100 мл деионизацияланган сууга 0,4 г NaOH өлчөп, толугу менен аралаштырыңыз.

Чечим 2: 1моль/л NaOH эритмеси

100 мл деионизацияланган сууга 4 г NaOH өлчөп, толугу менен аралаштырыңыз.

Чечим 3: Карбонат буфер тузу

Чечим1: 0.2M PB

51,6 г Na эрийт₂HPO₄·12H₂O, 8,7 г NaH₂PO₄·2H₂О деионизацияланган суу менен 1000мл чейин суюлтуңуз.

Чечим2: Экстракция чечими

2 × концентрацияланган экстракция эритмени 1:1 көлөмдүк катышта деионизацияланган суу менен суюлтуңуз (мис. 10мл 2хэкстракция эритмеси + 10мл деионизацияланган суу), үлгү алуу үчүн колдонула турган,бул эритмени 4℃ температурада 1 ай сактоого болот.

Чечим3: Жуу эритмеси

20 × концентрацияланган жуу эритмени 1:19 көлөмдүк катышта деионизацияланган суу менен суюлтуңуз (мис. 5мл 20×жуу эритмеси + 95мл деионизацияланган суу), плиталарды жуу үчүн колдонулат.Бул эритмени 4℃ температурада 1 ай сактоого болот.

8. Даярдоо үлгүлөрү

8.1 Иштөө алдында эскертүүлөр жана сактык чаралары:

(a) Сураныч, эксперимент процессинде бир жолку кеңештерди колдонуңуз жана башка реагентти сиңиргенде учтарды өзгөртүңүз.

(б) Бардык аспаптар таза экенин текшериңиз.

(c) ткань үлгүсүн муздаткычта сактаңыз.

(г) Даяр болгон үлгү дароо анализ үчүн колдонулушу керек.

8.2 Жаныбарлардын кыртышы (тоок, чочконун эти ж.б.)

---- үлгүнү гомогенизатор менен гомогендөө;

---- 2,0±0,05г гомогенатты 50мл полистирол центрифугасынын түтүкчөсүнө алыңыз;2мл 0,2M PB кошуңуз (чечим1) , эригиче чайкап, анан 8мл этилацетатты кошуп, 3 мүнөт катуу чайкагыла;

---- Бөлүү үчүн центрифуга: 3000г / айлана-чөйрөнүн температурасы / 5мин.

---- 4 мл органикалык фазаны 10 мл айнек түтүккө өткөрүп, азот газынын агымы астында 50-60 ℃ суу ваннасы менен кургатуу;

---- Кургак калдыкты 1мл н-гексан менен эритип, эритүү үчүн 30 секунда куюп, андан кийин 1мл экстракция эритменин (чечим2), 1 мүн.бөлүү үчүн центрифуга: 3000г / айлана-чөйрөнүн температурасы / 5мин

---- Супернатантты n-гексан фазасын алып салуу;анализ үчүн субстрат суулуу фазасынан 50μl алыңыз.

Суюлтуу фактору: 1

8.2 Сүт

---- 100мкл чийки сүт үлгүсүн алып, 900мкл экстракция эритмеси менен аралаштырыңыз (чечим2) жана толугу менен аралаштыруу.

---- Талдоо үчүн даярдалган эритмеден 50мкл алыңыз.

Суюлтуу фактору: 10

9. Анализ процесси

9.1 Талдоодон мурун эскертүү

9.1.1Бардык реагенттер жана микроуюктар бөлмө температурасында (20-25℃) экенин текшериңиз.

9.1.2Бардык калган реагенттерди 2-8ге кайтарыңыз℃колдонулгандан кийин дароо.

9.1.3Микрокудуктарды туура жуу - анализдөө процессиндеги маанилүү кадам;бул ELISA анализинин кайталанышы үчүн маанилүү фактор болуп саналат.

9.1.4 Ажарыкты өчүрүп, инкубациялоо учурунда микроуюктарды жаап коюңуз.

9.2 Талдоо кадамдары

9.2.1 Бардык реагенттерди бөлмө температурасында (20-25 ℃) 30 мүнөттөн ашык убакытка чыгарыңыз, колдонуудан мурун акырын чайкаңыз.

9.2.2 Керектүү микро кудуктарды алып чыгып, калганын дароо 2-8℃ температурада сыдырма баштыкка салып коюңуз.

9.2.3 Суюлтулган жуугуч эритмени колдонуудан мурун бөлмө температурасында кайра жылытуу керек.

9.2.4Номер:Ар бир микрокудуктун позициялары номерленген жана бардык стандарттар жана үлгүлөр эки нускада иштетилиши керек.Стандарттарды жана үлгүлөрдү позицияларды жазыңыз.

9.2.5Add стандарттуу эритме/үлгү жана антитело эритмеси: 50мл стандарттуу эритмени кошуңуз((комплект берилген)) же даярдалган үлгү тиешелүү скважиналарга.50мл антитело эритмесин кошуңуз(комплект берилген).Пластинканы кол менен чайкап, акырын аралаштырыңыз жана капкагы менен 37℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз.

9.2.6Жуу: Капкакты акырын алып салыңыз жана скважиналардагы суюктукту тазалаңыз жана микро тешиктерди 250 мкл суюлтулган жуу эритмеси менен чайкаңыз (чечим3) 10 секунд аралыкта 4-5 жолу.Калган сууну соргуч кагаз менен сиңирип алыңыз (калган аба көбүкчөсүн пайдаланылбаган учу менен жок кылууга болот).

9.2.7энзим конъюгаты кошуу: 100 мл энзим конъюгат эритмесин кошуңуз(комплект берилген) ар бир кудукка акырын аралаштырып, капкагын жаап 37℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз.Жуу кадамын дагы бир жолу кайталаңыз.

9.2.8Түстүү: 50мл А эритмесин кошуңуз(комплект берилген) жана 50мл эритме B(комплект берилген) ар бир кудукка.Акырын аралаштырып, капкагын жаап, 37℃ температурада 15 мүнөткө инкубациялаңыз.

9.2.9өлчөө: 50мл токтотуу эритмесин кошуңуз(комплект берилген) ар бир кудукка.Акырын аралаштырып, 450нмде абсорбенцияны өлчөңүз (Бул 450/630нм кош толкун узундугу менен сунушталган өлчөө. Токтотуу эритмесин кошкондон кийин 5 мүнөттүн ичинде жыйынтыкты окуңуз).

10. Жыйынтыктар

10,1 пайыздык абсорбент

Стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбциялык маанилердин орточо маанилери биринчи эталондун абсорбциялык маанисине (нөлдүк стандарт) бөлүнөт жана 100% көбөйтүлөт.Ошентип, нөлдүк стандарт 100% га барабар түзүлөт жана абсорбенттик маанилер пайыздар менен келтирилет.

B

Абсорбция (%) = —— ×100%

B0

B —— абсорбция стандарты (же үлгү)

В0 ——абсорбциянын нөл стандарты

10.2 Стандарттык ийри сызык

----Стандарт ийри сызыгын тартуу үчүн: эталондордун абсорбциялык маанисин y огу катары, тилозин эталондор эритмесинин концентрациясынын жарым логарифмдик (ppb) x огу катары алыңыз.

---- Калибрлөө ийри сызыгынан окууга мүмкүн болгон ар бир үлгүдөгү тилозин концентрациясы (ppb) ар бир кийинки үлгүдөгү суюлтуу коэффициентине көбөйтүлөт жана үлгүнүн иш жүзүндөгү концентрациясы алынат.

Суранам көңүл буруңуз:

маалыматтарды талдоо үчүн атайын программалык камсыздоо иштелип чыккан, ал суроо боюнча берилиши мүмкүн.

11. Сезимталдуулук, тактык жана тактык

Сыноо сезгичтиги:1.5ppb

Аныктоо чеги:

Жаныбарлардын ткандары………………………………………1,5 ppb Сүт………………………………………………..15ppb Тактыгы:

Жаныбарлардын ткандары……………………………………80±15%

Сүт…………………………………………………………80±10%

Тактык:

ELISA комплектинин вариация коэффициенти 10% дан аз.

12. Эскертүү

12.1 Эгерде реагенттер жана үлгүлөр бөлмө температурасына (20-25 ℃) чейин жөнгө салынбаса, стандарттар жана үлгүлөр үчүн алынган абсорбенттин орточо маанилери төмөндөйт.

12.2 Ийгиликсиз кайталанууга жол бербөө үчүн микро уячалардын кадамдардын ортосунда кургап кетишине жол бербеңиз жана микро кудук кармагычты таптагандан кийин дароо кийинки кадамды иштетиңиз.

12.3 Колдонуунун алдында ар бир реагентти акырын чайкаңыз.

12.4 Териңизди токтотуучу эритмеден алыс кармаңыз, анткени ал 0,5 MH₂SO₄чечим.

12.5 Эскирген комплекттерди колдонбоңуз.Ар кандай партиялардагы реагенттерди алмаштырбаңыз, антпесе ал сезгичтикти төмөндөтөт.

12.6 ELISA комплекттерин 2-8℃ температурада сактаңыз, тоңдурбаңыз.Чакан түтүкчөлөрдү мөөр менен бекитиңиз, бардык инкубация учурунда күн нурунан сактаныңыз.Микротитрлик плиталарды жабуу сунушталат.

12.7 Субстрат эритмеси түстүү болуп калса, аны таштап салуу керек.Эгерде нөлдүк стандарттын абсорбциялык мааниси (450/630нм) 0,5тен (A450nm<0,5) аз болсо, реагенттер начар болушу мүмкүн.

12.8 А эритмеси жана В эритмеси кошулгандан кийин түстүү реакцияга 15 мүнөт керектелет. Эгерде түс өтө ачык болсо, аны аныктоо үчүн инкубация убактысын 20 мүнөткө же андан көпкө узарта аласыз.Эч качан 30 мүнөттөн ашпаңыз, тескерисинче, инкубация убактысын туура кыскартыңыз.

12.9 Оптималдуу реакция температурасы 37℃.Жогорку же төмөн температура сезгичтиктин жана абсорбенттик маанилердин өзгөрүшүнө алып келет.

13. Сактоо

Сактоо шарты: 2-8℃.

Сактоо мөөнөтү: 12 ай.