מוצר

ערכה תחרותית לבדיקת אנזים אימונו לניתוח כמותי של טילוסין

תיאור קצר:

טילוסין היא אנטיביוטיקה מקרולידית, המיושמת בעיקר כאנטיבקטריאלי ואנטי-מיקופלזמה.נקבעו רמות MRL מחמירות מכיוון שתרופה זו עלולה להוביל לתופעות לוואי חמורות בקבוצות מסוימות.

ערכה זו היא מוצר חדש המבוסס על טכנולוגיית ELISA, שהיא מהירה, קלה, מדויקת ורגישה בהשוואה לניתוח אינסטרומנטלי נפוץ וצריכה רק 1.5 שעות בפעולה אחת, היא יכולה למזער במידה ניכרת את שגיאות הפעולה ואת עוצמת העבודה.


פירוט המוצר

תגיות מוצר

ערכת בדיקת אנזים אימונו תחרותית עבור

ניתוח כמותי שלטילוסין


1. רקע

טילוסיןהיא אנטיביוטיקה מקרולידית, המיושמת בעיקר כאנטיבקטריאלי ואנטי-מיקופלזמה.נקבעו רמות MRL מחמירות מכיוון שתרופה זו עלולה להוביל לתופעות לוואי חמורות בקבוצות מסוימות.

ערכה זו היא מוצר חדש המבוסס על טכנולוגיית ELISA, שהיא מהירה, קלה, מדויקת ורגישה בהשוואה לניתוח אינסטרומנטלי נפוץ וצריכה רק 1.5 שעות בפעולה אחת, היא יכולה למזער במידה ניכרת את שגיאות הפעולה ואת עוצמת העבודה.

2. עקרון הבדיקה

ערכה זו מבוססת על טכנולוגיית ELISA תחרותית עקיפה.בארות המיקרוטיטר מצופות באנטיגן צימוד.שאריות טילוזין בדגימה מתחרות עם האנטיגן המצופה בצלחת המיקרוטיטר על הנוגדן.לאחר הוספה של אנטי-נוגדן המסומן באנזים, נעשה שימוש במצע TMB כדי להראות את הצבע.ספיגת הדגימה קשורה לרעה לטיוזין השוכן בה, לאחר השוואה עם עקומת הסטנדרט, כפול מקדם הדילול, ניתן לחשב את כמות שאריות הטילוזין בדגימה.

3. יישומים

ערכה זו יכולה לשמש בניתוח כמותי ואיכותי של שאריות טילוזין ברקמות בעלי חיים (עוף, חזיר, ברווז) וחלב, דבש, ביצה וכו'.

4. תגובות צולבות

טיילוזין………………………………………………………..100%

טילמיקוזין………………………………………………………………<2%

5. חומרים נדרשים

5.1 ציוד:

---- ספקטרופוטומטר לוחות מיקרוטיטר (450nm/630nm)

---- מכשירי אידוי סיבוביים או ייבוש חנקן

---- הומגניזר

---- שייקר

----סַרכֶּזֶת

---- איזון אנליטי (השראות: 0.01 גרם)

---- פיפטה מדורגת: 10 מ"ל

---- נורת פיפטה גומי

---- בקבוק נפח: 10 מ"ל

----שפופרות צנטריפוגה פוליסטירן: 50 מ"ל

---- מיקרופיפטות: 20-200 מ"ל, 100-1000 מ"ל

250 מ"ל-מולטיפיפטה

5.2 ריאגנטים:

----נתרן הידרוקסיד (NaOH, AR)

---- נתרן ביקרבונט (NaHCO3,AR)

---- נתרן קרבונט (NaCO3, AR)

---- חומצה טריכלורואצטית (AR)

---- אצטוניטריל (AR)

---- אתיל אצטט (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

----מים מזוקקים

6. רכיבי ערכה

l צלחת מיקרוטיטר עם 96 בארות מצופה באנטיגן

l פתרונות סטנדרטיים (5 בקבוקים, 1 מ"ל/בקבוק)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l שליטה סטנדרטית: (1 מ"ל/בקבוק)1 עמודים לדקה

l מצומד אנזים 1 מ"ל…………………..…..…כובע אדום

l תמיסת נוגדנים 7 מ"ל……………….……מכסה ירוק

l תמיסה A 7ml………………………….….……כובע לבן

l תמיסה B 7 מ"ל...………………………………………..כובע אדום

l תמיסת עצור 7ml.……………….……….כובע צהוב

l תמיסת כביסה מרוכזת 20×40 מ"ל

…………………………………..…כובע שקוף

l תמיסת מיצוי מרוכזת 4×50 מ"ל

……………………………………………….כובע כחול

7. הכנת ריאגנטים:

פתרון 1:תמיסה של 0.1מול/L NaOH

שקלו 0.4 גרם NaOH ל-100 מ"ל מים מפושטים וערבבו לחלוטין.

פתרון 2: תמיסה של 1מול/L NaOH

שקלו 4 גרם NaOH ל-100 מ"ל מים מפושטים וערבבו לחלוטין.

פתרון 3: מלח חוצץ קרבונט

פִּתָרוֹן1: 0.2M PB

ממיסים 51.6 גרם של Na2HPO4·12H2O, 8.7 גרם של NaH2PO4·2H2O עם מים מפושטים ולדלל ל-1000 מ"ל.

פִּתָרוֹן2: פתרון מיצוי

יש לדלל את תמיסת המיצוי המרוכזת 2× במים מפושטים ביחס נפח של 1:1(למשל 10 מ"ל של תמיסת מיצוי 2× + 10 מ"ל מים מפושטים), אשר ישמש לחילוץ דגימות,ניתן לאחסן פתרון זה בטמפרטורה של 4℃ למשך חודש אחד.

פִּתָרוֹן3: תמיסת כביסה

יש לדלל את תמיסת הכביסה המרוכזת של 20× במים מפושטים ביחס נפח של 1:19(למשל 5 מ"ל של תמיסת כביסה 20× + 95 מ"ל מים מפושטים), אשר ישמש לשטיפת הצלחות.ניתן לאחסן תמיסה זו בטמפרטורה של 4℃ למשך חודש אחד.

8. הכנות לדוגמא

8.1 הודעה ואמצעי זהירות לפני ההפעלה:

(א) אנא השתמש בעצות חד פעמיות בתהליך הניסוי, ושנה את העצות כאשר סופגים ריאגנט אחר.

(ב) ודא שכל המכשירים נקיים.

(ג) שמור את דגימת הרקמה בהקפאה.

(ד) יש להשתמש בדגימה מוכנה לבדיקה בבת אחת.

8.2 רקמת בעלי חיים (עוף, חזיר וכו')

---- הומוגניזציה של המדגם עם homogenizer;

---- קח 2.0 ± 0.05 גרם של homogenate לתוך צינור צנטריפוגה פוליסטירן 50 מ"ל;הוסף 2 מ"ל של 0.2M PB (פִּתָרוֹן1), נער להמסה, ולאחר מכן הוסף 8 מ"ל אתיל אצטט ונער בחוזקה למשך 3 דקות;

---- צנטריפוגה להפרדה: 3000 גרם / טמפרטורת סביבה / 5 דקות.

----העבר 4 מ"ל מהפאזה האורגנית העליונה לתוך צינור זכוכית של 10 מ"ל, יבש באמבט מים של 50-60 ℃ תחת זרם גז חנקן;

---- ממיסים את השאריות היבשות עם 1 מ"ל של n-הקסאן, מערבלים במשך 30 שניות להמסה, ואז מוסיפים 1 מ"ל של תמיסת מיצוי (פִּתָרוֹן2), מערבלים במשך דקה אחת.צנטריפוגה להפרדה: 3000 גרם / טמפרטורת סביבה / 5 דקות

---- הסר את שלב ה-n-hexane supernatant;קח 50μl מהשלב המימי של המצע לבדיקה.

 

מקדם דילול: 1

 

8.2 חלב

---- קח 100μl של דגימת חלב גולמי, ערבב עם 900μl של תמיסת מיצוי (פִּתָרוֹן2), ומערבבים לחלוטין.

---- קח 50μl מהתמיסה המוכנה לבדיקה.

 

מקדם דילול: 10

 

9. תהליך בדיקה

9.1 הודעה לפני הבדיקה

9.1.1ודא שכל הריאגנטים והמיקרובארות נמצאים כולם בטמפרטורת החדר (20-25℃).

9.1.2החזר את כל שאר הריאגנטים ל-2-8מיד לאחר השימוש.

9.1.3שטיפה נכונה של המיקרובארות היא שלב חשוב בתהליך הבדיקה;זהו הגורם החיוני לשחזור של ניתוח ELISA.

9.1.4 אלבטל את האור ולכסות את בארות המיקרו במהלך הדגירה.

9.2 שלבי בדיקה

9.2.1 הוצא את כל הריאגנטים בטמפרטורת החדר (20-25℃) למשך יותר מ-30 דקות, נער בעדינות לפני השימוש.

9.2.2 הוציאו את המיקרובארות הדרושים והחזרו את השאר לתוך שקית הנעילה בטמפרטורה של 2-8℃ מיד.

9.2.3 יש לחמם מחדש את תמיסת הכביסה המדוללת כך שתהיה בטמפרטורת החדר לפני השימוש.

9.2.4מספר:ממוספרים כל עמדות microwell וכל התקנים והדגימות צריכים להיות מופעלים בעותק.רשום את התקנים ואת עמדות הדוגמאות.

9.2.5Add תמיסה/דגימה סטנדרטית ותמיסת נוגדנים: הוסף 50µl של תמיסה סטנדרטית ((ערכה מסופקת)) או דגימה מוכנה לבארות מתאימות.הוסף 50µl של תמיסת נוגדנים (ערכה מסופקת).מערבבים בעדינות על ידי ניעור הצלחת ידנית ודגירה למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37℃ עם מכסה.

9.2.6לִשְׁטוֹף: הסר את הכיסוי בעדינות וטהר את הנוזל מהבארות ושטוף את המיקרובארות עם תמיסת כביסה מדוללת 250 µl (פִּתָרוֹן3) במרווח של 10 שניות במשך 4-5 פעמים.ספג את שאריות המים בנייר סופג (ניתן לסלק את בועת האוויר הנותרת עם קצה לא בשימוש).

9.2.7הוסף צמוד אנזים: הוסף 100 מ"ל של תמיסה מצומדת אנזים (ערכה מסופקת) לכל באר, ערבבו בעדינות ודגרו במשך 30 דקות בטמפרטורה של 37℃ עם מכסה.חזור על שלב הכביסה שוב.

9.2.8צביעה: הוסף 50µl של תמיסה A(ערכה מסופקת) ו-50µl של תמיסה B(ערכה מסופקת) לכל באר.מערבבים בעדינות ודגירה למשך 15 דקות בטמפרטורה של 37℃ עם מכסה.

9.2.9מידה: הוסף 50µl מתמיסת העצירה (ערכה מסופקת) לכל באר.מערבבים בעדינות ומודדים את הספיגה ב-450 ננומטר (מוצע למדוד עם אורך גל כפול של 450/630 ננומטר. קרא את התוצאה תוך 5 דקות לאחר הוספת תמיסת עצירה).

10. תוצאות

10.1 אחוזי ספיגה

הערכים הממוצעים של ערכי הספיגה המתקבלים עבור התקנים והדגימות מחולקים בערך הספיגה של התקן הראשון (תקן אפס) ומוכפלים ב-100%.לפיכך, תקן האפס שווה ל-100% וערכי הספיגה מצוינים באחוזים.

B

ספיגה (%) = —— ×100%

B0

B - תקן ספיגה (או מדגם)

B0 ——תקן ספיגה אפס

10.2 עקומה סטנדרטית

----לצייר עקומת תקן: קח את ערך הספיגה של תקנים כציר y, חצי לוגריתמי של ריכוז תמיסת תקני הטילוזין (ppb) כציר x.

---- ריכוז הטילוזין של כל דגימה (ppb), שניתן לקרוא מעקומת הכיול, מוכפל בגורם הדילול המתאים של כל דגימה שאחריה, ומתקבל ריכוז הדגימה בפועל.

שימו לב:

תוכנה מיוחדת פותחה לניתוח נתונים, שניתן לספק על פי בקשה.

11. רגישות, דיוק ודיוק

רגישות למבחן:1.5ppb

מגבלת זיהוי:

רקמת בעלי חיים……………………………….…………………1.5ppb חלב…………………………………………………………………..15ppb דיוק:

רקמת בעלי חיים………………………………………………………80±15%

חלב…………………………………………..……….……80±10%

דיוק:

מקדם השינוי של ערכת ELISA הוא פחות מ-10%.

12. שימו לב

12.1 הערכים הממוצעים של ערכי הספיגה שהתקבלו עבור התקנים והדגימות יופחתו אם הריאגנטים והדגימות לא הווסתו לטמפרטורת החדר (20-25℃).

12.2 אל תאפשר למיקרו-בארות להתייבש בין השלבים כדי למנוע שחזור לא מוצלח והפעל את השלב הבא מיד לאחר הקשה על מחזיק המיקרו-בארות.

12.3 לנער כל מגיב בעדינות לפני השימוש.

12.4 הרחק את העור מתמיסת העצירה שכן הוא 0.5MH2SO4פִּתָרוֹן.

12.5 אל תשתמש בערכות לא מעודכנות.אל תחליף ריאגנטים של אצוות שונות, אחרת זה יפיל את הרגישות.

12.6 שמור את ערכות ה-ELISA בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס, אין להקפיא.אטום צלחות microwell מנוחה, הימנע מאור שמש ישר במהלך כל הדגירות.מומלץ לכסות את לוחות המיקרוטיטר.

12.7 יש לנטוש תמיסת מצע אם הוא הופך לצבעים.הריאגנטים עלולים להיות גרועים אם ערך הספיגה (450/630nm) של תקן האפס הוא פחות מ-0.5 (A450nm<0.5).

12.8 תגובת הצביעה צריכה 15 דקות לאחר הוספת תמיסה A ותמיסה B. ואתה יכול להאריך את טווחי זמן הדגירה ל-20 דקות או יותר אם הצבע בהיר מדי כדי לקבוע.לעולם אל תעלה על 30 דקות, להיפך, קצר את זמן הדגירה כראוי.

12.9 טמפרטורת התגובה האופטימלית היא 37℃.טמפרטורה גבוהה או נמוכה יותר תוביל לשינויים של ערכי הרגישות והספיגה.

13. אחסון

מצב אחסון: 2-8 ℃.

תקופת אחסון: 12 חודשים.

 


  • קודם:
  • הַבָּא:

  • כתבו כאן את הודעתכם ושלחו אותה אלינו