mahsulot

1. Fon

Tylosinmakrolid antibiotik bo'lib, u asosan antibakterial va antimikoplazma sifatida qo'llaniladi.Ushbu dori muayyan guruhlarda jiddiy yon ta'sirga olib kelishi mumkinligi sababli qat'iy MRLlar o'rnatildi.

Ushbu to'plam ELISA texnologiyasiga asoslangan yangi mahsulot bo'lib, u umumiy instrumental tahlil bilan solishtirganda tez, oson, aniq va sezgir bo'lib, bir operatsiyada atigi 1,5 soatni talab qiladi, u operatsiya xatosini va ish intensivligini sezilarli darajada kamaytirishi mumkin.

2. Sinov printsipi

Ushbu to'plam bilvosita raqobatdosh ELISA texnologiyasiga asoslangan.Mikrotitr quduqlari biriktiruvchi antijen bilan qoplangan.Namunadagi tilozin qoldig'i antikor uchun mikrotitr plastinkasida qoplangan antigen bilan raqobatlashadi.Anti-antikor etiketli ferment qo'shilgandan so'ng, rangni ko'rsatish uchun TMB substrati ishlatiladi.Namuna yutilishi undagi tilozin moddasi bilan salbiy bog'liq, standart egri chiziq bilan solishtirgandan so'ng, suyultirish koeffitsientiga ko'paytirilgandan so'ng, namunadagi tilozin qoldiq miqdorini hisoblash mumkin.

3. Ilovalar

Ushbu to'plam hayvon to'qimalarida (tovuq, cho'chqa go'shti, o'rdak) va sut, asal, tuxum va boshqalardagi tilozin qoldiqlarini miqdoriy va sifat jihatidan tahlil qilishda qo'llanilishi mumkin.

4. O‘zaro reaksiyalar

Tylosin……………………………………………..100%

Tilmikozin……………………………………………<2%

5. Kerakli materiallar

5.1 Uskunalar:

---- Mikrotitr plastinka spektrofotometri (450nm/630nm)

---- Aylanadigan bug'lantiruvchi yoki azotli quritish asboblari

----gomogenizator

---- Shaker

---- Santrifuga

---- Analitik muvozanat (induktivlik: 0,01 g)

---- Pipetka: 10ml

---- Rezina pipetkali lampochka

----Hajmli kolba: 10ml

---- Polistirolli sentrifuga naychalari: 50ml

----Mikropipetlar: 20-200ml, 100-1000ml

250 ml - multipipet

5.2 Reaktivlar:

----Natriy gidroksid (NaOH, AR)

---- Natriy bikarbonat (NaHCO_3,AR)

---- Natriy karbonat (NaCO₃, AR)

---- Trikloroatsetik kislota (AR)

---- Asetonitril (AR)

---- Etil asetat (AR)

┅┅n-Geksan (AR)

---- Deionlashtirilgan suv

6. To'plam komponentlari

l Antigen bilan qoplangan 96 ta quduqli mikrotitr plitasi

l Standart eritmalar (5 shisha, 1 ml / shisha)

0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb

l Spiking standart nazorati: (1 ml / shisha)1ppm

l Ferment konjugati 1ml……………………………qizil qopqoq

l Antikor eritmasi 7ml……………….……yashil qopqoq

l A eritmasi 7ml………………….….………oq qopqoq

l B eritmasi 7ml……………………………..qizil qopqoq

l Stop eritmasi 7ml.……………….……….sariq qopqoq

l 20 × konsentrlangan yuvish eritmasi 40 ml

……………………………………………..…shaffof qalpoq

l 4 × konsentrlangan ekstraksiya eritmasi 50 ml

………………………………………………….koʻk qalpoq

7. Reaktivlarni tayyorlash:

Yechim 1:0,1mol/l NaOH eritmasi

0,4 g NaOH ni 100 ml deionlangan suvga torting va to'liq aralashtiring.

Yechim 2: 1mol/L NaOH eritmasi

4 g NaOH ni 100 ml deionlangan suvga torting va to'liq aralashtiring.

Yechim 3: Karbonat tampon tuzi

Yechim1: 0,2M PB

51,6 g Na ni eritib yuboring₂HPO₄· 12 soat₂O, 8,7 g NaH₂PO₄· 2H₂O deionizatsiyalangan suv bilan va 1000 ml gacha suyultiriladi.

Yechim2: Ekstraktsiya eritmasi

2x konsentrlangan ekstraksiya eritmasini 1:1 hajm nisbatida deionlangan suv bilan suyultiring (masalan, 10 ml 2 × ekstraksiya eritmasi + 10 ml deionlangan suv), namuna olish uchun foydalaniladigan,bu eritma 4℃ haroratda 1 oy davomida saqlanishi mumkin.

Yechim3: yuvish eritmasi

20 × konsentrlangan yuvish eritmasini 1:19 hajm nisbatida deionlangan suv bilan suyultiring.masalan, 5 ml 20 × yuvish eritmasi + 95 ml deionlangan suv), bu plitalarni yuvish uchun ishlatiladi.Ushbu eritma 4 ℃ haroratda 1 oy davomida saqlanishi mumkin.

8. Namuna tayyorlash

8.1 Ishlashdan oldin ogohlantirish va ehtiyot choralari:

(a) Iltimos, tajriba jarayonida bir martalik maslahatlardan foydalaning va turli reagentlarni qabul qilganda maslahatlarni o'zgartiring.

(b) Barcha asboblar toza ekanligiga ishonch hosil qiling.

(c) To'qima namunasini muzlatib qo'ying.

(d) Tayyorlangan namuna darhol tahlil uchun ishlatilishi kerak.

8.2 Hayvon to'qimalari (tovuq, cho'chqa go'shti va boshqalar)

----namunani gomogenizator bilan homogenlash;

---- 2,0±0,05g gomogenatdan 50ml polistirolli sentrifugali trubkaga oling;2 ml 0,2 M PB qo'shing (yechim1) , eritish uchun silkiting va keyin 8 ml etil asetat qo'shing va 3 daqiqa davomida qattiq silkiting;

---- Ajratish uchun santrifuga: 3000g / atrof-muhit harorati / 5min.

---- Supernatantning 4 ml organik fazasini 10 ml shisha naychaga o'tkazing, azot gaz oqimi ostida 50-60 ℃ suv hammomida quriting;

---- Quruq qoldiqni 1 ml n-geksan bilan eritib oling, eritish uchun 30 soniya davomida aylantiring va keyin 1 ml ekstraksiya eritmasi qo'shing (yechim2), 1 daqiqa davomida aylanib o'ting.ajratish uchun sentrifuga: 3000g / atrof-muhit harorati / 5min

---- Supernatant n-geksan fazasini olib tashlang;tahlil qilish uchun substratning suvli fazasidan 50 mkl oling.

Suyultirish omili: 1

8.2 Sut

---- 100 mkl xom sut namunasini oling, 900 mkl ekstraksiya eritmasi bilan aralashtiring (yechim2) va to'liq aralashtiramiz.

----Tahlil uchun tayyorlangan eritmadan 50 mkl oling.

Suyultirish omili: 10

9. Tahlil jarayoni

9.1 Tahlil qilishdan oldin ogohlantirish

9.1.1Barcha reagentlar va mikro quduqlar xona haroratida (20-25 ℃) ekanligiga ishonch hosil qiling.

9.1.2Qolgan barcha reaktivlarni 2-8 ga qaytaring℃ishlatilgandan keyin darhol.

9.1.3Mikro quduqlarni to'g'ri yuvish tahlil jarayonida muhim qadamdir;bu Elishay tahlilining takrorlanishining muhim omilidir.

9.1.4 Ayorug'likni o'chiring va inkubatsiya paytida mikro quduqlarni yoping.

9.2 Tahlil bosqichlari

9.2.1 Barcha reagentlarni xona haroratida (20-25 ℃) 30 daqiqadan ko'proq vaqt davomida olib tashlang, ishlatishdan oldin sekin silkiting.

9.2.2 Zarur bo'lgan mikro quduqlarni chiqarib oling va qolganlarini zudlik bilan 2-8 ℃ haroratda qulflangan qopga qaytaring.

9.2.3 Ishlatishdan oldin suyultirilgan yuvish eritmasi xona haroratida bo'lishi uchun qayta isitilishi kerak.

9.2.4Raqam:Har bir mikroquduq pozitsiyalari raqamlangan va barcha standartlar va namunalar ikki nusxada bajarilishi kerak.Standartlar va namunalar pozitsiyalarini yozib oling.

9.2.5Add standart eritma/namuna va antikor eritmasi: 50 µl standart eritma qo‘shing((to'plami taqdim etilgan)) yoki mos keladigan quduqlarga tayyorlangan namuna.50 µl antikor eritmasi qo‘shing (to'plami taqdim etilgan).Plastinani qo'lda silkitib, sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 37 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.

9.2.6Yuvish: Qopqoqni muloyimlik bilan echib oling va suyuqlikni quduqlardan tozalang va mikro quduqlarni 250 µl suyultirilgan yuvish eritmasi bilan yuving (yechim3) 10 soniya oralig'ida 4-5 marta.Qolgan suvni changni yutish qog'oz bilan so'rang (qolgan havo pufakchasini ishlatilmagan uchi bilan yo'q qilish mumkin).

9.2.7Enzim konjugati qo'shing: 100 ml ferment konjugati eritmasini qo'shing (to'plami taqdim etilgan) har bir quduqqa sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 37 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.Yuvish bosqichini yana takrorlang.

9.2.8Rang berish: 50 µl A eritmasini qo‘shing(to'plami taqdim etilgan) va 50 µl B eritmasi (to'plami taqdim etilgan) har bir quduqqa.Sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 37 ° C da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.

9.2.9O'lchov: 50 µl to‘xtatuvchi eritma qo‘shing(to'plami taqdim etilgan) har bir quduqqa.Ehtiyotkorlik bilan aralashtiramiz va absorbansni 450 nm da o'lchang (Bu ikki to'lqin uzunligi 450/630 nm bilan tavsiya etiladi. Natijani to'xtatuvchi eritma qo'shgandan keyin 5 daqiqa ichida o'qing).

10. Natijalar

10.1 Foiz yutilish

Standartlar va namunalar uchun olingan absorbans qiymatlarining o'rtacha qiymatlari birinchi standartning absorbans qiymatiga (nol standart) bo'linadi va 100% ga ko'paytiriladi.Shunday qilib, nol standarti 100% ga teng bo'ladi va absorbans qiymatlari foizlarda ko'rsatilgan.

B

Absorbans (%) = —— ×100%

B0

B —— absorbsiya standarti (yoki namunasi)

B0 ——yutilish nol standarti

10.2 Standart egri chiziq

----Standart egri chizish uchun: etalonlarning absorbans qiymatini y o'qi sifatida, tilozin standart eritmasi konsentratsiyasining yarim logarifmikini (ppb) x o'qi sifatida oling.

----Kalibrlash egri chizig'idan o'qilishi mumkin bo'lgan har bir namunadagi tilozin kontsentratsiyasi (ppb) kuzatilgan har bir namunaning mos keladigan suyultirish koeffitsientiga ko'paytiriladi va namunaning haqiqiy konsentratsiyasi olinadi.

E'tibor bering:

ma'lumotlarni tahlil qilish uchun maxsus dasturiy ta'minot ishlab chiqilgan bo'lib, ular so'rov bo'yicha taqdim etilishi mumkin.

11. Sezuvchanlik, aniqlik va aniqlik

Sinov sezgirligi:1,5 ppb

Aniqlash chegarasi:

Hayvon to‘qimalari………………………………………1,5ppb Sut…………………………………………………..15ppb Aniqlik:

Hayvon to'qimalari………………………………………80±15%

Sut………………………………………………………………80±10%

Aniqlik:

ELISA to'plamining o'zgaruvchanlik koeffitsienti 10% dan kam.

12. Eslatma

12.1 Agar reagentlar va namunalar xona haroratiga (20-25 ℃) sozlanmagan bo'lsa, standartlar va namunalar uchun olingan absorbans qiymatlarining o'rtacha qiymatlari kamayadi.

12.2 Muvaffaqiyatsiz takrorlanishiga yo'l qo'ymaslik uchun qadamlar orasida mikro quduqlarning quritilishiga yo'l qo'ymang va mikro quduq ushlagichiga tegib bo'lgandan so'ng darhol keyingi bosqichni bajaring.

12.3 Ishlatishdan oldin har bir reagentni muloyimlik bilan silkiting.

12.4 Teringizni to'xtatuvchi eritmadan uzoqroq tuting, chunki u 0,5 MH₂SO₄yechim.

12.5 Eskirgan to'plamlardan foydalanmang.Turli partiyalarning reagentlarini almashtirmang, aks holda bu sezgirlikni pasaytiradi.

12.6 ELISA to'plamlarini 2-8 ℃ haroratda saqlang, muzlatib qo'ymang.Mikro quduq plitalarini muhrlab qo'ying, barcha inkubatsiyalar davomida to'g'ridan-to'g'ri quyosh nurlaridan saqlaning.Mikrotitr plitalarini yopish tavsiya etiladi.

12.7 Agar u rangga aylansa, substrat eritmasidan voz kechish kerak.Nol standartining absorbsiya qiymati (450/630nm) 0,5 dan (A450nm<0,5) kam bo'lsa, reagentlar yomonlashishi mumkin.

12.8 Rang berish reaksiyasi A eritmasi va B eritmasi qo'shilgandan keyin 15 minut o'tishi kerak. Agar rang juda ochiq bo'lsa, uni aniqlash uchun inkubatsiya vaqtini 20 minut yoki undan ko'proq uzaytirishingiz mumkin.Hech qachon 30 daqiqadan oshmasligi kerak, aksincha, inkubatsiya vaqtini to'g'ri qisqartiring.

12.9 Optimal reaksiya harorati 37℃.Yuqori yoki past harorat sezgirlik va absorbans qiymatlarining o'zgarishiga olib keladi.

13. Saqlash

Saqlash holati: 2-8 ℃.

Saqlash muddati: 12 oy.