Konkurenciva Enzima Immunoassay Kit por Kvanta Analizo de Tilosin
Konkurenciva Enzima Imunotesta Ilaro por
Kvanta Analizo deTilozino
1. Fono
Tilozinoestas makrolida antibiotiko, kiu estas ĉefe aplikata kiel kontraŭbakteria kaj kontraŭmikoplasma.Striktaj MRL-oj estis establitaj ĉar ĉi tiu drogo povas kaŭzi gravan kromefikon en certaj grupoj.
Ĉi tiu ilaro estas nova produkto bazita sur ELISA teknologio, kiu estas rapida, facila, preciza kaj sentema kompare kun komuna instrumenta analizo kaj bezonas nur 1.5 horojn en unu operacio, ĝi povas konsiderinde minimumigi operacian eraron kaj laborintensecon.
2. Testa Principo
Ĉi tiu ilaro estas bazita sur nerekte-konkurenciva ELISA-teknologio.La mikrotiterputoj estas kovritaj per kunliga antigeno.Tilosinrestaĵo en la provaĵo konkuras kun la antigeno kovrita sur la mikrotiterplato por la antikorpo.Post la aldono de enzimo etikedita kontraŭ-antikorpo, TMB-substrato estas uzata por montri la koloron.Absorbance de la specimeno estas negative rilatita al la tilosino loĝas en ĝi, post komparo kun la Norma Kurbo, multiplikita per la dilua faktoro, tilosin restaĵo kvanto en la specimeno povas esti kalkulita.
3. Aplikoj
Ĉi tiu ilaro povas esti uzata en kvanta kaj kvalita analizo de tilosinrestaĵo en besta histo (kokido, porkaĵo, anaso) kaj lakto, mielo, ovo ktp.
4. Krucreagoj
Tilozino………………………………………………………..100%
Tilmicosino……………………………………………………<2%
5. Materialoj Bezonataj
5.1 Ekipaĵoj:
----Mikrotiterplata spektrofotometro (450nm/630nm)
----Rotacianta vaporigilo aŭ nitrogenaj sekigaj instrumentoj
----homogeneizador
----Skuujo
----Centrifugilo
----Analitika pesilo (indukto: 0.01g)
----Diplomita pipeto: 10ml
----Kaŭĉuka pipeta bulbo
----Volumfrako: 10ml
----Tuboj de polistireno centrifugilo: 50ml
----Mikropipetoj: 20-200ml, 100-1000ml
250ml-multipeto
5.2 Reakciiloj:
----Natria hidroksido (NaOH, AR)
----Natria bikarbonato (NaHCO3,AR)
---- Natria karbonato (NaCO3, AR)
---- Trikloroaceta acido (AR)
---- Acetonitrilo (AR)
----Etilacetato (AR)
┅┅n-Heksano (AR)
----Dejonigita akvo
6. Kit Komponantoj
l Mikrotiterplato kun 96 putoj kovritaj per antigeno
l Normaj solvoj (5 boteloj, 1 ml/botelo)
0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb
l Pika norma kontrolo: (1 ml/botelo)1 ppm
l Enzima konjugacio 1ml……………..…..…ruĝa ĉapo
l Antikorpa solvaĵo 7ml……………….……verda ĉapo
l Solvo A 7ml……………………………….….……blanka ĉapo
l Solvo B 7ml………………………………..ruĝa ĉapo
l Haltiga solvo 7ml.……………….……….flava ĉapo
l 20×koncentrita lava solvo 40ml
…………………………………………..…travidebla ĉapo
l 4×koncentrita eltira solvo 50ml
………………………………………………………….blua ĉapo
7. Preparado de Reakciiloj:
Solvo 1:0.1mol/L NaOH-solvo
Pezu 0,4 g de NaOH al 100 ml dejonigita akvo kaj miksi tute.
Solvo 2: 1mol/L NaOH-solvo
Pezu 4g de NaOH al 100ml dejonigita akvo kaj miksi tute.
Solvo 3: Karbonata bufrosalo
Solvo1: 0.2M PB
Solvu 51,6 g da Na2HPO4·12H2O, 8,7 g da NaH2PO4·2H2O kun dejonigita akvo kaj diluu al 1000 ml.
Solvo2: Eltira solvo
Diluu la 2×koncentrita ekstraktan solvon kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:1 (ekz. 10ml da 2×eltira solvo + 10ml da dejonigita akvo), kiu estos uzata por specimena eltiro,ĉi tiu solvo povas esti konservita je 4℃ dum 1 monato.
Solvo3: Lavu solvo
Diluu la 20×koncentrita lavsolvo kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:19 (ekz. 5ml da 20×lava solvaĵo + 95ml da dejonigita akvo), kiu estos uzata por lavi la telerojn.Ĉi tiu solvo povas esti konservita je 4℃ dum 1 monato.
8. Specimenaj Preparoj
8.1 Avizo kaj antaŭzorgoj antaŭ operacio:
(a) Bonvolu uzi unufojajn konsiletojn en la procezo de eksperimento, kaj ŝanĝi la konsiletojn kiam sorbas malsaman reakciilon.
(b) Certiĝu, ke ĉiuj instrumentoj estas puraj.
(c) Konservu histoprovaĵon en frosto.
(d) Preta specimeno devas esti uzata por analizo tuj.
8.2 Besta histo (kokido, porkaĵo, ktp)
----Homogeneigi la specimenon per homogenigilo;
----Prenu 2.0±0.05g da homogenaĵo en 50ml polistirenan centrifugilon;aldonu 2ml da 0.2M PB (solvo1), skuu por solvi, kaj poste aldonu 8ml da etilacetato kaj skuu forte dum 3min;
---- Centrifugilo por disiĝo: 3000g / ĉirkaŭa temperaturo / 5 min.
----Transloki 4ml de la supernatanta organika fazo en 10ml vitran tubon, sekigi per 50-60℃ akvobano sub nitrogena gasa fluo;
---- Solvu la sekan restaĵon kun 1ml da n-heksano, vortigu dum 30s por solvi, kaj poste aldonu 1ml da eltira solvo (solvo2), vortico dum 1 min.centrifugilo por apartigo: 3000 g / ĉirkaŭa temperaturo / 5 min
----Forigu la supernatan n-hexanan fazon;prenu 50μl de la substrata akva fazo por analizo.
Dilua faktoro: 1
8.2 Lakto
---- Prenu 100μl da kruda lakto-provaĵo, miksu kun 900μl da eltira solvo (solvo2), kaj miksi tute.
----Prenu 50μl de la preta solvo por analizo.
Dilua faktoro: 10
9. Procezo
9.1 Rimarku antaŭ analizo
9.1.1Certigu, ke ĉiuj reakciiloj kaj mikroputoj estas ĉiuj ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃).
9.1.2Revenu ĉiujn ceterajn reakcilojn al 2-8℃tuj post uzo.
9.1.3Lavi la mikroputojn ĝuste estas grava paŝo en la procezo de analizo;ĝi estas la esenca faktoro al la reproduktebleco de la ELISA-analizo.
9.1.4 Amalplenigi la lumon kaj kovri la mikroputojn dum kovado.
9.2 Analizaj Paŝoj
9.2.1 Elprenu ĉiujn reakciulojn ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃) dum pli ol 30 minutoj, milde skuu antaŭ uzo.
9.2.2 Eligu la mikroputojn necesajn kaj redonu la reston en la zipŝlosan sakon je 2-8℃ tuj.
9.2.3 La diluita lavsolvo devas esti revarmigita por esti ĉe ĉambra temperaturo antaŭ uzo.
9.2.4Nombro:Numeritaj ĉiuj mikroputecaj pozicioj kaj ĉiuj normoj kaj specimenoj devas esti kuritaj duplikate.Registri la normojn kaj specimenajn poziciojn.
9.2.5Add norma solvo/provaĵo kaj antikorpa solvo: Aldonu 50µl da norma solvaĵo((ilaro provizita)) aŭ preta specimeno al respondaj putoj.Aldonu 50 µl da antikorpa solvaĵo (ilaro provizita).Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 30 minutoj je 37 ℃ kun kovrilo.
9.2.6Lavu: Forigu la kovrilon milde kaj purigu la likvaĵon el la putoj kaj lavu la mikroputojn per 250µl diluita lavsolvo (solvo3) je intervalo de 10s por 4-5 fojojn.Sorbi la restan akvon per sorba papero (la cetera aerveziko povas esti forigita per neuzata pinto).
9.2.7Aldonu enzimkonjugaton: Aldonu 100 ml da enzimkonjugaciaĵo (ilaro provizita) al ĉiu puto, miksu milde kaj kovu dum 30 minutoj je 37 ℃ kun kovrilo.Ripetu la lavan paŝon denove.
9.2.8Kolorigo: Aldonu 50µl da solvo A(ilaro provizita) kaj 50µl da solvaĵo B(ilaro provizita) al ĉiu puto.Miksu milde kaj kovu dum 15 minutoj je 37℃ kun kovrilo.
9.2.9Mezuro: Aldonu 50µl de la halta solvo (ilaro provizita) al ĉiu puto.Miksu milde kaj mezuru la absorbadon ĉe 450nm (Sugestas mezuri kun la duobla ondolongo de 450/630nm. Legu la rezulton ene de 5 minutoj post aldoni haltan solvon).
10. Rezultoj
10.1 Procenta absorbo
La averaĝaj valoroj de la absorbadvaloroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estas dividitaj per la absorbadvaloro de la unua normo (nul normo) kaj multobligitaj je 100%.La nula normo estas tiel egala al 100% kaj la absorbadvaloroj estas cititaj en procentoj.
B
Sorbado (%) = —— ×100%
B0
B ——sorba normo (aŭ specimeno)
B0 ——sorba nula normo
10.2 Norma Kurbo
----Por desegni norman kurbon: Prenu la absorban valoron de normoj kiel y-akson, duonlogaritman de la koncentriĝo de la tilosinnormsolvo (ppb) kiel x-akso.
----La tilosin-koncentriĝo de ĉiu specimeno (ppb), kiu legeblas de la kalibrada kurbo, estas multobligita per la responda Dilua faktoro de ĉiu specimeno sekvita, kaj la reala koncentriĝo de specimeno estas akirita.
Bonvolu rimarki:
speciala programaro estis evoluigita por datuma analizo, kiu povas esti provizita laŭpeto.
11. Sentemo, precizeco kaj precizeco
Testa Sentemo:1.5ppb
Detekta limo:
Besta histo…………………………………………………… 1.5ppb Lakto……………………………………………………………………..15ppb Precizeco:
Besta histo…………………………………………………… 80±15%
Lakto………………………………………..……….……80±10%
Precizeco:
Varia koeficiento de la ELISA ilaro estas malpli ol 10%.
12. Rimarku
12.1 La averaĝaj valoroj de la sorbaj valoroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estos reduktitaj se la reakciiloj kaj specimenoj ne estis reguligitaj al ĉambra temperaturo (20-25 ℃).
12.2 Ne lasu mikroputojn sekiĝi inter paŝoj por eviti malsukcesan reprodukteblecon kaj funkciigu la sekvan paŝon tuj post frapado de la mikroputo-tenilo.
12.3 Skuu ĉiun reakciilon milde antaŭ uzo.
12.4 Tenu vian haŭton for de la halta solvo ĉar ĝi estas 0.5MH2SO4solvo.
12.5 Ne uzu la ilojn malmodernajn.Ne interŝanĝu la reactivojn de malsamaj aroj, aŭ alie ĝi faligos la sentemon.
12.6 Tenu la ELISA-kompletojn je 2-8℃, ne frostigu.Sigelu ripozajn mikroputajn platojn, Evitu rektan sunlumon dum ĉiuj kovadoj.Oni rekomendas kovri la mikrotiterajn platojn.
12.7 Substrata solvo devus esti forlasita se ĝi iĝas koloroj.La reakciiloj povas esti malbonaj se la absorba valoro (450/630nm) de la nula normo estas malpli ol 0.5 (A450nm<0.5).
12.8 La kolora reago bezonas 15 minutojn post la aldono de solvo A kaj solvo B. Kaj vi povas plilongigi la kovadajn tempojn ĝis 20 minutoj aŭ pli se la koloro estas tro malpeza por esti determinita.Neniam superu 30min, male, mallongigu la kovadon konvene.
12.9 La optimuma reakcia temperaturo estas 37℃.Pli alta aŭ pli malalta temperaturo kondukos al la ŝanĝoj de sentemo kaj absorbadvaloroj.
13. Stokado
Kondiĉo de konservado: 2-8 ℃.
Stokado: 12 monatoj.
