prodott

Kit ta' Immunoassay ta' Enżimi Kompetittivi għal Analiżi Kwantitattiva ta' Tylosin

Deskrizzjoni qasira:

Tylosin huwa antibijotiku makrolidu, li huwa prinċipalment applikat bħala antibatteriċi u anti-mycoplasma.Ġew stabbiliti MRLs stretti peress li din il-mediċina tista 'twassal għal effett sekondarju serju f'ċerti gruppi.

Dan il-kit huwa prodott ġdid ibbażat fuq teknoloġija ELISA, li hija veloċi, faċli, preċiża u sensittiva meta mqabbla ma 'analiżi strumentali komuni u teħtieġ biss 1.5 sigħat f'operazzjoni waħda, tista' tnaqqas b'mod konsiderevoli l-iżball ta 'tħaddim u l-intensità tax-xogħol.


Dettall tal-Prodott

Tags tal-Prodott

Kit ta' Immunoassay ta' Enżimi Kompetittivi għal

Analiżi kwantitattiva ta'Tylosin


1. Sfond

Tylosinhuwa antibijotiku makrolidu, li huwa prinċipalment applikat bħala antibatteriċi u anti-mycoplasma.Ġew stabbiliti MRLs stretti peress li din il-mediċina tista 'twassal għal effett sekondarju serju f'ċerti gruppi.

Dan il-kit huwa prodott ġdid ibbażat fuq teknoloġija ELISA, li hija veloċi, faċli, preċiża u sensittiva meta mqabbla ma 'analiżi strumentali komuni u teħtieġ biss 1.5 sigħat f'operazzjoni waħda, tista' tnaqqas b'mod konsiderevoli l-iżball ta 'tħaddim u l-intensità tax-xogħol.

2. Prinċipju tat-Test

Dan il-kit huwa bbażat fuq teknoloġija ELISA kompetittiva indiretta.Il-bjar tal-mikrotiter huma miksija bl-antiġen tal-igganċjar.Residwu tat-tylosin fil-kampjun jikkompeti mal-antiġen miksi fuq il-pjanċa tal-mikrotiter għall-antikorp.Wara ż-żieda ta 'anti-antikorp immarkat b'enzima, is-sottostrat TMB jintuża biex juri l-kulur.L-assorbiment tal-kampjun huwa relatat b'mod negattiv mat-tilosin li jirrisjedi fih, wara li jitqabbel mal-Kurva Standard, immultiplikat bil-fattur ta 'dilwizzjoni, il-kwantità ta' residwu ta 'tylosin fil-kampjun tista' tiġi kkalkulata.

3. Applikazzjonijiet

Dan il-kit jista 'jintuża f'analiżi kwantitattiva u kwalitattiva ta' residwu ta 'tylosin fit-tessut tal-annimali (tiġieġ, majjal, papra) u ħalib, għasel, bajd, eċċ.

4. Reazzjonijiet inkroċjati

Tylosin…………………………………………………… ..100%

Tilmicosin……………………………………………………<2%

5. Materjali Meħtieġa

5.1 Tagħmir:

---- Spettrofotometru tal-pjanċa tal-mikrotiter (450nm/630nm)

---- Evaporatur li jdur jew strumenti tat-tnixxif tan-nitroġenu

----omoġenizzatur

----Shaker

---- Ċentrifuga

---- Bilanċ analitiku (inductance: 0.01g)

---- Pipetta gradwata: 10ml

---- Bozza tal-pipetta tal-gomma

----Flask volumetriku: 10ml

----Tubi ċentrifugi tal-polistirene: 50ml

---- Mikropipetti: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-multipipette

5.2 Reaġenti:

----Idrossidu tas-sodju (NaOH, AR)

---- Bikarbonat tas-sodju (NaHCO3,AR)

---- Karbonat tas-sodju (NaCO3, AR)

---- Aċidu trikloroaċetiku (AR)

---- Aċetonitrile (AR)

----Etil aċetat (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

----Ilma dejonizzat

6. Kit Komponenti

l Pjanċa tal-mikrotiter b'96 ħofra miksija bl-antiġen

l Soluzzjonijiet standard (5 fliexken, 1ml/flixkun)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l Kontroll standard ta 'spiking: (1ml/flixkun)1ppm

l Enżima konjugata 1ml……………..…..…tapp aħmar

l Soluzzjoni ta' antikorp 7ml……………….……tapp aħdar

l Soluzzjoni A 7ml………….….……tapp abjad

l Soluzzjoni B 7ml……………………………..tapp aħmar

l Stop solution 7ml.…………….……….tapp isfar

l 20 × soluzzjoni tal-ħasil konċentrata 40ml

…………………………………………..…tapp trasparenti

l 4 × soluzzjoni ta 'estrazzjoni kkonċentrata 50ml

……………………………………………………….tapp blu

7. Preparazzjoni tar-reaġenti:

Soluzzjoni 1:Soluzzjoni NaOH 0.1mol/L

Iżen 0.4g NaOH sa 100ml ilma dejonizzat u ħawwad kompletament.

Soluzzjoni 2: 1mol/L soluzzjoni NaOH

Iżen 4g NaOH sa 100ml ilma dejonizzat u ħawwad kompletament.

Soluzzjoni 3: Melħ buffer tal-karbonat

Soluzzjoni1: 0.2M PB

Dewweb 51.6g ta 'Na2HPO4·12H2O, 8.7g ta 'NaH2PO4·2H2O b'ilma dejonizzat u ħallat għal 1000ml.

Soluzzjoni2: Soluzzjoni ta 'estrazzjoni

Iddilwa s-soluzzjoni ta' estrazzjoni 2×konċentrata b'ilma dejonizzat fil-proporzjon tal-volum ta' 1:1(eż. 10ml ta' 2×soluzzjoni ta' estrazzjoni + 10ml ta' ilma dejonizzat), li se jintużaw għall-estrazzjoni tal-kampjun,din is-soluzzjoni tista 'tinħażen f'4℃ għal xahar.

Soluzzjoni3: Aħsel soluzzjoni

Iddilwa s-soluzzjoni tal-ħasil 20 × konċentrata b'ilma dejonizzat fil-proporzjon tal-volum ta '1:19(eż. 5ml ta' 20×soluzzjoni tal-ħasil + 95ml ta' ilma dejonizzat), li se jintużaw għall-ħasil tal-pjanċi.Din is-soluzzjoni tista 'tinħażen f'4℃ għal xahar.

8. Preparazzjonijiet tal-Kampjuni

8.1 Avviż u prekawzjonijiet qabel l-operazzjoni:

(a) Jekk jogħġbok uża ponot ta 'darba fil-proċess tal-esperiment, u ibdel il-ponot meta jassorbi reaġent differenti.

(b) Kun żgur li l-istrumenti kollha huma nodfa.

(c) Żomm il-kampjun tat-tessut fil-friża.

(d) Kampjun ippreparat għandu jintuża għall-assaġġ f'daqqa.

8.2 Tessut tal-annimali (tiġieġ, majjal, eċċ)

----Omoġenizza l-kampjun b'omoġenizzatur;

---- Ħu 2.0±0.05g ta 'omoġenat f'tubu ċentrifugu tal-polistirene ta' 50ml;żid 2ml ta' 0.2M PB (soluzzjoni1), ħawwad biex jinħall, u mbagħad żid 8ml ta 'aċetat etiliku u ħawwad bil-biża għal 3min;

---- Ċentrifuga għas-separazzjoni: 3000g / temperatura ambjentali / 5min.

---- Ittrasferixxi 4ml tal-fażi organika supernatant f'tubu tal-ħġieġ ta '10ml, nixxef b'banju ta' l-ilma ta '50-60℃ taħt nixxiegħa tal-gass tan-nitroġenu;

---- Dewweb il-fdal niexef b'1ml ta 'n-hexane, vortex għal 30s biex jinħall, u mbagħad żid 1ml ta' soluzzjoni ta 'estrazzjoni (soluzzjoni2), vortex għal 1min.ċentrifuga għas-separazzjoni: 3000g / temperatura ambjentali / 5min

---- Neħħi l-fażi n-hexane tas-supernatant;ħu 50μl tal-fażi akwea tas-sottostrat għall-assaġġ.

 

Fattur ta' dilwizzjoni: 1

 

8.2 Ħalib

---- Ħu 100μl ta 'kampjun tal-ħalib nej, ħallat ma' 900μl ta 'soluzzjoni ta' estrazzjoni (soluzzjoni2), u ħawwad kompletament.

---- Ħu 50μl tas-soluzzjoni ppreparata għall-assaġġ.

 

Fattur ta' dilwizzjoni: 10

 

9. Proċess ta 'assaġġ

9.1 Avviż qabel l-assaġġ

9.1.1Kun żgur li r-reaġenti u l-mikrowells kollha huma kollha f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃).

9.1.2Irritorna r-reaġenti kollha tal-bqija għal 2-8immedjatament wara li jintuża.

9.1.3Il-ħasil tal-microwells b'mod korrett huwa pass importanti fil-proċess tal-assaġġ;huwa l-fattur vitali għar-riproduċibbiltà tal-analiżi ELISA.

9.1.4 Avojta d-dawl u għatti l-microwells waqt l-inkubazzjoni.

9.2 Passi tal-Assaġġ

9.2.1 Oħroġ ir-reaġenti kollha f'temperatura tal-kamra (20-25 ℃) għal aktar minn 30min, ħawwad bil-mod qabel l-użu.

9.2.2 Oħroġ il-microwells meħtieġa u rritorna l-bqija fil-borża zip-lock f'2-8℃ immedjatament.

9.2.3 Is-soluzzjoni tal-ħasil dilwita għandha tissaħħan mill-ġdid biex tkun f'temperatura ambjentali qabel l-użu.

9.2.4Numru:Kull pożizzjonijiet tal-mikrowell numerati u l-istandards u l-kampjuni kollha għandhom jitħaddmu f'żewġ kopji.Irreġistra l-istandards u l-pożizzjonijiet tal-kampjuni.

9.2.5Add soluzzjoni/kampjun standard u soluzzjoni ta' antikorp: Żid 50µl ta' soluzzjoni standard((kit ipprovdut)) jew kampjun ippreparat għal bjar korrispondenti.Żid 50µl ta’ soluzzjoni ta’ antikorp (kit ipprovdut).Ħallat bil-mod billi tħawwad il-pjanċa manwalment u inkuba għal 30min f'37℃ b'għatu.

9.2.6Aħsel: Neħħi l-għatu bil-mod u purifika l-likwidu mill-bjar u laħlaħ il-microwells b'250µl soluzzjoni tal-ħasil dilwita (soluzzjoni3) f'intervall ta '10s għal 4-5 darbiet.Assorbi l-ilma residwu b'karta assorbenti (il-bużżieqa ta 'l-arja tal-bqija tista' tiġi eliminata bil-ponta mhux użata).

9.2.7Żid l-enżima konjugat: Żid 100ml ta' soluzzjoni ta' konjugat tal-enżimi (kit ipprovdut) għal kull bir, ħallat bil-mod u inkuba għal 30min f'37℃ b'għatu.Irrepeti l-pass tal-ħasil mill-ġdid.

9.2.8Kulur: Żid 50µl ta’ soluzzjoni A(kit ipprovdut) u 50µl tas-soluzzjoni B(kit ipprovdut) għal kull bir.Ħallat bil-mod u inkuba għal 15-il minuta f'37℃ b'għatu.

9.2.9Miżura: Żid 50µl tas-soluzzjoni ta' waqfien (kit ipprovdut) għal kull bir.Ħallat bil-mod u kejjel l-assorbenza f'450nm (Huwa ssuġġerit miżura bil-wavelength doppju ta '450/630nm. Aqra r-riżultat fi żmien 5min wara li żżid soluzzjoni ta' waqfien).

10. Riżultati

10.1 Assorbenza perċentwali

Il-valuri medji tal-valuri ta' assorbiment miksuba għall-istandards u l-kampjuni huma diviżi bil-valur ta' assorbiment ta' l-ewwel standard (standard żero) u mmultiplikati b'100%.L-istandard żero għalhekk isir ugwali għal 100% u l-valuri ta' assorbiment huma kkwotati f'perċentwali.

B

Assorbenza (%) = —— ×100%

B0

B ——standard ta' assorbiment (jew kampjun)

B0 ——assorbenza żero standard

10.2 Kurva Standard

---- Biex tiġbed kurva standard: Ħu l-valur ta 'assorbiment ta' standards bħala assi y, semi logaritmiku tal-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni ta 'standards ta' tylosin (ppb) bħala assi x.

---- Il-konċentrazzjoni ta 'tilosin ta' kull kampjun (ppb), li tista 'tinqara mill-kurva tal-kalibrazzjoni, hija mmultiplikata bil-fattur ta' Dilwizzjoni korrispondenti ta 'kull kampjun segwit, u tinkiseb il-konċentrazzjoni attwali tal-kampjun.

Jekk jogħġbok innota:

softwer speċjali ġie żviluppat għall-analiżi tad-dejta, li jista 'jiġi pprovdut fuq talba.

11. Sensittività, preċiżjoni u preċiżjoni

Sensittività tat-Test:1.5ppb

Limitu ta' skoperta:

Tessut ta 'l-annimali……………………………………… 1.5ppb Ħalib……………………………………………………………………..15ppb Eżattezza:

Tessut tal-annimali………………………………………………80±15%

Ħalib…………………………………..……….……80±10%

Preċiżjoni:

Il-koeffiċjent tal-varjazzjoni tal-kit ELISA huwa inqas minn 10%.

12. Avviż

12.1 Il-valuri medji tal-valuri tal-assorbiment miksuba għall-istandards u l-kampjuni jitnaqqsu jekk ir-reaġenti u l-kampjuni ma jkunux ġew irregolati għat-temperatura tal-kamra (20-25 ℃).

12.2 Tħallix microwells jinxef bejn il-passi biex tiġi evitata riproduċibbiltà bla suċċess u ħaddem il-pass li jmiss immedjatament wara ttektek il-holder tal-microwells.

12.3 Ħawwad kull reaġent bil-mod qabel l-użu.

12.4 Żomm il-ġilda tiegħek 'il bogħod mis-soluzzjoni ta' waqfien għax hija 0.5MH2SO4soluzzjoni.

12.5 Tużax il-kits skaduti.Tiskambjax ir-reaġenti ta 'lottijiet differenti, jew inkella se twaqqa' s-sensittività.

12.6 Żomm il-kits ELISA f'2-8℃, tiffriżax.Issiġilla pjanċi tal-mikrowell tal-mistrieħ, Evita dawl tax-xemx dritt waqt l-inkubazzjonijiet kollha.Il-kisi tal-pjanċi tal-mikrotiter huwa rakkomandat.

12.7 Is-soluzzjoni tas-sottostrat għandha tiġi abbandunata jekk idawwar il-kuluri.Ir-reaġenti jistgħu jduru ħażin jekk il-valur tal-assorbiment (450/630nm) tal-istandard żero huwa inqas minn 0.5 (A450nm <0.5).

12.8 Ir-reazzjoni tal-kulur teħtieġ 15min wara ż-żieda tas-soluzzjoni A u s-soluzzjoni B. U tista 'ttawwal il-firxiet ta' ħin ta 'inkubazzjoni għal 20min jew aktar jekk il-kulur ikun ħafif wisq biex jiġi determinat.Qatt ma taqbeż it-30min, għall-kuntrarju, tqassar il-ħin ta 'inkubazzjoni kif suppost.

12.9 L-aħjar temperatura ta 'reazzjoni hija 37℃.Temperatura ogħla jew aktar baxxa twassal għal bidliet fil-valuri tas-sensittività u l-assorbiment.

13. Ħażna

Kondizzjoni tal-ħażna: 2-8℃.

Perjodu ta 'ħażna: 12-il xahar.

 


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibgħatilna