Produkt

Kompetitives Enzym-Immunoassay-Kit zur quantitativen Analyse von Tylosin

Kurze Beschreibung:

Tylosin ist ein Makrolid-Antibiotikum, das hauptsächlich als antibakterielles Mittel und Antimykoplasma eingesetzt wird.Es wurden strenge Rückstandshöchstgehalte festgelegt, da dieses Medikament bei bestimmten Gruppen zu schwerwiegenden Nebenwirkungen führen kann.

Dieses Kit ist ein neues Produkt, das auf der ELISA-Technologie basiert, die im Vergleich zur herkömmlichen instrumentellen Analyse schnell, einfach, genau und empfindlich ist und nur 1,5 Stunden in einem Arbeitsgang benötigt, wodurch Betriebsfehler und Arbeitsintensität erheblich minimiert werden können.


Produktdetail

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Kompetitives Enzym-Immunoassay-Kit für

Quantitative Analyse vonTylosin


1. Hintergrund

Tylosinist ein Makrolid-Antibiotikum, das hauptsächlich als antibakterielles und antimykoplasmatisches Mittel eingesetzt wird.Es wurden strenge Rückstandshöchstgehalte festgelegt, da dieses Medikament bei bestimmten Gruppen zu schwerwiegenden Nebenwirkungen führen kann.

Dieses Kit ist ein neues Produkt, das auf der ELISA-Technologie basiert, die im Vergleich zur herkömmlichen instrumentellen Analyse schnell, einfach, genau und empfindlich ist und nur 1,5 Stunden in einem Arbeitsgang benötigt, wodurch Betriebsfehler und Arbeitsintensität erheblich minimiert werden können.

2. Testprinzip

Dieses Kit basiert auf der indirekt-kompetitiven ELISA-Technologie.Die Mikrotiter-Wells sind mit Kopplungsantigen beschichtet.Tylosinrückstände in der Probe konkurrieren mit dem auf der Mikrotiterplatte aufgetragenen Antigen um den Antikörper.Nach der Zugabe von enzymmarkiertem Anti-Antikörper wird TMB-Substrat verwendet, um die Farbe zu zeigen.Die Extinktion der Probe steht in negativem Zusammenhang mit dem darin enthaltenen Tylosin. Nach Vergleich mit der Standardkurve, multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor, kann die Tylosin-Rückstandsmenge in der Probe berechnet werden.

3. Anwendungen

Dieses Kit kann zur quantitativen und qualitativen Analyse von Tylosinrückständen in tierischem Gewebe (Huhn, Schwein, Ente) und Milch, Honig, Ei usw. verwendet werden.

4. Kreuzreaktionen

Tylosin………………………………………………..100%

Tilmicosin…………………………………………………<2%

5. Erforderliche Materialien

5.1 Ausrüstung:

----Mikrotiterplatten-Spektrophotometer (450nm/630nm)

----Rotationsverdampfer oder Stickstofftrocknungsinstrumente

----Homogenisator

----Shaker

----Zentrifuge

----Analysenwaage (Induktivität: 0,01 g)

----Messpipette: 10ml

----Pipettenbirne aus Gummi

----Messkolben: 10ml

----Polystyrol-Zentrifugenröhrchen: 50ml

----Mikropipetten: 20-200 ml, 100-1000 ml

250ml-Multipipette

5.2 Reagenzien:

----Natriumhydroxid (NaOH, AR)

----Natriumbicarbonat (NaHCO3,AR)

---- Natriumcarbonat (NaCO3, AR)

----Trichloressigsäure (AR)

---- Acetonitril (AR)

----Ethylacetat (AR)

┅┅n-Hexan (AR)

----Deionisiertes Wasser

6. Kit-Komponenten

l Mikrotiterplatte mit 96 mit Antigen beschichteten Vertiefungen

l Standardlösungen (5 Flaschen, 1 ml/Flasche)

0 ppb, 0,5 ppb, 1,5 ppb, 4,5 ppb, 13,5 ppb

l Dotierung Standardkontrolle: (1ml/Flasche)1 ppm

l Enzymkonjugat 1ml……………..…..…rote Kappe

l Antikörperlösung 7ml……………….……grüne Kappe

l Lösung A 7ml…………………….….……weiße Kappe

l Lösung B 7ml...……………………………..rote Kappe

l Stopplösung 7ml.……………….……….gelbe Kappe

l 20×konzentrierte Waschlösung 40ml

…………………………………..…transparente Kappe

l 4×konzentrierte Extraktionslösung 50ml

……………………………………………….blaue Kappe

7. Vorbereitung der Reagenzien:

Lösung 1:0,1 mol/L NaOH-Lösung

0,4 g NaOH auf 100 ml deionisiertes Wasser einwiegen und vollständig mischen.

Lösung 2: 1mol/L NaOH-Lösung

4 g NaOH auf 100 ml deionisiertes Wasser einwiegen und vollständig mischen.

Lösung 3: Carbonat-Puffersalz

Lösung1: 0,2 M PB

Löse 51,6 g Na auf2HPO4·12H2O, 8,7 g NaH2PO4·2H2O mit VE-Wasser auffüllen und auf 1000ml verdünnen.

Lösung2: Extraktionslösung

Verdünnen Sie die 2×konzentrierte Extraktionslösung mit deionisiertem Wasser im Volumenverhältnis 1:1(zB 10ml 2×Extraktionslösung + 10ml deionisiertes Wasser), die für die Probenentnahme verwendet werden,Diese Lösung kann 1 Monat lang bei 4℃ gelagert werden.

Lösung3: Waschlösung

Verdünnen Sie die 20-fach konzentrierte Waschlösung mit deionisiertem Wasser im Volumenverhältnis 1:19(B. 5 ml 20× Waschlösung + 95 ml deionisiertes Wasser), der zum Waschen der Platten verwendet wird.Diese Lösung kann 1 Monat bei 4℃ gelagert werden.

8. Probenvorbereitung

8.1 Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen vor dem Betrieb:

(a) Bitte verwenden Sie während des Experiments einmalige Spitzen und wechseln Sie die Spitzen, wenn Sie andere Reagenzien absorbieren.

(b) Stellen Sie sicher, dass alle Instrumente sauber sind.

(c) Bewahren Sie die Gewebeprobe eingefroren auf.

(d) Die vorbereitete Probe sollte sofort für den Test verwendet werden.

8.2 Tierisches Gewebe (Huhn, Schwein usw.)

----Probe mit Homogenisator homogenisieren;

----2,0 ± 0,05 g Homogenat in ein 50-ml-Polystyrol-Zentrifugenröhrchen geben;fügen Sie 2 ml 0,2 M PB hinzu (Lösung1) zum Auflösen schütteln, dann 8 ml Ethylacetat hinzufügen und 3 Minuten lang kräftig schütteln;

----Zentrifuge zur Trennung: 3000g / Umgebungstemperatur / 5min.

----4 ml der überstehenden organischen Phase in ein 10-ml-Glasröhrchen überführen, mit 50-60℃ Wasserbad unter Stickstoffgasstrom trocknen;

----Lösen Sie den trockenen Rest mit 1 ml n-Hexan auf, wirbeln Sie 30 Sekunden lang, um sich aufzulösen, und fügen Sie dann 1 ml Extraktionslösung hinzu (Lösung2), 1 Minute vortexen.Zentrifuge zur Trennung: 3000g / Umgebungstemperatur / 5min

----Entferne die überstehende n-Hexanphase;Nehmen Sie 50 μl der wässrigen Phase des Substrats für den Assay.

 

Verdünnungsfaktor: 1

 

8.2 Milch

----100 μl Rohmilchprobe entnehmen, mit 900 μl Extraktionslösung mischen (Lösung2) und vollständig mischen.

----Nehmen Sie 50 μl der vorbereiteten Lösung für den Assay.

 

Verdünnungsfaktor: 10

 

9. Assay-Verfahren

9.1 Hinweis vor dem Assay

9.1.1Stellen Sie sicher, dass alle Reagenzien und Mikrovertiefungen Raumtemperatur (20-25℃) haben.

9.1.2Bringen Sie alle restlichen Reagenzien zu 2-8 zurückunmittelbar nach Gebrauch.

9.1.3Das korrekte Waschen der Mikrowells ist ein wichtiger Schritt im Assayverfahren;es ist der lebenswichtige Faktor für die Reproduzierbarkeit der ELISA-Analyse.

9.1.4Awährend der Inkubation das Licht ausschalten und die Mikrovertiefungen abdecken.

9.2 Assay-Schritte

9.2.1 Nehmen Sie alle Reagenzien bei Raumtemperatur (20-25℃) für mehr als 30 Minuten heraus und schütteln Sie sie vor Gebrauch vorsichtig.

9.2.2 Holen Sie die benötigten Mikrowells heraus und geben Sie den Rest sofort bei 2-8℃ in den Reißverschlussbeutel zurück.

9.2.3 Die verdünnte Waschlösung sollte vor Gebrauch wieder auf Raumtemperatur erwärmt werden.

9.2.4Anzahl:Alle Mikrowell-Positionen sind nummeriert und alle Standards und Proben sollten doppelt ausgeführt werden.Notieren Sie die Standards und Probenpositionen.

9.2.5Add Standardlösung/Probe und Antikörperlösung: 50 µl Standardlösung ((Bausatz zur Verfügung gestellt)) oder vorbereitete Probe in die entsprechenden Vertiefungen.Fügen Sie 50 µl Antikörperlösung hinzu (Bausatz zur Verfügung gestellt).Durch manuelles Schütteln der Platte vorsichtig mischen und 30 min bei 37℃ mit Deckel inkubieren.

9.2.6Waschen: Entfernen Sie vorsichtig die Abdeckung und reinigen Sie die Flüssigkeit aus den Vertiefungen und spülen Sie die Mikrovertiefungen mit 250 µl verdünnter Waschlösung (Lösung3) im Abstand von 10 Sekunden für 4-5 Mal.Restwasser mit saugfähigem Papier aufsaugen (die Restluftblase kann mit unbenutzter Spitze beseitigt werden).

9.2.7Enzymkonjugat zugeben: Fügen Sie 100 ml Enzymkonjugatlösung hinzu (Bausatz zur Verfügung gestellt) in jede Vertiefung geben, vorsichtig mischen und 30 Minuten bei 37℃ mit Deckel inkubieren.Wiederholen Sie den Waschschritt erneut.

9.2.8Färbung: 50 µl Lösung A(Bausatz zur Verfügung gestellt) und 50 µl Lösung B(Bausatz zur Verfügung gestellt) zu jedem Brunnen.Vorsichtig mischen und 15 min bei 37℃ mit Deckel inkubieren.

9.2.9Messen: Fügen Sie 50 µl der Stopplösung hinzu (Bausatz zur Verfügung gestellt) zu jedem Brunnen.Mischen Sie vorsichtig und messen Sie die Extinktion bei 450 nm (es wird empfohlen, mit der dualen Wellenlänge von 450/630 nm zu messen. Lesen Sie das Ergebnis innerhalb von 5 Minuten nach Zugabe der Stopplösung ab).

10. Ergebnisse

10,1 Prozent Absorption

Die Mittelwerte der erhaltenen Extinktionswerte der Standards und der Proben werden durch den Extinktionswert des ersten Standards (Nullstandard) dividiert und mit 100 % multipliziert.Der Nullstandard wird somit gleich 100 % gesetzt und die Extinktionswerte in Prozent angegeben.

B

Absorption (%) = —— × 100 %

B0

B ——Extinktionsstandard (oder Probe)

B0 — Extinktionsnullstandard

10.2 Standardkurve

----Zeichnen einer Standardkurve: Nehmen Sie den Extinktionswert der Standards als y-Achse, halblogarithmisch der Konzentration der Tylosin-Standardlösung (ppb) als x-Achse.

----Die Tylosinkonzentration jeder Probe (ppb), die aus der Kalibrierungskurve abgelesen werden kann, wird mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor jeder gefolgten Probe multipliziert, und die tatsächliche Konzentration der Probe wird erhalten.

Bitte beachten Sie:

Für die Datenanalyse wurde eine spezielle Software entwickelt, die auf Anfrage zur Verfügung gestellt werden kann.

11. Empfindlichkeit, Genauigkeit und Präzision

Testempfindlichkeit:1,5 ppb

Nachweisgrenze:

Tierisches Gewebe ………………………….……………1,5 ppb Milch…………………………………………….....…..15ppb Genauigkeit:

Tierisches Gewebe………………………………………80±15%

Milch…………………………………..……….……80±10%

Präzision:

Der Variationskoeffizient des ELISA-Kits beträgt weniger als 10 %.

12. Hinweis

12.1 Die Mittelwerte der für die Standards und Proben erhaltenen Extinktionswerte verringern sich, wenn die Reagenzien und Proben nicht auf Raumtemperatur (20-25℃) reguliert wurden.

12.2 Lassen Sie die Mikrowells zwischen den Schritten nicht trocknen, um eine erfolglose Reproduzierbarkeit zu vermeiden, und führen Sie den nächsten Schritt unmittelbar nach dem Klopfen auf den Mikrowell-Halter durch.

12.3 Schütteln Sie jedes Reagenz vor Gebrauch vorsichtig.

12.4 Halten Sie Ihre Haut von der Stopplösung fern, da sie 0,5 MH enthält2SO4Lösung.

12.5 Verwenden Sie keine veralteten Kits.Tauschen Sie die Reagenzien verschiedener Chargen nicht aus, da sonst die Empfindlichkeit sinkt.

12.6 Bewahren Sie die ELISA-Kits bei 2-8℃ auf, frieren Sie sie nicht ein.Rest-Mikrotiterplatten versiegeln. Während aller Inkubationen direktes Sonnenlicht vermeiden.Es wird empfohlen, die Mikrotiterplatten abzudecken.

12.7 Substratlösung sollte aufgegeben werden, wenn sie sich verfärbt.Die Reagenzien können schlecht werden, wenn der Extinktionswert (450/630 nm) des Nullstandards weniger als 0,5 beträgt (E450 nm < 0,5).

12.8 Die Färbungsreaktion dauert 15 Minuten nach der Zugabe von Lösung A und Lösung B. Und Sie können die Inkubationszeit auf 20 Minuten oder mehr verlängern, wenn die Farbe zu hell ist, um bestimmt zu werden.Niemals 30min überschreiten, im Gegenteil, die Inkubationszeit ordentlich verkürzen.

12.9 Die optimale Reaktionstemperatur beträgt 37℃.Höhere oder niedrigere Temperaturen führen zu Änderungen der Empfindlichkeits- und Extinktionswerte.

13. Lagerung

Lagerbedingungen: 2-8℃.

Lagerdauer: 12 Monate.

 


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