продукт

1. Фон

Тилозинє макролідним антибіотиком, який в основному застосовується як антибактеріальний та протимікоплазмовий засіб.Було встановлено суворі MRL, оскільки цей препарат може призвести до серйозних побічних ефектів у певних груп.

Цей набір є новим продуктом, заснованим на технології ELISA, яка є швидкою, легкою, точною та чутливою порівняно зі звичайним інструментальним аналізом і займає лише 1,5 години на одну операцію, що може значно мінімізувати помилку операції та інтенсивність роботи.

2. Принцип тестування

Цей набір заснований на технології непрямого конкурентного ELISA.Лунки мікротитратора покриті антигеном зв’язування.Залишок тилозину в зразку конкурує за антитіло з антигеном, покритим пластиною для мікротитрації.Після додавання антитіла, міченого ферментом, для відображення кольору використовується субстрат ТМВ.Поглинання зразка негативно залежить від вмісту в ньому тилозину. Після порівняння зі стандартною кривою, помноженої на коефіцієнт розведення, можна розрахувати кількість залишку тилозину в зразку.

3. Додатки

Цей набір можна використовувати для кількісного та якісного аналізу залишків тилозину в тканинах тварин (курка, свинина, качка), молоці, меді, яйцях тощо.

4. Перехресні реакції

Тилозин………………………………………………..100%

Тілмікозин………………………………………………<2%

5. Необхідні матеріали

5.1 Обладнання:

----Спектрофотометр мікротитраційної пластини (450 нм/630 нм)

---- Ротаційний випарник або прилади для сушіння азотом

---- гомогенізатор

----Шейкер

---- Центрифуга

----Аналітичні ваги (індуктивність: 0,01 г)

---- Градуйована піпетка: 10 мл

----Гумова піпетка

---- Мірна колба: 10 мл

---- Полістирольні центрифужні пробірки: 50 мл

---- Мікропіпетки: 20-200 мл, 100-1000 мл

250мл-мультипіпетка

5.2 Реагенти:

----Гідроксид натрію (NaOH, АР)

---- Бікарбонат натрію (NaHCO_3,AR)

---- Карбонат натрію (NaCO₃, AR)

----Трихлороцтова кислота (АР)

---- Ацетонітрил (AR)

----Етилацетат (AR)

┅┅н-Гексан (AR)

----Деіонізована вода

6. Компоненти набору

l Планшет для мікротитрування з 96 лунками, покритими антигеном

l Стандартні розчини (5 пляшок, 1 мл/пляшка)

0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb

l Стандартний контроль: (1 мл/пляшка)1 ppm

l Ферментний кон’югат 1 мл……………..…..…червоний ковпачок

l Розчин антитіл 7 мл……………….……зелений ковпачок

l Розчин А 7 мл…………………….….……білий ковпачок

l Розчин B 7 мл...……………………………..червоний ковпачок

l Стоп розчин 7мл……………….……….жовтий ковпачок

l 20×концентрований миючий розчин 40 мл

…………………………………..…прозорий ковпачок

l 4 × концентрований екстракційний розчин 50 мл

……………………………………………….синя кепка

7. Приготування реагентів:

Рішення 1:0,1 моль/л розчину NaOH

Зважте 0,4 г NaOH до 100 мл деіонізованої води та повністю перемішайте.

Рішення 2: 1 моль/л розчину NaOH

Зважте 4 г NaOH до 100 мл деіонізованої води та повністю перемішайте.

Рішення 3: Карбонатна буферна сіль

Рішення1: 0,2 МПБ

Розчиніть 51,6 г Na₂HPO₄·12 год₂O, 8,7 г NaH₂PO₄·2 год₂O деіонізованою водою та розведіть до 1000 мл.

Рішення2: Екстракційний розчин

Розведіть концентрований екстракційний розчин 2× деіонізованою водою в об’ємному співвідношенні 1:1 (наприклад, 10 мл розчину 2 × екстракції + 10 мл деіонізованої води), який буде використовуватися для вилучення зразків,цей розчин можна зберігати при 4 ℃ протягом 1 місяця.

Рішення3: Промивний розчин

Розведіть 20× концентрований промивний розчин деіонізованою водою в об’ємному співвідношенні 1:19 (наприклад, 5 мл розчину для промивання 20 × + 95 мл деіонізованої води), яка буде використовуватися для миття тарілок.Цей розчин можна зберігати при 4 ℃ протягом 1 місяця.

8. Приготування проб

8.1 Повідомлення та запобіжні заходи перед початком роботи:

(a) Будь ласка, використовуйте одноразові наконечники в процесі експерименту та змінюйте наконечники, коли поглинаєте інший реагент.

(b) Переконайтеся, що всі інструменти чисті.

(c) Зберігайте зразок тканини в замороженому стані.

(d) Підготовлений зразок слід відразу використовувати для аналізу.

8.2 Тканини тварин (курячі, свинячі тощо)

---- Гомогенізуйте зразок гомогенізатором;

---- Візьміть 2,0±0,05 г гомогенату в полістиролову центрифужну пробірку на 50 мл;додати 2 мл 0,2 М PB (рішення1), струсіть, щоб розчинити, а потім додайте 8 мл етилацетату та інтенсивно струшуйте протягом 3 хвилин;

---- Центрифуга для поділу: 3000 г / температура навколишнього середовища / 5 хв.

---- Перенесіть 4 мл надосадової органічної фази в скляну пробірку на 10 мл, висушіть на водяній бані при 50-60 ℃ під струменем азоту;

----Розчиніть сухий залишок 1 мл н-гексану, перемішайте протягом 30 секунд, щоб розчинити, а потім додайте 1 мл екстракційного розчину (рішення2), перемішуйте протягом 1 хв.центрифуга для поділу: 3000g / температура навколишнього середовища / 5 хв

----Видалити надосадову фазу н-гексану;візьміть 50 мкл водної фази субстрату для аналізу.

Коефіцієнт розведення: 1

8.2 Молоко

---- Візьміть 100 мкл зразка сирого молока, змішайте з 900 мкл екстракційного розчину (рішення2) і повністю перемішати.

----Візьміть 50 мкл готового розчину для аналізу.

Коефіцієнт розведення: 10

9. Процес аналізу

9.1 Повідомлення перед аналізом

9.1.1Переконайтеся, що всі реагенти та мікролунки мають кімнатну температуру (20-25 ℃).

9.1.2Поверніть усі решта реагентів до 2-8℃відразу після використання.

9.1.3Правильне промивання мікролунок є важливим етапом у процесі аналізу;це життєво важливий фактор для відтворюваності аналізу ELISA.

9.1.4 Авимкніть світло та накрийте мікролунки під час інкубації.

9.2 Етапи аналізу

9.2.1 Вийміть усі реагенти при кімнатній температурі (20-25 ℃) більше ніж на 30 хвилин, обережно струсіть перед використанням.

9.2.2 Вийміть необхідні мікролунки та негайно помістіть решту в мішок на блискавці при 2-8 ℃.

9.2.3 Перед використанням розведений промивний розчин слід нагріти до кімнатної температури.

9.2.4номер:Пронумеруйте кожну мікролунку, а всі стандарти та зразки повинні бути використані в двох примірниках.Запишіть положення стандартів і зразків.

9.2.5Add стандартний розчин/зразок і розчин антитіл: Додайте 50 мкл стандартного розчину ((комплект надається)) або підготовлений зразок у відповідні лунки.Додайте 50 мкл розчину антитіл (комплект надається).Обережно перемішайте, струшуючи планшет вручну, і інкубуйте протягом 30 хвилин при 37 ℃ під кришкою.

9.2.6мити: Обережно зніміть кришку, видаліть рідину з лунок і промийте мікролунки 250 мкл розведеного промивного розчину (рішення3) з інтервалом 10 с по 4-5 разів.Вбирайте залишки води абсорбуючим папером (залишки бульбашок повітря можна видалити невикористаним наконечником).

9.2.7Додайте ферментний кон'югат: Додайте 100 мл розчину кон'югату ферменту (комплект надається) в кожну лунку, обережно перемішайте та інкубуйте протягом 30 хвилин при 37 ℃ під кришкою.Повторіть крок прання ще раз.

9.2.8Забарвлення: Додайте 50 мкл розчину A(комплект надається) і 50 мкл розчину B(комплект надається) до кожної лунки.Обережно перемішайте та інкубуйте протягом 15 хвилин при 37 ℃ під кришкою.

9.2.9Виміряти: Додайте 50 мкл стоп-розчину (комплект надається) до кожної лунки.Обережно перемішайте та виміряйте абсорбцію при 450 нм (рекомендується вимірювати з подвійною довжиною хвилі 450/630 нм. Прочитайте результат протягом 5 хвилин після додавання стоп-розчину).

10. Результати

10.1 Відсоткове поглинання

Середні значення значень абсорбції, отримані для стандартів і зразків, діляться на значення абсорбції першого стандарту (нульовий стандарт) і множаться на 100%.Таким чином, нульовий стандарт дорівнює 100%, а значення абсорбції наводяться у відсотках.

B

Абсорбція (%) = —— ×100%

B0

B — стандарт абсорбції (або зразок)

B0 ——нульовий стандарт абсорбції

10.2 Стандартна крива

----Щоб намалювати стандартну криву: Візьміть значення поглинання стандартів як вісь y, напівлогарифмічне значення концентрації стандартного розчину тилозину (ppb) як вісь x.

----Концентрація тилозину в кожному зразку (ppb), яку можна прочитати з калібрувальної кривої, множиться на відповідний коефіцієнт розведення кожного наступного зразка, і отримується фактична концентрація зразка.

Зверніть увагу:

для аналізу даних розроблено спеціальне програмне забезпечення, яке надається за запитом.

11. Чуйність, точність і точність

Тест на чутливість:1,5ppb

Межа виявлення:

Тканини тварин………………………….……………1,5ppb Молоко…………………………………………….....…..15ppb Точність:

Тканини тварин…………………………………………80±15%

Молоко………………………………………..……….……80±10%

Точність:

Коефіцієнт варіації набору ІФА менше 10%.

12. Повідомлення

12.1 Середні значення значень абсорбції, отримані для стандартів і зразків, будуть зменшені, якщо реагенти і зразки не були доведені до кімнатної температури (20-25 ℃).

12.2 Не дозволяйте мікролункам висихати між кроками, щоб уникнути невдалої відтворюваності, і виконуйте наступний етап відразу після постукування тримача мікролунок.

12.3 Обережно струсіть кожен реагент перед використанням.

12.4 Тримайте шкіру подалі від стоп-розчину, оскільки він становить 0,5 MH₂SO₄рішення.

12.5 Не використовуйте прострочені комплекти.Не міняйте реагенти різних партій, інакше це знизить чутливість.

12.6 Зберігайте набори для ELISA при 2-8 ℃, не заморожуйте.Закрийте мікролункові планшети, уникайте прямого сонячного світла під час усіх інкубацій.Рекомендовано накривати мікропланшети.

12.7 Від розчину субстрату слід відмовитися, якщо він змінить колір.Реагенти можуть виявитися поганими, якщо значення абсорбції (450/630 нм) нульового стандарту менше 0,5 (A450 нм <0,5).

12.8 Реакція забарвлення повинна тривати 15 хвилин після додавання розчину A та розчину B. І ви можете продовжити діапазон часу інкубації до 20 хвилин або більше, якщо колір занадто світлий для визначення.Ніколи не перевищуйте 30 хвилин, навпаки, належним чином скорочуйте час інкубації.

12.9 Оптимальна температура реакції становить 37 ℃.Вища або нижча температура призведе до змін чутливості та значень поглинання.

13. Зберігання

Умови зберігання: 2-8 ℃.

Термін зберігання: 12 місяців.