toode

Konkurentsivõimeline ensüümi immuunanalüüsi komplekt tülosiini kvantitatiivseks analüüsiks

Lühike kirjeldus:

Tülosiin on makroliidantibiootikum, mida kasutatakse peamiselt antibakteriaalse ja mükoplasmavastase ainena.Kehtestatud on ranged jääkide piirnormid, kuna see ravim võib teatud rühmades põhjustada tõsiseid kõrvaltoimeid.

See komplekt on uus ELISA-tehnoloogial põhinev toode, mis on kiire, lihtne, täpne ja tundlik võrreldes tavaliste instrumentaalanalüüsidega ning vajab vaid 1,5 tundi ühe toimingu jaoks, mis võib oluliselt minimeerida töövigu ja töö intensiivsust.


Toote üksikasjad

Tootesildid

Konkurentsivõimeline ensüümi immuunanalüüsi komplekt

Kvantitatiivne analüüsTülosiin


1. Taust

Tülosiinon makroliidantibiootikum, mida kasutatakse peamiselt antibakteriaalse ja mükoplasmavastase ainena.Kehtestatud on ranged jääkide piirnormid, kuna see ravim võib teatud rühmades põhjustada tõsiseid kõrvaltoimeid.

See komplekt on uus ELISA-tehnoloogial põhinev toode, mis on kiire, lihtne, täpne ja tundlik võrreldes tavaliste instrumentaalanalüüsidega ning vajab vaid 1,5 tundi ühe toimingu jaoks, mis võib oluliselt minimeerida töövigu ja töö intensiivsust.

2. Testimise põhimõte

See komplekt põhineb kaudselt konkureerival ELISA tehnoloogial.Mikrotiitri süvendid on kaetud sidestusantigeeniga.Tülosiini jääk proovis konkureerib mikrotiiterplaadile kaetud antigeeniga antikeha pärast.Pärast ensüümiga märgistatud anti-antikeha lisamist kasutatakse värvi näitamiseks TMB substraati.Proovi neeldumine on negatiivses seoses tülosiini jäägiga selles, pärast võrdlust standardkõveraga, korrutatuna lahjendusteguriga, saab tülosiini jäägi koguse proovis arvutada.

3. Rakendused

Seda komplekti saab kasutada tülosiini jääkide kvantitatiivseks ja kvalitatiivseks analüüsiks loomsetes kudedes (kana, sealiha, part) ning piimas, mees, munas jne.

4. Ristreaktsioonid

Tülosiin…………………………………………………..100%

Tilmikosiin…………………………………………………<2%

5. Vajalikud materjalid

5.1 Varustus:

----Mikrotiiterplaadi spektrofotomeeter (450nm/630nm)

----Rotatsioonaurusti või lämmastikukuivatusinstrumendid

----homogenisaator

----Saiker

---- Tsentrifuug

----Analüütiline kaal (induktiivsus: 0,01g)

---- Gradueeritud pipett: 10ml

----Pipeti kummist pirn

----Mõõtekolb: 10ml

----Polüstüreenist tsentrifuugitorud: 50ml

----Mikropipetid: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-multipipett

5.2 Reaktiivid:

----Naatriumhüdroksiid (NaOH, AR)

---- Naatriumvesinikkarbonaat (NaHCO3,AR)

---- Naatriumkarbonaat (NaCO3, AR)

---- trikloroäädikhape (AR)

---- atsetonitriil (AR)

---- etüülatsetaat (AR)

┅┅n-heksaan (AR)

----Deioniseeritud vesi

6. Komplekti komponendid

l 96 süvendiga mikrotiiterplaat, mis on kaetud antigeeniga

l Standardlahused (5 pudelit, 1 ml/pudel)

0 ppb, 0,5 ppb, 1,5 ppb, 4,5 ppb, 13,5 ppb

l Spiking standardkontroll: (1ml/pudel)1 ppm

l Ensüümi konjugaat 1ml……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

l Antikeha lahus 7ml………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

l Lahus A 7 ml……………………….….……valge kork

l Lahus B 7ml………………………………..punane kork

l Stop-lahus 7ml.………………………….kollane kork

l 20× kontsentreeritud pesulahus 40ml

……………………………………..…läbipaistev kork

l 4x kontsentreeritud ekstraktsioonilahus 50ml

……………………………………………….sinine kork

7. Reaktiivide ettevalmistamine:

Lahendus 1:0,1 mol/l NaOH lahus

Kaaluge 0,4 g NaOH 100 ml deioniseeritud vee kohta ja segage täielikult.

Lahendus 2: 1 mol/l NaOH lahus

Kaaluge 4 g NaOH 100 ml deioniseeritud vee kohta ja segage täielikult.

Lahendus 3: Karbonaatpuhversool

Lahendus1: 0,2M PB

Lahustage 51,6 g Na2HPO4· 12H2O, 8,7 g NaH2PO4· 2H2O deioniseeritud veega ja lahjendada 1000 ml-ni.

Lahendus2: ekstraheerimislahus

Lahjendage 2x kontsentreeritud ekstraktsioonilahus deioniseeritud veega mahusuhtes 1:1 (nt 10ml 2× ekstraktsioonilahust + 10ml deioniseeritud vett), mida kasutatakse proovide ekstraheerimiseks,seda lahust võib hoida temperatuuril 4 ℃ 1 kuu.

Lahendus3: pesulahus

Lahjendage 20-kordne kontsentreeritud pesulahus deioniseeritud veega mahusuhtes 1:19 (nt 5ml 20× pesulahust + 95ml deioniseeritud vett), mida kasutatakse plaatide pesemiseks.Seda lahust võib hoida temperatuuril 4 ℃ 1 kuu.

8. Proovide ettevalmistused

8.1 Märkus ja ettevaatusabinõud enne kasutamist:

(a) Palun kasutage katse käigus ühekordseid otsikuid ja vahetage otsikuid, kui neelavad erinevat reaktiivi.

(b) Veenduge, et kõik instrumendid on puhtad.

c) Hoidke koeproovi sügavkülmas.

d) Ettevalmistatud proovi tuleks analüüsiks kasutada kohe.

8.2 Loomkude (kana, sealiha jne)

----Homogeniseerige proov homogenisaatoriga;

----Võtke 2,0±0,05 g homogenaati 50 ml polüstüreenist tsentrifuugi katsutisse;lisage 2 ml 0,2 M PB (lahendus1), loksutage lahustumiseni, seejärel lisage 8 ml etüülatsetaati ja loksutage tugevalt 3 minutit;

----Tsentrifuug eraldamiseks: 3000g / ümbritseva õhu temperatuur / 5 min.

---- Viige 4 ml supernatanti orgaanilist faasi 10 ml klaastorusse, kuivatage 50–60 ℃ veevannis lämmastiku gaasivoolu all;

---- Lahustage kuiv jääk 1 ml n-heksaanis, loksutage 30 sekundit, et lahustuda, ja seejärel lisage 1 ml ekstraheerimislahust (lahendus2), keerista 1 min.tsentrifuug eraldamiseks: 3000 g / ümbritseva õhu temperatuur / 5 min

----Eemaldage supernatant n-heksaani faas;võtta testimiseks 50 μl substraadi vesifaasi.

 

Lahjendustegur: 1

 

8.2 Piim

----Võtke 100 μl toorpiima proovi, segage 900 μl ekstraheerimislahusega (lahendus2) ja segage täielikult.

----Võtke analüüsiks 50 μl valmistatud lahust.

 

Lahjendustegur: 10

 

9. Analüüsi protsess

9.1 Märkus enne analüüsi

9.1.1Veenduge, et kõik reaktiivid ja mikrosüvendid oleksid toatemperatuuril (20-25 ℃).

9.1.2Pange kõik ülejäänud reaktiivid tagasi 2-8kohe pärast kasutamist.

9.1.3Mikrosüvendite õige pesemine on analüüsiprotsessi oluline etapp;see on ELISA analüüsi reprodutseeritavuse oluline tegur.

9.1.4 Atühjendage valgusti ja katke mikrosüvendid inkubeerimise ajal.

9.2 Testi etapid

9.2.1 Võtke kõik reaktiivid välja toatemperatuuril (20-25 ℃) kauemaks kui 30 minutiks, loksutage enne kasutamist õrnalt.

9.2.2 Võtke vajalikud mikrosüvendid välja ja pange ülejäänud kohe tagasi lukuga kotti temperatuuril 2–8 ℃.

9.2.3 Lahjendatud pesulahust tuleb enne kasutamist soojendada toatemperatuurini.

9.2.4Number:Nummerdatud iga mikrosüvendi positsioonid ning kõik standardid ja proovid tuleks käitada kahes eksemplaris.Salvestage standardid ja näidiste asukohad.

9.2.5Add standardlahus/proov ja antikehalahus: Lisage 50 µl standardlahust ((komplekt kaasas)) või valmistatud proovi vastavatesse süvenditesse.Lisage 50 µl antikeha lahust (komplekt kaasas).Segage õrnalt plaati käsitsi loksutades ja inkubeerige kaanega 30 minutit temperatuuril 37 ℃.

9.2.6Pesta: Eemaldage õrnalt kate ja puhastage vedelik süvenditest ning loputage mikrosüvendeid 250 µl lahjendatud pesulahusega (lahendus3) intervalliga 10s 4-5 korda.Absorbeerige jääkvesi imava paberiga (ülejäänud õhumulli saab eemaldada kasutamata otsikuga).

9.2.7Lisage ensüümi konjugaat: Lisage 100 ml ensüümi konjugaadi lahust (komplekt kaasas) igasse süvendisse, segage õrnalt ja inkubeerige kaanega 30 minutit temperatuuril 37 ℃.Korrake pesemisetappi uuesti.

9.2.8Värvimine: Lisage 50 µl lahust A(komplekt kaasas) ja 50 µl lahust B(komplekt kaasas) igasse kaevu.Segage õrnalt ja inkubeerige kaanega 15 minutit temperatuuril 37 ℃.

9.2.9Mõõtke: Lisage 50 µl stopplahust (komplekt kaasas) igasse kaevu.Segage õrnalt ja mõõtke neeldumist 450 nm juures (soovitatav on mõõta kahe lainepikkusega 450/630 nm. Lugege tulemust 5 minuti jooksul pärast stopplahuse lisamist).

10. Tulemused

10.1 Neeldumise protsent

Standardite ja proovide jaoks saadud neeldumisväärtuste keskmised väärtused jagatakse esimese standardi neeldumisväärtusega (nullstandard ) ja korrutatakse 100%.Seega muudetakse nullstandardiks 100% ja neeldumisväärtused on esitatud protsentides.

B

Neelduvus (%) = —— × 100%

B0

B — neeldumisstandard (või proov)

B0 — — neeldumise nullstandard

10.2 Standardkõver

----Standardkõvera joonistamiseks: võtke y-teljeks standardite neeldumisväärtus, x-teljeks tülosiini standardlahuse kontsentratsiooni poollogaritmiline väärtus (ppb).

----Iga proovi tülosiini kontsentratsioon (ppb), mida saab lugeda kalibreerimiskõveralt, korrutatakse iga järgneva proovi vastava lahjendusteguriga ja saadakse proovi tegelik kontsentratsioon.

Palun pane tähele:

Andmete analüüsiks on välja töötatud spetsiaalne tarkvara, mida saab soovi korral pakkuda.

11. Tundlikkus, täpsus ja täpsus

Testi tundlikkus:1,5 ppb

Tuvastamispiir:

Loomne kude…………………………………………1,5 ppb Piim ……………………………………………………..15ppb Täpsus:

Loomne kude…………………………………………80±15%

Piim…………………………………………………………80±10%

Täpsus:

ELISA komplekti variatsioonikoefitsient on alla 10%.

12. Märkus

12.1 Standardite ja proovide jaoks saadud neeldumisväärtuste keskmisi väärtusi vähendatakse, kui reaktiive ja proove ei ole reguleeritud toatemperatuurile (20-25 ℃).

12.2 Ärge laske mikrosüvenditel etappide vahel kuivada, et vältida ebaõnnestunud reprodutseeritavust, ja kasutage järgmist sammu kohe pärast mikrosüvendi hoidiku koputamist.

12.3 Enne kasutamist loksutage iga reaktiivi õrnalt.

12.4 Hoidke oma nahka stopplahusest eemal, sest see on 0,5MH2SO4lahendus.

12.5 Ärge kasutage aegunud komplekte.Ärge vahetage erinevate partiide reaktiive, vastasel juhul väheneb tundlikkus.

12.6 Hoidke ELISA komplekte temperatuuril 2–8 ℃, ärge külmutage.Sulgege ülejäänud mikrosüvendiplaadid. Vältige otsest päikesevalgust kõigi inkubatsioonide ajal.Mikrotiiterplaadid on soovitatav katta.

12.7 Aluspinna lahusest tuleb loobuda, kui see värvub.Reaktiivid võivad muutuda halvaks, kui nullstandardi neeldumisväärtus (450/630 nm) on väiksem kui 0,5 (A450 nm<0,5).

12.8 Värvimisreaktsioon vajab 15 minutit pärast lahuse A ja lahuse B lisamist. Kui värvus on määramiseks liiga hele, võite inkubatsiooniaega pikendada 20 minutini või kauemaks.Ärge kunagi ületage 30 minutit, vastupidi, lühendage inkubatsiooniaega korralikult.

12.9 Optimaalne reaktsioonitemperatuur on 37 ℃.Kõrgem või madalam temperatuur põhjustab tundlikkuse ja neeldumise väärtuste muutusi.

13. Ladustamine

Säilitustingimused: 2-8℃.

Säilitamisaeg: 12 kuud.

 


  • Eelmine:
  • Järgmine:

  • Kirjutage oma sõnum siia ja saatke see meile