önüm

1. Maglumat

Tylosinesasan antibakterial we mikoplazma hökmünde ulanylýan makrolid antibiotikdir.Gaty MRL döredilmedi, sebäbi bu derman käbir toparlarda çynlakaý täsir edip biler.

Bu toplum, ELISA tehnologiýasyna esaslanýan täze önüm, umumy gural derňewi bilen deňeşdirilende çalt, aňsat, takyk we duýgur we bir amalda bary-ýogy 1,5 sagat wagt gerek, bu iş ýalňyşlygyny we iş güýjüni ep-esli azaldyp biler.

2. Synag ýörelgesi

Bu toplum gytaklaýyn bäsdeşlik edýän ELISA tehnologiýasyna esaslanýar.Mikrotiter guýulary antigen bilen birleşdirilen.Mysaldaky tylosiniň galyndysy antikor üçin mikrotiter plastinkasynda örtülen antigen bilen bäsleşýär.Antikorlara garşy ferment goşulandan soň, reňk görkezmek üçin TMB substraty ulanylýar.Nusganyň siňdirilmegi, içindäki tilosiniň ýaşamagy bilen negatiw baglanyşyklydyr, adaty egrilik bilen deňeşdirilende, eritme faktoryna köpeldilende, nusgadaky tylosiniň galyndy mukdary hasaplanyp bilner.

3. Goýmalar

Bu toplum haýwan dokumalarynda (towuk, doňuz eti, ördek) we süýt, bal, ýumurtga we ş.m. tilosiniň galyndysyny mukdar we hil taýdan seljermekde ulanylyp bilner.

4. Kesgitli reaksiýalar

Tylosin ………………………………… ..100%

Tilmikosin ………………………………………… <2%

5. Zerur materiallar

5.1 Enjamlar:

---- Mikrotiter plastinka spektrofotometr (450nm / 630nm)

---- Aýlanýan bugarýan ýa-da azot guradyjy gurallar

---- gomogenizator

---- Şaker

---- Merkezden gaçyryş

---- Analitik deňagramlylyk (induksion: 0.01g)

---- Gutaran turba: 10ml

---- Kauçuk turbalar

---- Volumetriki çüýşe: 10ml

---- Polistirol sentrifuga turbalary: 50ml

---- Mikropipetler: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-köpugurly

5.2 Reagentler:

----Natriý gidroksidi (NaOH, AR)

---- Natriý bikarbonat (NaHCO)_3,AR)

---- Natriý karbonat (NaCO)₃, AR)

---- Trihloroasetik kislotasy (AR)

---- Asetonitril (AR)

---- Etil asetat (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

---- Deionlaşdyrylan suw

6. Kit komponentleri

l Antigen bilen örtülen 96 guýy bilen mikrotiter plastinka

l Adaty çözgütler (5 çüýşe, 1ml / çüýşe)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l Göçme standart dolandyryş: (1ml / çüýşe)1ppm

l Ferment fermenti 1ml …………… ..… ..… gyzyl gapak

l Antikor ergini 7ml ………………. …… ýaşyl gapak

l 7ml çözgüt ……………………. …… ak gapak

l B çözgüdi B 7ml ... …………………………… .. gapak

l 7ml çözgüdi bes ediň. ………………. ………

l 20 × konsentrirlenen ýuwujy ergin 40ml

………………………………… ..… aç-açan gapak

l 4 × konsentrirlenen çykarmak ergini 50ml

………………………………………

7. Reagentleri taýýarlamak:

Çözgüt 1:0.1mol / L NaOH ergini

Agramy 0,4g NaOH-dan 100ml deionizirlenen suw we doly garmaly.

Çözgüt 2: 1mol / L NaOH ergini

Agramy 4g NaOH-dan 100ml deionizirlenen suw we doly garmaly.

Çözgüt 3: Karbonat bufer duzy

Çözgüt1: 0.2M PB

51,6g Na eritmeli₂HPO₄· 12H₂O, 8,7g NaH₂PO₄· 2H₂O deionizirlenen suw bilen we 1000ml eritmeli.

Çözgüt2: Gazyp almak çözgüdi

2 × konsentrirlenen çykaryş erginini 1: 1 ses derejesinde deionizirlenen suw bilen garyşdyryň (meselem 10ml 2 × çykarmak ergini + 10ml deionizirlenen suwnusga almak üçin ulanylar,bu ergini 4 1 1 aý saklap bolýar.

Çözgüt3: ergini ýuwuň

20 × konsentrirlenen ýuwujy ergini 1:19 ses derejesinde deionizirlenen suw bilen garyşdyryň (meselem 5ml 20 × ýuwujy ergin + 95ml deionizirlenen suwtabaklary ýuwmak üçin ulanylar.Bu ergini 4 1 1 aý saklap bolýar.

8. Taýýarlyk nusgalary

8.1 Işlemezden ozal duýduryş we seresaplyklar:

(a) Synag wagtynda bir gezeklik maslahatlary ulanyň we dürli reagenti siňdireniňizde maslahatlary üýtgediň.

(b) instrumentshli gurallaryň arassadygyna göz ýetiriň.

c) dokumanyň nusgasyny doňduryň.

d) Taýýarlanan nusga birbada analiz etmek üçin ulanylmaly.

8.2 Haýwan dokumasy (towuk, doňuz eti we ş.m.)

---- Nusgany gomogenizator bilen birleşdiriň;

---- 50ml polistirol sentrifuga turbasyna 2,0 ± 0.05g gomogenaty alyň;2ml 0,2M PB goşuň (çözgüt1), eremek üçin silkip, soňra 8ml etil asetat goşuň we 3 minut üçin gaty silkäň;

---- Aýralyk üçin sentrifuga: 3000g / daşky gurşaw temperaturasy / 5min.

---- 4ml adatdan daşary organiki fazany 10ml aýna turba geçiriň, azot gaz akymynyň aşagynda 50-60 ℃ suw wannasy bilen guradyň;

---- Gury galyndylary 1ml n-heksan, eriş üçin 30-njy worteks bilen eritiň we soňra 1ml çykarmak ergini goşuň (çözgüt2), worteks 1 minut.bölmek üçin sentrifuga: 3000g / daşky gurşaw temperaturasy / 5min

---- Adatdan daşary n-heksan fazasyny aýyryň;Derňew üçin substratyň suw fazasynyň 50μlini alyň.

Erginleme faktory: 1

8.2 Süýt

---- 100μl çig süýt nusgasyny alyň, 900μl çykarmak ergini bilen garmaly (çözgüt2) we doly garmaly.

---- Derňew üçin taýýarlanan erginiň 50μlini alyň.

Erginleme faktory: 10

9. Derňew prosesi

9.1 Derňewden öň duýduryş beriň

9.1.1Rehli reagentleriň we mikrotolkunlaryň hemmesiniň otag temperaturasynda bolandygyna göz ýetiriň (20-25 ℃).

9.1.2Galan reagentleriň hemmesini 2-8-e gaýtaryň℃ulanylandan soň derrew.

9.1.3Mikrotolkunlary dogry ýuwmak, barlag işinde möhüm ädimdir;ELISA derňewiniň köpelmegi üçin möhüm faktor.

9.1.4 A.ýagtylygy boşadyň we inkubasiýa wagtynda mikrotolkunlary ýapyň.

9.2 Derňew ädimleri

9.2.1 Reagentleri otag temperaturasynda (20-25 ℃) 30 minutdan gowrak çykaryň, ulanmazdan ozal ýuwaşja silkäň.

9.2.2 Gerekli mikrotolkunlary alyň we galanlaryny derrew 2-8 at aralygynda zip-gulp haltasyna gaýtaryň.

9.2.3 Suwuklandyrylan ýuwujy ergin, ulanmazdan ozal otag temperaturasynda bolmagy üçin täzeden işlenmeli.

9.2.4Belgi:Her mikrotolkun pozisiýasyny sanap, ähli standartlar we nusgalar iki nusgada işlemeli.Standartlary we nusgalaryň ýagdaýyny ýazga alyň.

9.2.5Add standart çözgüt / nusga we antikor ergini: 50µl standart ergin goşuň ((toplumy üpjün edildi)) ýa-da degişli guýulara taýýarlanan nusga.Antikor ergininiň 50µl goşuň (toplumy üpjün edildi).Tabagy el bilen silkip, ýuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 30 37 37 minut inkubasiýa etmeli.

9.2.6Washuwuň: Gapagy ýuwaşlyk bilen aýyryň we suwuklygy guýulardan arassalaň we mikrotolkunlary 250µl suwuklandyrylan ýuwujy ergin bilen ýuwuň (çözgüt3) 10-5 aralykda 4-5 gezek.Galyndy suwy siňdiriji kagyz bilen siňdiriň (galan howa köpügi ulanylmadyk uç bilen ýok edilip bilner).

9.2.7Ferment konýugatyny goşuň: 100ml ferment konýugat erginini goşuň (toplumy üpjün edildi) her guýa ýuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 37 at 30 minut inkubasiýa etmeli.Washuwmak ädimini gaýtalaň.

9.2.8Reňk: A 50µl ergin goşuň (toplumy üpjün edildi) we 50µl B ergini (toplumy üpjün edildiher guýa.Entlyuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 37 at 15 minut inkubasiýa etmeli.

9.2.9Ölçe: Durmak çözgüdiniň 50µl goşuň (toplumy üpjün edildiher guýa.Entlyuwaşlyk bilen garyşdyryň we sorulmagy 450nm-de ölçäň (450/630nm goşa tolkun uzynlygy bilen ölçemek maslahat berilýär. Durmak çözgüdini goşanyňyzdan soň 5 minutyň içinde netijäni okaň).

10. Netijeler

10.1 göterimiň siňdirilmegi

Standartlar we nusgalar üçin alnan siňdiriş bahalarynyň ortaça bahalary birinji standartyň (nol standart) siňdiriş bahasy bilen bölünýär we 100% köpelýär.Şeýlelik bilen nol standart 100% deňdir we siňdiriş bahalary göterimlerde getirilýär.

B

Absorbsiýa (%) = —— × 100%

B0

B ——absorbance standarty (ýa-da nusga)

B0 —— sorulma nol standart

10.2 Adaty egrilik

---- Adaty egrini çyzmak üçin: ülňüleriň siňdiriş bahasyny y oky, tilosin standartlarynyň ergininiň (ppb) konsentrasiýasynyň ýarym logarifmini rentgen oky hökmünde alyň.

---- Kalibrleme egrisinden okap boljak her nusganyň (ppb) tylosin konsentrasiýasy, her nusganyň degişli Dilution faktory bilen köpelýär we nusganyň hakyky konsentrasiýasy alynýar.

Üns beriň:

haýyşy boýunça üpjün edilip bilinjek maglumat derňewi üçin ýörite programma üpjünçiligi işlenip düzüldi.

11. Duýgurlyk, takyklyk we takyklyk

Synag duýgurlygy:1.5ppb

Ectionüze çykarmak çägi:

Haýwan dokumasy …………………………. …………… 1.5ppb Süýt ……………………………………… .....… ..15ppb Takyklyk:

Haýwan dokumasy ………………………… ... ………… 80 ± 15%

Süýt ………………………………… .. ………. …… 80 ± 10%

Takyklyk:

ELISA toplumynyň üýtgeýiş koeffisiýenti 10% -den az.

12. Üns beriň

12.1 Reagentler we nusgalar otag temperaturasyna (20-25 ℃) kadalaşdyrylmadyk bolsa, ülňüler we nusgalar üçin alnan siňdiriş bahalarynyň ortaça bahalary azalýar.

12.2 Üstünlikli köpelmezlik üçin ädimleriň arasynda mikrotolkunlaryň guramagyna ýol bermäň we mikrotolkunlaryň eýesine degeniňizden soň indiki ädimiňizi işlediň.

12.3 Ulanylmazdan ozal her reagenti ýuwaşja silkäň.

12.4 Deriňizi saklaýyş ergininden uzakda saklaň, sebäbi ol 0,5MH₂SO₄çözgüt.

12.5 Kitaplary köne ulanmaň.Dürli partiýalaryň reagentlerini çalyşmaň, ýogsam duýgurlygy peselder.

12.6 ELISA toplumlaryny 2-8 at derejesinde saklaň, doňmaň.Dynç alýan mikrotolkun plitalaryny möhürläň, ähli inkubasiýa wagtynda göni gün şöhlesinden gaça duruň.Mikrotiter plitalaryny ýapmak maslahat berilýär.

12.7 Substrat ergini reňk öwürse terk edilmelidir.Nol standartyň siňdiriş bahasy (450 / 630nm) 0,5 (A450nm <0.5) -den pes bolsa, reagentler erbet bolup biler.

12.8 Reňkleme reaksiýasy A we B ergini goşulandan soň 15 minut gerek, we reňk kesgitlenip bilinmeýän bolsa inkubasiýa wagtyny 20min ýa-da ondanam köpeldip bilersiňiz.Hiç haçan 30 minutdan geçmäň, tersine, inkubasiýa wagtyny dogry gysgaldyň.

12.9 Iň amatly reaksiýa temperaturasy 37 ℃.Higherokary ýa-da pes temperatura duýgurlygyň we siňdiriş bahalarynyň üýtgemegine getirer.

13. Saklamak

Saklamagyň ýagdaýy: 2-8 ℃.

Saklamak möhleti: 12 aý.