ផលិតផល

1. ផ្ទៃខាងក្រោយ

ទីឡូស៊ីនគឺជាអង់ទីប៊ីយ៉ូទិក macrolide ដែលត្រូវបានអនុវត្តជាចម្បងជាអង់ទីគ័រ និងប្រឆាំងនឹង mycoplasma ។MRLs តឹងរ៉ឹងត្រូវបានបង្កើតឡើងចាប់តាំងពីថ្នាំនេះអាចនាំឱ្យមានផលប៉ះពាល់ធ្ងន់ធ្ងរនៅក្នុងក្រុមមួយចំនួន។

ឧបករណ៍នេះគឺជាផលិតផលថ្មីដែលផ្អែកលើបច្ចេកវិទ្យា ELISA ដែលមានល្បឿនលឿន ងាយស្រួល ត្រឹមត្រូវ និងរសើបបើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងការវិភាគឧបករណ៍ទូទៅ ហើយត្រូវការត្រឹមតែ 1.5 ម៉ោងក្នុងប្រតិបត្តិការតែមួយ វាអាចកាត់បន្ថយកំហុសប្រតិបត្តិការ និងអាំងតង់ស៊ីតេការងារបានយ៉ាងច្រើន។

2. គោលការណ៍សាកល្បង

ឧបករណ៍នេះផ្អែកលើបច្ចេកវិទ្យា ELISA ប្រកួតប្រជែងដោយប្រយោល។អណ្តូង microtiter ត្រូវបានស្រោបដោយ coupling antigen ។សំណល់ Tylosin នៅក្នុងគំរូប្រកួតប្រជែងជាមួយអង់ទីហ្សែនដែលស្រោបនៅលើបន្ទះមីក្រូទីតឺសម្រាប់អង្គបដិបក្ខ។បន្ទាប់ពីការបន្ថែមអង់ស៊ីមដែលមានស្លាកប្រឆាំងនឹងអង្គបដិប្រាណ ស្រទាប់ខាងក្រោម TMB ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្ហាញពណ៌។ការស្រូបយកសំណាកគឺទាក់ទងអវិជ្ជមានទៅនឹងសារធាតុ tylosin រស់នៅក្នុងវា បន្ទាប់ពីប្រៀបធៀបជាមួយខ្សែកោងស្តង់ដារ គុណនឹងកត្តារលាយ បរិមាណសំណល់ tylosin នៅក្នុងគំរូអាចត្រូវបានគណនា។

3. កម្មវិធី

ឧបករណ៍នេះអាចត្រូវបានប្រើក្នុងការវិភាគបរិមាណ និងគុណភាពនៃសំណល់ tylosin នៅក្នុងជាលិកាសត្វ (សាច់មាន់ សាច់ជ្រូក ទា) និងទឹកដោះគោ ទឹកឃ្មុំ ស៊ុត។ល។

4. ប្រតិកម្មឆ្លង

ទីឡូស៊ីន………………………………………………..100%

Tilmicosin………………………………………………<2%

5. សម្ភារៈដែលត្រូវការ

5.1 ឧបករណ៍៖

---- ឧបករណ៍វាស់ស្ទង់កម្រិតមីក្រូធីត (450nm / 630nm)

---- ឧបករណ៍រំហួតរ៉ូតារី ឬឧបករណ៍សម្ងួតអាសូត

---- ឧបករណ៍លាយ

---- ទឹកក្រឡុក

---- centrifuge

---- សមតុល្យវិភាគ (អាំងឌុចស្យុង៖ ០.០១ ក្រាម)

---- បំពង់បញ្ចប់ការសិក្សា៖ 10ml

---- អំពូលកៅស៊ូ

---- ចំណុះ 10ml

---- បំពង់ centrifuge polystyrene: 50ml

---- Micropipettes: 20-200ml, 100-1000ml

250 មីលីលីត្រ - ពហុភី

5.2 សារធាតុប្រតិកម្ម៖

----សូដ្យូមអ៊ីដ្រូសែន (NaOH, AR)

---- សូដ្យូមប៊ីកាបូណាត (NaHCO_3,AR)

---- សូដ្យូមកាបូន (NaCO₃, AR)

---- អាស៊ីត Trichloroacetic (AR)

---- អាសេតូនីទ្រីល (AR)

---- អេទីលអាសេតាត (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

---- ទឹកដេអ៊ីយ៉ូដ

6. ធាតុផ្សំនៃកញ្ចប់

លីត្រ ចាន Microtiter ដែលមានអណ្តូង 96 ស្រោបដោយអង់ទីហ្សែន

l ដំណោះស្រាយស្តង់ដារ (5 ដប 1ml / ដប)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l ការត្រួតពិនិត្យស្តង់ដារ Spiking: (1ml / ដប)1 ppm

l អង់ស៊ីម conjugate 1ml ………………..…..… មួកក្រហម

l ដំណោះស្រាយអង្គបដិប្រាណ 7ml ……………….…… មួកពណ៌បៃតង

l ដំណោះស្រាយ A 7ml ……………………….……… មួកពណ៌ស

l ដំណោះស្រាយ B 7ml …………………………….. មួកក្រហម

l បញ្ឈប់ដំណោះស្រាយ 7ml.……………………….មួកពណ៌លឿង

លីត្រ 20 × ដំណោះស្រាយលាងសម្អាត 40ml

………………………………………..… មួកថ្លា

លីត្រ 4 × ដំណោះស្រាយចម្រាញ់ចម្រាញ់ 50ml

……………………………………………………. មួកខៀវ

7. ការរៀបចំសារធាតុ Reagents៖

ដំណោះស្រាយ 1:ដំណោះស្រាយ 0.1mol/L NaOH

ថ្លឹង 0.4g NaOH ទៅ 100ml ទឹក deionized ហើយលាយទាំងស្រុង។

ដំណោះស្រាយ 2: 1mol/L ដំណោះស្រាយ NaOH

ថ្លឹង 4g NaOH ទៅ 100ml ទឹក deionized ហើយលាយទាំងស្រុង។

ដំណោះស្រាយ 3៖ អំបិលបណ្ដោះអាសន្នកាបូន

ដំណោះស្រាយ1: 0.2M PB

រំលាយ 51,6 ក្រាមនៃ Na₂HPO₄· 12 ម៉ោង₂O, 8.7 ក្រាមនៃ NaH₂PO₄· 2 ហ₂O ជាមួយទឹក deionized និងពនឺដល់ 1000ml ។

ដំណោះស្រាយ2: ដំណោះស្រាយស្រង់ចេញ

ពនលាយសូលុយស្យុងចម្រាញ់ចម្រាញ់ 2× ជាមួយទឹក deionized ក្នុងសមាមាត្របរិមាណ 1:1 (ឧទាហរណ៍ 10ml នៃដំណោះស្រាយ 2 × ស្រង់ចេញ + 10ml នៃទឹក deionized) ដែលនឹងត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការទាញយកគំរូដំណោះ​ស្រាយ​នេះ​អាច​រក្សា​ទុក​នៅ​សីតុណ្ហភាព 4 ℃​រយៈពេល 1 ខែ.

ដំណោះស្រាយ3: លាងសម្អាតដំណោះស្រាយ

ពនឺ 20 × ដំណោះស្រាយលាងសម្អាតជាមួយនឹងទឹក deionized ក្នុងសមាមាត្របរិមាណ 1:19 (ឧទាហរណ៍ 5ml នៃដំណោះស្រាយ 20 × លាងសមាត + 95ml នៃទឹក deionized) ដែលនឹងត្រូវប្រើសម្រាប់លាងចាន។ដំណោះ​ស្រាយ​នេះ​អាច​ត្រូវ​បាន​រក្សា​ទុក​នៅ​សីតុណ្ហភាព 4 ℃​រយៈពេល 1 ខែ.

8. ការរៀបចំគំរូ

8.1 ការជូនដំណឹង និងការប្រុងប្រយ័ត្នមុនពេលដំណើរការ៖

(ក) សូមប្រើគន្លឹះមួយដងក្នុងដំណើរការពិសោធន៍ ហើយផ្លាស់ប្តូរគន្លឹះនៅពេលស្រូបយកសារធាតុផ្សេងៗ។

(ខ) ត្រូវប្រាកដថាឧបករណ៍ទាំងអស់ស្អាត។

(គ) ទុកសំណាកជាលិកាក្នុងទូទឹកកក។

(ឃ) គំរូដែលបានរៀបចំគួរតែត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគក្នុងពេលតែមួយ។

8.2 ជាលិកាសត្វ (សាច់មាន់សាច់ជ្រូកជាដើម)

---- ធ្វើឱ្យសំណាកដូចគ្នាជាមួយ homogenizer;

---- យក 2.0±0.05g នៃ homogenate ចូលទៅក្នុងបំពង់ centrifuge polystyrene 50ml;បន្ថែម 2ml នៃ 0.2M PB (ដំណោះស្រាយ1) អ្រងួនឱ្យរលាយហើយបន្ទាប់មកបន្ថែម 8ml នៃ ethyl acetate និងអ្រងួនយ៉ាងខ្លាំងក្លាសម្រាប់ 3 នាទី;

---- centrifuge សម្រាប់បំបែក: 3000g / សីតុណ្ហភាពព័ទ្ធជុំវិញ / 5 នាទី។

---- ផ្ទេរ 4ml នៃដំណាក់កាលសរីរាង្គ supernatant ចូលទៅក្នុងបំពង់កែវ 10ml ស្ងួតជាមួយនឹងទឹក 50-60 ℃ នៅក្រោមស្ទ្រីមឧស្ម័នអាសូត;

---- រំលាយសំណល់ស្ងួតជាមួយ 1ml នៃ n-hexane, vortex សម្រាប់ 30s ដើម្បីរំលាយហើយបន្ទាប់មកបន្ថែម 1ml នៃដំណោះស្រាយស្រង់ចេញ (ដំណោះស្រាយ2) vortex សម្រាប់ 1 នាទី។centrifuge សម្រាប់បំបែក: 3000g / សីតុណ្ហភាពព័ទ្ធជុំវិញ / 5 នាទី។

---- ដកដំណាក់កាល supernatant n-hexane;យក 50μl នៃដំណាក់កាល aqueous ស្រទាប់ខាងក្រោមសម្រាប់ការវិភាគ។

កត្តារំលាយ៖ ១

8.2 ទឹកដោះគោ

---- យកគំរូទឹកដោះគោឆៅ 100μl លាយជាមួយ 900μl នៃដំណោះស្រាយស្រង់ចេញ (ដំណោះស្រាយ2) និងលាយទាំងស្រុង។

---- យក 50μl នៃដំណោះស្រាយដែលបានរៀបចំសម្រាប់ការវិភាគ។

កត្តារំលាយ៖ ១០

9. ដំណើរការវិភាគ

9.1 សេចក្តីជូនដំណឹងមុនពេលធ្វើតេស្ត

៩.១.១ត្រូវប្រាកដថាសារធាតុ reagents និង microwells ទាំងអស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។

៩.១.២ត្រឡប់សារធាតុដែលនៅសេសសល់ទាំងអស់ទៅ 2-8℃ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើ។

៩.១.៣ការលាងសម្អាត microwells ឱ្យបានត្រឹមត្រូវគឺជាជំហានសំខាន់មួយនៅក្នុងដំណើរការនៃការធ្វើតេស្ត។វាជាកត្តាសំខាន់ក្នុងការផលិតឡើងវិញនៃការវិភាគ ELISA ។

៩.១.៤ កទុកចោលពន្លឺ និងគ្រប microwells កំឡុងពេលភ្ញាស់។

9.2 ជំហាននៃការវិភាគ

9.2.1 យកសារធាតុប្រតិកម្មទាំងអស់ចេញនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃) លើសពី 30 នាទី អ្រងួនថ្នមៗមុនពេលប្រើ។

9.2.2 យក microwells ដែលត្រូវការចេញ ហើយប្រគល់អ្វីដែលនៅសល់ទៅក្នុងថង់ zip-lock នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ភ្លាមៗ។

9.2.3 ដំណោះស្រាយលាងសម្អាតដែលពនឺគួរតែត្រូវបានកំដៅឡើងវិញដើម្បីឱ្យនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់មុនពេលប្រើប្រាស់។

៩.២.៤ចំនួន:លេខរៀងរាល់មុខតំណែង microwell និងស្តង់ដារ និងគំរូទាំងអស់គួរតែត្រូវបានដំណើរការដោយស្ទួន។កត់ត្រាទីតាំងស្តង់ដារ និងគំរូ។

៩.២.៥Add ស្តង់ដារដំណោះស្រាយ/គំរូ និងដំណោះស្រាយអង្គបដិប្រាណ៖ បន្ថែម 50µl នៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារ ((កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ)) ឬគំរូដែលបានរៀបចំទៅអណ្តូងដែលត្រូវគ្នា។បន្ថែម 50µl នៃដំណោះស្រាយអង្គបដិប្រាណ (កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ)លាយ​ថ្នមៗ​ដោយ​អង្រួន​ចាន​ដោយ​ដៃ ហើយ​ញាត់​រយៈពេល 30 នាទី​នៅ​សីតុណ្ហភាព 37 ℃​ជាមួយ​គម្រប​។

៩.២.៦លាង៖ ដោះគម្របចេញថ្នមៗ ហើយសម្អាតអង្គធាតុរាវចេញពីអណ្តូង ហើយលាងជម្រះមីក្រូវ៉េវជាមួយនឹងដំណោះស្រាយលាងសម្អាត 250µl (ដំណោះស្រាយ3) នៅចន្លោះពេល 10s សម្រាប់ 4-5 ដង។ស្រូបទឹកដែលនៅសេសសល់ជាមួយក្រដាសស្រូបយក (ពពុះខ្យល់ដែលនៅសល់អាចត្រូវបានលុបចោលដោយប្រើព័ត៌មានជំនួយដែលមិនប្រើ) ។

៩.២.៧បន្ថែមអង់ស៊ីម conjugate: បន្ថែម 100ml នៃដំណោះស្រាយភ្ជាប់អង់ស៊ីម (កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ) ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ លាយថ្នមៗ និងភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទី នៅសីតុណ្ហភាព 37 ℃ ដោយគម្រប។ធ្វើជំហានលាងសម្អាតម្តងទៀត.

៩.២.៨ការលាបពណ៌៖ បន្ថែម 50µl នៃដំណោះស្រាយ A(កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ) និង 50µl នៃដំណោះស្រាយ B(កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ) ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។លាយ​ថ្នមៗ​ហើយ​ដាក់​រយៈពេល ១៥ នាទី​នៅ​សីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សា​សេ​ជាមួយ​គម្រប​។

៩.២.៩វាស់៖ បន្ថែម 50µl នៃដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ (កញ្ចប់ដែលបានផ្តល់ឱ្យ) ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។លាយថ្នមៗ និងវាស់ការស្រូបនៅកម្រិត 450nm (វាត្រូវបានណែនាំជារង្វាស់ជាមួយរលកពីរនៃ 450/630nm ។ អានលទ្ធផលក្នុងរយៈពេល 5 នាទីបន្ទាប់ពីបន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់)។

10. លទ្ធផល

10.1 ភាគរយស្រូបយក

តម្លៃ​មធ្យម​នៃ​តម្លៃ​ស្រូប​យក​ដែល​ទទួល​បាន​សម្រាប់​ស្ដង់ដារ និង​គំរូ​ត្រូវ​បាន​បែង​ចែក​ដោយ​តម្លៃ​ស្រូប​យក​នៃ​ស្ដង់ដារ​ទី​មួយ (សូន្យ​ស្ដង់ដារ) ហើយ​គុណនឹង 100% ។ដូច្នេះស្តង់ដារសូន្យត្រូវបានបង្កើតឡើងស្មើនឹង 100% ហើយតម្លៃស្រូបយកត្រូវបានដកស្រង់ជាភាគរយ។

B

ការស្រូបយក (%) = —— × 100%

B0

ខ - ស្តង់ដារស្រូបយក (ឬគំរូ)

B0 — ស្តង់ដារស្រូបយកសូន្យ

10.2 ខ្សែកោងស្តង់ដារ

---- ដើម្បីគូរខ្សែកោងស្តង់ដារ៖ យកតម្លៃស្រូបនៃស្តង់ដារជាអ័ក្ស y, លោការីតពាក់កណ្តាលនៃការប្រមូលផ្តុំនៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារ tylosin (ppb) ជាអ័ក្ស x ។

---- កំហាប់ tylosin នៃសំណាកនីមួយៗ (ppb) ដែលអាចអានបានពីខ្សែកោងក្រិតត្រូវបានគុណនឹងកត្តា Dilution ដែលត្រូវគ្នានៃសំណាកនីមួយៗដែលធ្វើតាម ហើយកំហាប់ជាក់ស្តែងនៃគំរូត្រូវបានទទួល។

សូម​កត់ចំណាំ:

កម្មវិធីពិសេសត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការវិភាគទិន្នន័យ ដែលអាចត្រូវបានផ្តល់ជូនតាមការស្នើសុំ។

11. ភាពរសើប ភាពត្រឹមត្រូវ និងភាពជាក់លាក់

ភាពរសើបនៃការធ្វើតេស្ត៖1.5 ភី

ដែនកំណត់នៃការរកឃើញ៖

ជាលិកាសត្វ…………………………………………………… ១.៥ ភី ទឹកដោះគោ…………………………………………………………..15ppb ភាព​ត្រឹមត្រូវ:

ជាលិកាសត្វ………………………………………………80±15%

ទឹកដោះគោ…………………………………..……….……80±10%

ភាពជាក់លាក់៖

មេគុណបំរែបំរួលនៃកញ្ចប់ ELISA គឺតិចជាង 10% ។

12. សេចក្តីជូនដំណឹង

12.1 តម្លៃមធ្យមនៃតម្លៃស្រូបទាញដែលទទួលបានសម្រាប់ស្តង់ដារ និងសំណាកគំរូនឹងត្រូវបានកាត់បន្ថយ ប្រសិនបើសារធាតុប្រតិកម្ម និងសំណាកមិនត្រូវបានគ្រប់គ្រងទៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។

12.2 កុំអនុញ្ញាតឱ្យ microwells ស្ងួតនៅចន្លោះជំហាន ដើម្បីជៀសវាងការផលិតឡើងវិញដែលមិនបានជោគជ័យ ហើយដំណើរការជំហានបន្ទាប់ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប៉ះរន្ធ microwells។

12.3 អ្រងួនសារធាតុនីមួយៗថ្នមៗមុនពេលប្រើ។

12.4 រក្សាស្បែករបស់អ្នកឱ្យឆ្ងាយពីដំណោះស្រាយបញ្ឈប់សម្រាប់វាគឺ 0.5MH₂SO₄ដំណោះស្រាយ។

12.5 កុំប្រើឧបករណ៍ហួសសម័យ។កុំផ្លាស់ប្តូរសារធាតុនៃបាច់ផ្សេងៗគ្នា បើមិនដូច្នោះទេ វានឹងទម្លាក់ភាពរសើប។

12.6 ទុកឧបករណ៍ ELISA នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ កុំបង្កក។បិទផ្លាកមីក្រូវ៉េវ ជៀសវាងពន្លឺព្រះអាទិត្យត្រង់ក្នុងអំឡុងពេលភ្ញាស់ទាំងអស់។ការគ្របដណ្តប់ចានមីក្រូទីតត្រូវបានណែនាំ។

12.7 ដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោមគួរតែត្រូវបានបោះបង់ចោលប្រសិនបើវាប្រែពណ៌។សារធាតុប្រតិកម្មអាចប្រែជាមិនល្អ ប្រសិនបើតម្លៃស្រូបទាញ (450/630nm) នៃស្តង់ដារសូន្យគឺតិចជាង 0.5 (A450nm<0.5)។

12.8 ប្រតិកម្ម​ពណ៌​ត្រូវ​ការ 15 នាទី​បន្ទាប់​ពី​ការ​បន្ថែម​ដំណោះ​ស្រាយ A និង​ដំណោះ​ស្រាយ B។ ហើយ​អ្នក​អាច​ពន្យារ​រយៈពេល​ភ្ញាស់​ដល់ 20 នាទី ឬ​ច្រើន​ជាង​នេះ ប្រសិន​បើ​ពណ៌​ស្រាល​ពេក​មិន​អាច​កំណត់​បាន។មិនត្រូវលើសពី 30 នាទីឡើយ ផ្ទុយទៅវិញ កាត់បន្ថយរយៈពេលភ្ញាស់ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។

12.9 សីតុណ្ហភាពប្រតិកម្មល្អបំផុតគឺ 37 ℃។សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ ឬទាបនឹងនាំទៅរកការផ្លាស់ប្តូរនៃភាពប្រែប្រួល និងតម្លៃស្រូបទាញ។

13. ការផ្ទុក

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក: 2-8 ℃។

រយៈពេលផ្ទុក៖ ១២ ខែ.