پيداوار

Tylosin جي مقدار جي تجزيي لاء مقابلي واري اينزيم Immunoassay کٽ

مختصر وضاحت:

Tylosin هڪ macrolide اينٽي بايوٽڪ آهي، جنهن کي بنيادي طور تي antibacterial ۽ مخالف mycoplasma طور استعمال ڪيو ويندو آهي.سخت MRLs قائم ڪيا ويا آهن ڇو ته هي دوا شايد ڪجهه گروپن ۾ سنجيده ضمني اثر پيدا ڪري ٿي.

هي ڪٽ هڪ نئين پراڊڪٽ آهي جيڪا ELISA ٽيڪنالاجي تي ٻڌل آهي، جيڪا عام اوزارن جي تجزيي جي مقابلي ۾ تيز، آسان، درست ۽ حساس آهي ۽ هڪ آپريشن ۾ صرف 1.5 ڪلاڪ جي ضرورت آهي، اها آپريشن جي غلطي ۽ ڪم جي شدت کي ڪافي حد تائين گهٽائي سگهي ٿي.


پيداوار جي تفصيل

پراڊڪٽ ٽيگ

مقابلي لاءِ اينزيم اميوناسائي ڪٽ

مقدار جو تجزيوٽائيلوسين


1. پس منظر

ٽائيلوسينهڪ macrolide اينٽي بايوٽڪ آهي، جنهن کي بنيادي طور تي antibacterial ۽ مخالف mycoplasma طور استعمال ڪيو ويندو آهي.سخت MRLs قائم ڪيا ويا آهن ڇو ته هي دوا شايد ڪجهه گروپن ۾ سنجيده ضمني اثر پيدا ڪري ٿي.

هي ڪٽ هڪ نئين پراڊڪٽ آهي جيڪا ELISA ٽيڪنالاجي تي ٻڌل آهي، جيڪا عام اوزارن جي تجزيي جي مقابلي ۾ تيز، آسان، درست ۽ حساس آهي ۽ هڪ آپريشن ۾ صرف 1.5 ڪلاڪ جي ضرورت آهي، اها آپريشن جي غلطي ۽ ڪم جي شدت کي ڪافي حد تائين گهٽائي سگهي ٿي.

2. ٽيسٽ اصول

هي کٽ اڻ سڌي طرح مقابلي واري ELISA ٽيڪنالاجي تي ٻڌل آهي.مائڪروٽيٽر ويلز کي ملائيندڙ اينٽيجن سان گڏ ڪيو ويو آهي.نموني ۾ Tylosin residue اينٽي باڊي لاءِ مائڪروٽيٽر پليٽ تي ٺهيل اينٽيجن سان مقابلو ڪري ٿو.اينزائم ليبل ٿيل اينٽي باڊي جي اضافي کان پوء، رنگ ڏيکارڻ لاء TMB سبسٽٽ استعمال ڪيو ويندو آهي.نموني جو جذب منفي طور تي ان ۾ موجود ٽائلوسين سان تعلق رکي ٿو، معياري وکر سان مقابلو ڪرڻ کان پوء، ڊيليشن فيڪٽر سان ضرب ڪيو وڃي، نموني ۾ ٽائلوسين جي رهائش جي مقدار کي حساب ڪري سگهجي ٿو.

3. ايپليڪيشنون

هي ڪٽ جانورن جي ٽشوز (ڪڪڙ، سور جو گوشت، بتھ) ۽ کير، ماکي، انڊا وغيره ۾ ٽائلوسين جي باقيات جي مقداري ۽ معيار جي تجزيي ۾ استعمال ٿي سگهي ٿو.

4. ڪراس ردعمل

ٽائيلوسين ……………………………………………………….. 100٪

Tilmicosin ……………………………………………… 2٪

5. گهربل مواد

5.1 سامان:

----Microtiter پليٽ spectrophotometer (450nm/630nm)

---- روٽري evaporator يا nitrogen drying اوزار

---- هڪجهڙائي ڪندڙ

---- شاڪر

---- سينٽرفيوج

---- تجزياتي توازن (انڊڪٽنس: 0.01g)

---- گريجوئيٽ پائپٽ: 10ml

----ربر پائيپٽ بلب

---- Volumetric flask: 10ml

----Polystyrene centrifuge ٽيوب: 50ml

---- مائڪروپيپيٽس: 20-200ml، 100-1000ml

250ml - گھڻائي

5.2 ريجنٽس:

----سوڊيم هائيڊروڪسائيڊ (NaOH، AR)

---- سوڊيم بائيڪاربونٽ (NaHCO3,اي آر)

---- سوڊيم ڪاربونيٽ (NaCO3، آر)

---- Trichloroacetic acid (AR)

---- Acetonitrile (AR)

---- ايٿيل ايڪٽيٽ (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

---- ديونائيزڊ پاڻي

6. کٽ جا اجزاء

l مائڪروٽيٽر پليٽ 96 ويلز سان گڏ اينٽيجن سان گڏ

l معياري حل (5 بوتلون، 1ml / بوتل)

0ppb، 0.5ppb، 1.5ppb، 4.5ppb، 13.5ppb

l اسپيڪنگ معياري ڪنٽرول: (1ml / بوتل)1 پي پي ايم

l اينزيم ڪنجوگيٽ 1ml …………………………….. ڳاڙهي ڪيپ

l اينٽي باڊي جو حل 7ml……………………….. گرين ڪيپ

l حل A 7ml……………………………… اڇي ٽوپي

l حل B 7ml………………………………..لال ڪيپ

l اسٽاپ حل 7ml.……………………….. پيلي ڪيپ

ايل 20 × مرڪوز ڌوئڻ جو حل 40ml

……………………………………… شفاف ٽوپي

ايل 4 × مرڪوز ڪڍڻ جو حل 50ml

……………………………………………… نيري ٽوپي

7. ريجنٽس تيار ڪرڻ:

حل 1:0.1mol / L NaOH حل

وزن 0.4g NaOH کان 100ml deionized پاڻي ۽ مڪمل طور تي ملايو.

حل 2: 1mol / L NaOH حل

وزن 4g NaOH کان 100ml ديونائيز ٿيل پاڻي ۽ مڪمل طور تي ملايو.

حل 3: ڪاربونيٽ بفر لوڻ

حل1: 0.2 ايم پي بي

51.6 گرام Na کي ٽوڙيو2ايڇ پي او4· 12 ايڇ2O، 8.7g جو NaH2PO4· 2 ايڇ2اي deionized پاڻي سان ۽ 1000ml کي dilute.

حل2: ڪڍڻ جو حل

1:1 (1:1 جي مقدار جي تناسب ۾ ڊيونائيزڊ پاڻي سان 2 × مرڪوز ڪڍڻ واري حل کي گھٽايومثال طور 10ml جو 2×extraction solution + 10ml deionized water)، جيڪو نموني ڪڍڻ لاء استعمال ڪيو ويندو،هي حل 4 ℃ تي 1 مهيني لاء محفوظ ڪري سگهجي ٿو.

حل3: ڌوئڻ جو حل

1:19 (1:19) جي مقدار جي تناسب ۾ 20 × مرڪوز واش حل کي ڊيونائيزڊ پاڻي سان ملايومثال طور 5ml جو 20×واش حل + 95ml deionized پاڻي)، جيڪو پليٽن کي ڌوئڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو.اهو حل 4 ℃ تي 1 مهيني لاء ذخيرو ٿي سگهي ٿو.

8. نموني تياريون

8.1 آپريشن کان اڳ نوٽيس ۽ احتياط:

(a) مھرباني ڪري تجربن جي عمل ۾ ھڪڙي-بند ٽوٽڪا استعمال ڪريو، ۽ ٽوٽڪا تبديل ڪريو جڏھن مختلف ريجينٽ جذب ڪريو.

(b) پڪ ڪريو ته سڀئي اوزار صاف آهن.

(c) ٽشو نموني کي منجمد ۾ رکو.

(d) تيار ڪيل نموني کي هڪ ڀيرو تي امتحان لاء استعمال ڪيو وڃي.

8.2 جانورن جو ٽشو (ڪڪڙ، سور جو گوشت، وغيره)

---- نموني کي homogenizer سان Homogenize؛

---- 2.0±0.05g homogenate کي 50ml پولسٽريئر سينٽرفيوج ٽيوب ۾ وٺو؛شامل ڪريو 2ml جو 0.2M PB (حل1)، گھلڻ لاءِ ڇڪيو، ۽ پوءِ 8ml ethyl acetate شامل ڪريو ۽ 3 منٽ لاءِ زور سان ڇڪيو؛

---- علحدگيءَ لاءِ سينٽرفيوج: 3000g / ماحوليات جي درجه حرارت / 5 منٽ.

---- سپرنيٽنٽ آرگنڪ مرحلي جي 4ml کي 10ml شيشي جي ٽيوب ۾ منتقل ڪريو، 50-60 ℃ پاڻي جي غسل سان نائيٽروجن گيس جي وهڪري هيٺ.

---- سڪل بچيل حصي کي 1ml n-hexane سان ٽوڙيو، 30s تائين وورٽيڪس کي ٽوڙڻ لاءِ، ۽ پوءِ 1ml extraction محلول شامل ڪريو (حل2)، 1 منٽ لاء ڀور.الڳ ڪرڻ لاء centrifuge: 3000g / ambient گرمي پد / 5min

---- supernatant n-hexane مرحلي کي هٽايو؛50μl substrate جي پاڻياٺ واري مرحلي لاءِ وٺو.

 

گھٽائڻ جو عنصر: 1

 

8.2 کير

---- خام کير جو 100μl نمونو وٺو، 900μl ڪڍڻ واري حل سان ملايو (حل2)، ۽ مڪمل طور تي ملايو.

---- پرکھ لاءِ تيار ڪيل حل جو 50μl وٺو.

 

گھٽائڻ جو عنصر: 10

 

9. امتحاني عمل

9.1 امتحان کان اڳ نوٽيس

9.1.1پڪ ڪريو ته سڀئي ريجنٽ ۽ مائڪرو ويلس سڀ ڪمري جي حرارت تي آهن (20-25 ℃).

9.1.22-8 تائين سڀني باقي ريجنٽس کي واپس ڏيوفوري طور تي استعمال ڪرڻ کان پوء.

9.1.3مائڪرو ويلز کي ڌوئڻ صحيح طور تي امتحان جي عمل ۾ هڪ اهم قدم آهي.اهو ELISA تجزيي جي ٻيهر پيداوار لاء اهم عنصر آهي.

9.1.4 ايروشني کي خالي ڪريو ۽ انڪيوبيشن دوران مائڪرو ويلز کي ڍڪيو.

9.2 امتحان جا مرحلا

9.2.1 30 منٽ کان وڌيڪ ڪمري جي گرمي پد (20-25 ℃) تي سڀ ريجينٽ ڪڍيو، استعمال ڪرڻ کان اڳ نرميءَ سان ڇڪيو.

9.2.2 گھربل مائيڪرو ويلز حاصل ڪريو ۽ باقي کي فوري طور تي 2-8℃ تي زپ لاڪ ٿيلھي ۾ واپس ڪريو.

9.2.3 استعمال ڪرڻ کان اڳ ٺهيل ڌوئڻ واري حل کي ڪمري جي حرارت تي ٻيهر گرم ڪيو وڃي.

9.2.4نمبر:هر مائڪرو ويل پوزيشن کي نمبر ڏنو وڃي ۽ سڀني معيارن ۽ نمونن کي نقل ۾ هلائڻ گهرجي.معيار ۽ نمونن جي پوزيشن کي رڪارڊ ڪريو.

9.2.5Aڊي ڊي معياري حل / نموني ۽ اينٽي باڊي حل: شامل ڪريو 50µl جو معياري حل((ڪٽ فراهم ڪيو)) يا تيار ڪيل نموني سان لاڳاپيل کوهن لاء.اينٽي باڊي حل جو 50µl شامل ڪريو (ڪٽ فراهم ڪيو).دستي طور پليٽ کي ھلائڻ سان ھلڪو ڪريو ۽ 30 منٽ لاءِ 37 ℃ تي ڍڪ سان گڏ ڪريو.

9.2.6ڌوئڻ: ڍڪ کي نرميءَ سان هٽايو ۽ کوهه مان مائع صاف ڪريو ۽ مائڪرو ويلز کي 250µl ڌوئيندڙ واش حل سان ڌوئي ڇڏيو (حل3) 10s جي وقفي تي 4-5 ڀيرا.رهجي ويل پاڻي کي جاذب پيپر سان جذب ڪريو (باقي ايئر بلبل کي غير استعمال ٿيل ٽپ سان ختم ڪري سگهجي ٿو).

9.2.7enzyme conjugate شامل ڪريوشامل ڪريو 100ml enzyme conjugate solution (ڪٽ فراهم ڪيو) هر هڪ کوهه ۾، نرميءَ سان ملايو ۽ 30 منٽن لاءِ 37 سينٽي گريڊ تي ڍڪ سان ڍڪيو.ڌوئڻ واري قدم کي ٻيهر ورجايو.

9.2.8رنگ سازي: شامل ڪريو 50µl جو حل A(ڪٽ فراهم ڪيو) ۽ 50µl جو حل B(ڪٽ فراهم ڪيو) هر هڪ کوهه ڏانهن.نرميءَ سان ملايو ۽ 15 منٽ لاءِ 37 ℃ تي ڍڪ سان گڏ ڪريو.

9.2.9ماپ: اسٽاپ حل جو 50µl شامل ڪريو(ڪٽ فراهم ڪيو) هر هڪ کوهه ڏانهن.نرميءَ سان ملايو ۽ جذب کي 450nm تي ماپيو (اهو تجويز ڪيل ماپ 450/630nm جي ڊبل ويولٿ سان. اسٽاپ حل شامل ڪرڻ کان پوءِ 5 منٽ اندر نتيجو پڙهو).

10. نتيجا

10.1 سيڪڙو جذب

معيار ۽ نمونن لاءِ حاصل ڪيل جاذب قدرن جي اوسط قدرن کي پھرين معيار (صفر معيار) جي جذبي قدر سان ورهايو ويو آھي ۽ 100٪ سان ضرب ڪيو ويو آھي.صفر معيار اهڙيءَ طرح 100٪ جي برابر ڪيو ويو آهي ۽ جذبي جا قدر فيصد ۾ بيان ڪيا ويا آهن.

B

جذب (٪) = --- × 100٪

B0

بي --- جاذب معيار (يا نمونو)

B0 - جذب صفر معيار

10.2 معياري وکر

---- معياري وکر ٺاھڻ لاءِ: معيار جي جذبي قدر کي y-axis جي طور تي وٺو، tylosin معيار جي حل (ppb) جي ڪنسنٽريشن جي نيم لاگارٿمڪ کي x-axis طور وٺو.

---- هر نموني جي ٽائيلوسين ڪنسنٽريشن (ppb)، جنهن کي ڪليبريشن وکر مان پڙهي سگهجي ٿو، هر نموني جي لاڳاپيل Dilution فيڪٽر سان ضرب ڪيو ويندو آهي، ۽ نموني جي حقيقي ڪنسنٽريشن حاصل ڪئي ويندي آهي.

مهرباني ڪري نوٽ ڪريو:

ڊيٽا جي تجزيو لاءِ خاص سافٽ ويئر تيار ڪيو ويو آهي، جيڪو درخواست تي مهيا ڪري سگهجي ٿو.

11. حساسيت، درستگي ۽ درستگي

ٽيسٽ حساسيت:1.5 پي بي بي

معلوم ڪرڻ جي حد:

جانورن جو بافتو ……………………………………………… 1.5ppb کير ………………………………………………………………..15 پي بي درستگي:

جانورن جو بافتو ……………………………………………… 80±15%

کير ……………………………………………………………………… 80 ± 10٪

درستي:

ELISA ڪٽ جي تبديلي جي کوٽائي 10٪ کان گهٽ آهي.

12. نوٽيس

12.1 معيارن ۽ نمونن لاءِ حاصل ڪيل جاذب قدرن جا اوسط قدر گھٽجي ويندا جيڪڏھن ريگينٽس ۽ نمونن کي ڪمري جي حرارت (20-25 ℃) تي ضابطو نه ڪيو ويو آھي.

12.2 مائيڪرو ويلز کي مرحلن جي وچ ۾ سڪي وڃڻ جي اجازت نه ڏيو ته جيئن ٻيهر پيداوار جي ناڪامي کان بچڻ لاءِ ۽ مائڪرو ويلز هولڊر کي ٽيپ ڪرڻ کان پوءِ فوري طور تي ايندڙ قدم کي هلائڻ.

12.3 استعمال ڪرڻ کان اڳ ھر ھڪ ريگينٽ کي ھلڪو ڪريو.

12.4 پنهنجي چمڙي کي اسٽاپ حل کان پري رکو ان لاءِ 0.5MH آهي2SO4حل.

12.5 پراڻا ڪٽ استعمال نه ڪريو.مختلف بيچ جي ريجنٽ کي تبديل نه ڪريو، ٻي صورت ۾ اهو حساسيت کي ڇڏي ڏيندو.

12.6 ELISA ڪٽس کي 2-8 ℃ تي رکو، منجمد نه ڪريو.باقي مائڪرو ويل پليٽس کي سيل ڪريو، سڀني انڪيوبيشن دوران سڌي سج جي روشني کان پاسو ڪريو.مائڪروٽيٽر پليٽ کي ڍڪڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.

12.7 Substrate حل کي ڇڏي ڏنو وڃي جيڪڏھن اھو رنگ بدلجي وڃي.ريجينٽ خراب ٿي سگھي ٿو جيڪڏھن جذبي قدر (450/630nm) صفر معيار جي 0.5 (A450nm<0.5) کان گھٽ آھي.

12.8 رنگن جي رد عمل کي 15 منٽ جي ضرورت آهي حل A ۽ محلول B کي شامل ڪرڻ کان پوءِ. ۽ توهان انڪيوبيشن جي وقت جي حد کي 20 منٽ يا ان کان وڌيڪ ڊگهو ڪري سگهو ٿا جيڪڏهن رنگ ايترو هلڪو آهي جو اندازو لڳايو وڃي.ڪڏهن به 30 منٽ کان وڌيڪ نه ڪريو، ان جي برعڪس، انڪيوبيشن جي وقت کي صحيح طور تي مختصر ڪريو.

12.9 بهترين ردعمل جي درجه حرارت 37 ℃ آهي.اعلي يا گهٽ درجه حرارت حساسيت ۽ جذباتي قدرن جي تبديلين کي ڏسندي.

13. اسٽوريج

اسٽوريج حالت: 2-8 ℃.

اسٽوريج جي مدت: 12 مهينا.

 


  • اڳيون:
  • اڳيون:

  • پنهنجو پيغام هتي لکو ۽ اسان ڏانهن موڪليو