제품

1. 배경

타이로신마크로라이드 계열의 항생제로 주로 항균 및 항마이코플라스마에 적용된다.이 약물이 특정 그룹에서 심각한 부작용을 유발할 수 있으므로 엄격한 MRL이 설정되었습니다.

이 키트는 ELISA 기술을 기반으로 한 신제품으로 일반적인 기기 분석에 비해 빠르고 간편하며 정확하고 민감하며 한 번의 작업에 1.5시간만 소요되어 작업 오류 및 작업 강도를 상당히 최소화할 수 있습니다.

2. 테스트 원리

이 키트는 간접 경쟁 ELISA 기술을 기반으로 합니다.마이크로타이터 웰은 커플링 항원으로 코팅됩니다.샘플의 Tylosin 잔기는 항체에 대해 microtiter plate에 코팅된 항원과 경쟁합니다.효소 표지된 항항체를 첨가한 후, TMB 기질을 사용하여 색상을 나타냅니다.샘플의 흡광도는 그 안에 잔류하는 타이로신과 음의 관계가 있으며 표준 곡선과 비교한 후 희석 계수를 곱하면 샘플의 타이로신 잔류량을 계산할 수 있습니다.

3. 신청

본 키트는 동물 조직(닭, 돼지, 오리) 및 우유, 꿀, 달걀 등의 타이로신 잔류물을 정량 및 정성 분석하는 데 사용할 수 있습니다.

4. 교차 반응

타이로신 ..................................................................100%

틸미코신 ..................................................<2%

5. 구비서류

5.1 장비:

----Microtiter 플레이트 분광 광도계(450nm/630nm)

----회전식 증발기 또는 질소 건조용 기구

----균질화기

----셰이커

----원심분리기

----분석 저울(인덕턴스: 0.01g)

----졸업된 피펫: 10ml

----고무 피펫 전구

----부피 플라스크: 10ml

----폴리스티렌 원심 분리기 튜브: 50ml

----마이크로피펫: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-멀티파이펫

5.2 시약:

----수산화나트륨(NaOH, AR)

----중탄산나트륨(NaHCO_3,아칸소)

---- 탄산나트륨(Na2CO₃, 아칸소)

----트리클로로아세트산(AR)

---- 아세토니트릴(AR)

----에틸 아세테이트(AR)

┅┅n-헥산(AR)

----탈이온수

6. 키트 구성품

l 항원으로 코팅된 96개의 웰이 있는 Microtiter plate

l 표준용액(5병, 1ml/병)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l 스파이킹 표준 컨트롤: (1ml/병)1ppm

l 효소접합체 1ml…………..……..…빨간색캡

l 항체 용액 7ml …………………녹색 모자

l 솔루션 A 7ml

l 솔루션 B 7ml ..................................................빨간 모자

l 정지 용액 7ml.………….…….노란색 캡

l 20×농축 세척액 40ml

………………………………투명 캡

l 4×농축추출액 50ml

......................................................... 파란색 모자

7. 시약 준비:

해결책 1:0.1mol/L NaOH 용액

0.4g NaOH와 100ml 탈이온수를 계량하고 완전히 혼합합니다.

솔루션 2: 1mol/L NaOH 용액

NaOH 4g과 탈이온수 100ml의 무게를 측정하고 완전히 섞습니다.

해결책 3: 탄산완충염

해결책1: 0.2백만PB

Na 51.6g을 녹인다.₂HPO₄·12시간₂O, NaH 8.7g₂PO₄·2시간₂O 탈이온수를 사용하여 1000ml로 희석합니다.

해결책2: 추출 용액

1:1의 부피비로 탈이온수로 2× 농축 추출 용액을 희석한다(예: 2×추출 용액 10ml + 탈이온수 10ml), 샘플 추출에 사용됩니다.이 용액은 4℃에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다..

해결책3: 세척액

1:19의 부피 비율로 탈이온수를 사용하여 20× 농축 세척 용액을 희석합니다(예: 20x 세척액 5ml + 탈이온수 95ml), 접시 세척에 사용됩니다.이 용액은 4℃에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다..

8. 샘플 준비

8.1 작동 전 주의 사항 및 주의 사항:

(a) 실험 과정에서 일회용 팁을 사용하고 다른 시약을 흡수할 때 팁을 교체하십시오.

(b) 모든 기구가 깨끗한지 확인하십시오.

(c) 조직 샘플을 동결 상태로 유지합니다.

(d) 준비된 검체는 즉시 정량에 사용하여야 한다.

8.2 동물 조직(닭, 돼지 등)

----균질기로 시료를 균질화합니다.

----균질액 2.0±0.05g을 50ml 폴리스티렌 원심분리기 튜브에 넣습니다.0.2M PB 2ml 추가(해결책1) 흔들어 녹인 후 에틸아세테이트 8ml를 넣고 3분 동안 세게 흔든다.

----분리용 원심분리기: 3000g / 상온 / 5min.

---- 상등액 유기상 4ml를 10ml 유리관에 옮기고 질소 기류 하에서 50-60℃ 수조에서 건조시킨다.

----건조한 찌꺼기를 n-헥산 1ml로 녹이고 30초간 vortex하여 녹인 후 추출용액 1ml를 넣는다.해결책2) 1분 동안 vortex한다.분리용 원심분리기: 3000g / 상온 / 5분

----상등액 n-헥산 상을 제거하고;분석을 위해 기질 수성상의 50μl를 취하십시오.

희석배수: 1

8.2 우유

----원유 시료 100μl를 취하여 추출액 900μl와 혼합(해결책2) 완전히 섞는다.

---- 분석을 위해 준비된 용액 50μl를 취하십시오.

희석 배율: 10

9. 분석 과정

9.1 분석 전 주의사항

9.1.1모든 시약과 마이크로웰은 모두 실온(20~25℃)에 있어야 합니다.

9.1.2모든 나머지 시약을 2-8로 되돌립니다.℃사용 직후.

9.1.3마이크로웰을 올바르게 세척하는 것은 분석 과정에서 중요한 단계입니다.이는 ELISA 분석의 재현성에 중요한 요소입니다.

9.1.4A배양하는 동안 빛을 무효화하고 마이크로웰을 덮습니다.

9.2 분석 단계

9.2.1 모든 시약을 실온(20-25℃)에서 30분 이상 꺼내어 가볍게 흔들어 사용한다.

9.2.2 필요한 마이크로웰을 꺼내고 나머지는 즉시 2-8℃의 지퍼백에 다시 넣습니다.

9.2.3 희석된 세척액은 사용하기 전에 상온으로 데워야 합니다.

9.2.4숫자:모든 마이크로웰 위치에 번호가 매겨져 있으며 모든 표준 및 샘플은 이중으로 실행되어야 합니다.표준 및 샘플 위치를 기록합니다.

9.2.5Add 표준 용액/시료 및 항체 용액: 표준용액((키트 제공)) 또는 샘플을 해당 웰에 준비합니다.50µl의 항체 용액(키트 제공).플레이트를 수동으로 흔들어 부드럽게 혼합하고 37℃에서 30분 동안 뚜껑을 덮은 상태로 배양합니다.

9.2.6씻다: 덮개를 부드럽게 제거하고 웰에서 액체를 맑게 한 다음 마이크로웰을 250µl의 희석된 세척액으로 헹굽니다(해결책3) 10초 간격으로 4~5회 실시한다.흡수지로 남은 수분을 흡수합니다(남은 기포는 사용하지 않은 팁으로 제거할 수 있습니다).

9.2.7효소 컨쥬게이트 추가: 효소접합액 100ml를 첨가(키트 제공) 각 웰에 천천히 혼합하고 뚜껑을 덮고 37℃에서 30분 동안 배양합니다.세척 단계를 다시 반복하십시오..

9.2.8천연색: 50µl 용액 A(키트 제공) 및 용액 B(키트 제공) 각 웰에.부드럽게 혼합하고 37℃에서 15분 동안 뚜껑을 덮은 상태로 배양합니다.

9.2.9측정하다: 정지용액 50µl를 넣는다(키트 제공) 각 웰에.부드럽게 혼합하고 450nm에서 흡광도를 측정합니다.

10. 결과

10.1 백분율 흡광도

표준물질과 시료에 대해 얻은 흡광도 값의 평균값을 첫 번째 표준물질(zero standard)의 흡광도 값으로 나누고 100%를 곱합니다.따라서 제로 표준은 100%와 같게 만들고 흡광도 값은 백분율로 표시됩니다.

B

흡광도(%) = —— ×100%

B0

B ——흡광도 표준(또는 시료)

B0 ——흡광도 영점 기준

10.2 표준 곡선

----표준 곡선을 그리려면: 표준의 흡광도 값을 y축으로, 타이로신 표준 용액(ppb) 농도의 반로그를 x축으로 합니다.

----검량선에서 읽을 수 있는 각 샘플의 타이로신 농도(ppb)에 각 샘플의 해당 희석 계수를 곱하여 샘플의 실제 농도를 얻습니다.

주의하십시오:

요청 시 제공할 수 있는 데이터 분석을 위한 특수 소프트웨어가 개발되었습니다.

11. 감도, 정확도 및 정밀도

테스트 감도:1.5ppb

탐지 한계:

동물 조직 .................................................. 1.5ppb 우유 ..................................................................................15ppb 정확성:

동물 조직 ..................................................80±15%

우유 ..................................................80±10%

정도:

ELISA 키트의 변동 계수는 10% 미만입니다.

12. 공지사항

12.1 시약과 시료가 실온(20-25℃)으로 조절되지 않으면 표준물질과 시료에 대해 얻은 흡광도 값의 평균값이 감소합니다.

12.2 실패한 재현성을 피하기 위해 단계 사이에 마이크로웰이 건조되지 않도록 하고 마이크로웰 홀더를 탭한 직후 다음 단계를 작동합니다.

12.3 사용하기 전에 각 시약을 부드럽게 흔든다.

12.4 정지 용액에서 피부를 멀리 유지하십시오. 0.5MH₂SO₄해결책.

12.5 오래된 키트를 사용하지 마십시오.다른 배치의 시약을 교환하지 마십시오. 그렇지 않으면 감도가 떨어집니다.

12.6 ELISA 키트는 2-8℃에서 보관하고 동결하지 마십시오.나머지 마이크로웰 플레이트를 밀봉하고, 모든 배양 동안 직사광선을 피하십시오.마이크로타이터 플레이트를 덮는 것이 좋습니다.

12.7 기질 용액이 변색되면 버려야 합니다.제로 스탠다드의 흡광도 값(450/630nm)이 0.5 미만(A450nm<0.5)이면 시약이 불량이 될 수 있습니다.

12.8 착색 반응은 용액 A와 용액 B를 첨가한 후 15분이 소요됩니다. 그리고 색상이 너무 옅어서 판단할 수 없는 경우 배양 시간 범위를 20분 이상으로 연장할 수 있습니다.30분을 넘지 말고, 반대로 배양 시간을 적절하게 줄이십시오.

12.9 최적 반응온도는 37℃이다.온도가 높거나 낮으면 감도 및 흡광도 값이 변경됩니다.

13. 보관

보관 조건: 2-8℃.

보관 기간: 12개월.