produkt

Kompetitivt enzymimmunoanalyskit för kvantitativ analys av tylosin

Kort beskrivning:

Tylosin är ett makrolidantibiotikum, som huvudsakligen används som antibakteriellt och antimykoplasma.Strikta MRL har fastställts eftersom detta läkemedel kan leda till allvarliga biverkningar i vissa grupper.

Detta kit är en ny produkt baserad på ELISA-teknologi, som är snabb, enkel, exakt och känslig jämfört med vanliga instrumentanalyser och bara behöver 1,5 timmar i en operation, det kan avsevärt minimera driftfel och arbetsintensitet.


Produktdetalj

Produkttaggar

Konkurrenskraftigt enzymimmunanalyssats för

Kvantitativ analys avTylosin


1. Bakgrund

Tylosinär ett makrolidantibiotikum, som huvudsakligen används som antibakteriellt och antimykoplasma.Strikta MRL har fastställts eftersom detta läkemedel kan leda till allvarliga biverkningar i vissa grupper.

Detta kit är en ny produkt baserad på ELISA-teknologi, som är snabb, enkel, exakt och känslig jämfört med vanliga instrumentanalyser och bara behöver 1,5 timmar i en operation, det kan avsevärt minimera driftfel och arbetsintensitet.

2. Testprincip

Detta kit är baserat på indirekt konkurrenskraftig ELISA-teknologi.Mikrotiterbrunnarna är belagda med kopplingsantigen.Tylosinrester i provet konkurrerar med antigenet belagt på mikrotiterplattan om antikroppen.Efter tillsats av enzymmärkt anti-antikropp används TMB-substrat för att visa färgen.Absorbansen av provet är negativt relaterat till tylosin som finns i det, efter jämförelse med standardkurvan, multiplicerat med utspädningsfaktorn, kan tylosinrestmängden i provet beräknas.

3. Ansökningar

Detta kit kan användas i kvantitativ och kvalitativ analys av tylosinrester i djurvävnad (kyckling, fläsk, anka) och mjölk, honung, ägg, etc.

4. Korsreaktioner

Tylosin………………………………………………………..100 %

Tilmicosin………………………………………………………<2 %

5. Material som krävs

5.1 Utrustning:

---- Mikrotiterplattspektrofotometer (450nm/630nm)

---- Roterande förångare eller kvävetorkande instrument

----homogenisator

----Shaker

----Centrifug

----Analytisk balans (induktans: 0,01g)

---- Graderad pipett: 10ml

---- Gummipipett glödlampa

----Volymmetrisk kolv: 10ml

----Polystyrencentrifugrör: 50ml

----Mikropipetter: 20-200ml, 100-1000ml

250 ml multipipett

5.2 Reagenser:

----Natriumhydroxid (NaOH, AR)

----Natriumbikarbonat (NaHCO3,AR)

---- Natriumkarbonat (NaCO3, AR)

----Triklorättiksyra (AR)

---- Acetonitril (AR)

---- Etylacetat (AR)

┅┅n-hexan (AR)

----Avjoniserat vatten

6. Kitkomponenter

l Mikrotiterplatta med 96 brunnar belagd med antigen

l Standardlösningar (5 flaskor, 1 ml/flaska)

0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb

l Spiking standardkontroll: (1ml/flaska)1 ppm

l Enzymkonjugat 1ml…………………..…..…röd lock

l Antikroppslösning 7ml……………….……grönt lock

l Lösning A 7ml………………………….….……vitt lock

l Lösning B 7ml…………………………………………..röd lock

l Stopplösning 7ml.……………….……….gult lock

l 20×koncentrerad tvättlösning 40ml

…………………………………..…genomskinlig keps

l 4×koncentrerad extraktionslösning 50ml

……………………………………………….blå keps

7. Reagensberedning:

Lösning 1:0,1 mol/L NaOH-lösning

Väg 0,4 g NaOH till 100 ml avjoniserat vatten och blanda helt.

Lösning 2: 1mol/L NaOH-lösning

Väg 4 g NaOH till 100 ml avjoniserat vatten och blanda helt.

Lösning 3: Karbonatbuffertsalt

Lösning1: 0,2M PB

Lös 51,6 g Na2HPO4·12H2O, 8,7 g NaH2PO4·2H2O med avjoniserat vatten och späd till 1000ml.

Lösning2: Extraktionslösning

Späd den 2xkoncentrerade extraktionslösningen med avjoniserat vatten i volymförhållandet 1:1(t.ex. 10ml 2×extraktionslösning + 10ml avjoniserat vatten), som kommer att användas för provextraktion,denna lösning kan lagras vid 4 ℃ i 1 månad.

Lösning3: Tvättlösning

Späd den 20×koncentrerade tvättlösningen med avjoniserat vatten i volymförhållandet 1:19(t.ex. 5ml 20×tvättlösning + 95ml avjoniserat vatten), som kommer att användas för att tvätta tallrikarna.Denna lösning kan lagras vid 4 ℃ i 1 månad.

8. Provförberedelser

8.1 Meddelande och försiktighetsåtgärder före användning:

(a) Använd engångsspetsar i experimentprocessen och byt spetsarna när du absorberar olika reagens.

(b) Se till att alla instrument är rena.

(c) Förvara vävnadsprovet i frys.

(d) Förberedt prov ska användas för analys på en gång.

8.2 Djurvävnad (kyckling, fläsk, etc)

---- Homogenisera provet med homogenisator;

----Ta 2,0±0,05 g homogenat i ett 50 ml polystyrencentrifugrör;tillsätt 2ml 0,2M PB (lösning1) skaka för att lösas upp och tillsätt sedan 8 ml etylacetat och skaka kraftigt i 3 minuter;

----Centrifuge för separation: 3000g / omgivningstemperatur / 5min.

---- Överför 4 ml av den överstående organiska fasen till ett 10 ml glasrör, torka med 50-60 ℃ vattenbad under kvävgasström;

---- Lös upp den torra resten med 1 ml n-hexan, vortexa i 30 sekunder för att lösas upp och tillsätt sedan 1 ml extraktionslösning (lösning2), vortexa i 1 min.centrifug för separation: 3000g / omgivningstemperatur / 5min

----Ta bort supernatanten av n-hexanfasen;ta 50 μl av substratets vattenhaltiga fas för analys.

 

Utspädningsfaktor: 1

 

8.2 Mjölk

----Ta 100 μl råmjölkprov, blanda med 900 μl extraktionslösning (lösning2) och blanda helt.

----Ta 50 μl av den beredda lösningen för analys.

 

Utspädningsfaktor: 10

 

9. Analysprocess

9.1 Meddelande före analys

9.1.1Se till att alla reagenser och mikrobrunnar har rumstemperatur (20-25 ℃).

9.1.2Återställ alla övriga reagenser till 2-8omedelbart efter användning.

9.1.3Att tvätta mikrobrunnarna korrekt är ett viktigt steg i analysprocessen;det är den avgörande faktorn för reproducerbarheten av ELISA-analysen.

9.1.4 Atöm ljuset och täck över mikrobrunnarna under inkubationen.

9.2 Analyssteg

9.2.1 Ta ut alla reagenser vid rumstemperatur (20-25 ℃) i mer än 30 minuter, skaka försiktigt före användning.

9.2.2 Ta ut de mikrobrunnar som behövs och lägg tillbaka resten i zip-lock-påsen vid 2-8 ℃ omedelbart.

9.2.3 Den utspädda tvättlösningen bör återuppvärmas till rumstemperatur före användning.

9.2.4Siffra:Numrerade varje mikrobrunnspositioner och alla standarder och prover ska köras i duplikat.Anteckna standarder och provpositioner.

9.2.5Add standardlösning/prov och antikroppslösning: Tillsätt 50 µl standardlösning ((kit medföljer)) eller preparerat prov till motsvarande brunnar.Tillsätt 50 µl antikroppslösning (kit medföljer).Blanda försiktigt genom att skaka plattan manuellt och inkubera i 30 minuter vid 37 ℃ med lock.

9.2.6Tvätta: Ta bort locket försiktigt och rengör vätskan ur brunnarna och skölj mikrobrunnarna med 250 µl utspädd tvättlösning (lösning3) med 10s intervall i 4-5 gånger.Absorbera restvattnet med absorberande papper (resten luftbubbla kan elimineras med oanvänd spets).

9.2.7Tillsätt enzymkonjugat: Tillsätt 100 ml enzymkonjugatlösning (kit medföljer) till varje brunn, blanda försiktigt och inkubera i 30 minuter vid 37 ℃ med lock.Upprepa tvättsteget igen.

9.2.8Färgsättning: Tillsätt 50 µl lösning A(kit medföljer) och 50 µl lösning B(kit medföljer) till varje brunn.Blanda försiktigt och inkubera i 15 minuter vid 37 ℃ med lock.

9.2.9Mäta: Tillsätt 50 µl av stopplösningen (kit medföljer) till varje brunn.Blanda försiktigt och mät absorbansen vid 450 nm (det rekommenderas att mäta med den dubbla våglängden på 450/630 nm. Läs resultatet inom 5 minuter efter tillsats av stopplösning).

10. Resultat

10.1 Procentuell absorbans

Medelvärdena för absorbansvärdena som erhållits för standarderna och proverna divideras med absorbansvärdet för den första standarden (nollstandard) och multipliceras med 100 %.Nollstandarden görs således lika med 100 % och absorbansvärdena anges i procent.

B

Absorbans (%) = —— ×100 %

B0

B ——absorbansstandard (eller prov)

B0 ——absorbans noll standard

10.2 Standardkurva

----Att rita en standardkurva: Ta absorbansvärdet för standarder som y-axel, semilogaritmisk av koncentrationen av tylosinstandardlösningen (ppb) som x-axel.

----Tylosinkoncentrationen för varje prov (ppb), som kan avläsas från kalibreringskurvan, multipliceras med motsvarande utspädningsfaktor för varje prov som följs, och den faktiska koncentrationen av provet erhålls.

Snälla lägg märke till:

speciell programvara har utvecklats för dataanalys, som kan tillhandahållas på begäran.

11. Känslighet, noggrannhet och precision

Testkänslighet:1,5 ppb

Detektionsgräns:

Animalisk vävnad……………………………….…………………1.5ppb Mjölk…………………………………………………………………..15ppb Noggrannhet:

Djurvävnad………………………………………………80±15 %

Mjölk…………………………………………..……….……80±10 %

Precision:

Variationskoefficienten för ELISA-kitet är mindre än 10 %.

12. Meddelande

12.1 Medelvärdena för absorbansvärdena som erhållits för standarderna och proverna kommer att reduceras om reagenserna och proverna inte har reglerats till rumstemperatur (20-25 ℃).

12.2 Låt inte mikrobrunnar torka mellan stegen för att undvika misslyckad reproducerbarhet och kör nästa steg omedelbart efter att ha knackat på mikrobrunnars hållare.

12.3 Skaka varje reagens försiktigt före användning.

12.4 Håll huden borta från stopplösningen för den är 0,5MH2SO4lösning.

12.5 Använd inte kiten föråldrade.Byt inte ut reagenserna från olika satser, annars kommer det att minska känsligheten.

12.6 Förvara ELISA-kiten vid 2-8 ℃, frys inte.Försegla vila mikrobrunnsplattor, Undvik rakt solljus under alla inkubationer.Det rekommenderas att täcka mikrotiterplattorna.

12.7 Substratlösning bör överges om den får färg.Reagenserna kan bli dåliga om absorbansvärdet (450/630nm) för nollstandarden är mindre än 0,5 (A450nm<0,5).

12.8 Färgningsreaktionen behöver 15 minuter efter tillsats av lösning A och lösning B. Och du kan förlänga inkubationstiden till 20 minuter eller mer om färgen är för ljus för att kunna bestämmas.Överskrid aldrig 30min, tvärtom, förkorta inkubationstiden ordentligt.

12.9 Den optimala reaktionstemperaturen är 37℃.Högre eller lägre temperatur kommer att leda till förändringar av känslighets- och absorbansvärden.

13. Förvaring

Lagringsskick: 2-8℃.

Lagringstid: 12 månader.

 


  • Tidigare:
  • Nästa:

  • Skriv ditt meddelande här och skicka det till oss